一种分泌结核分枝杆菌ESAT6蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株、其抗体及应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种分泌抗早期分泌抗原靶6（ESAT6）单克隆抗体的杂交瘤细胞株8G4、单克隆抗体MAb 8G4及其应用。所述结核分枝杆菌ESAT6单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C2019287的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。该单克隆抗体MAb 8G4具有效价高、特异性好的优势，基于此建立的竞争ELISA检测试剂盒方法具有良好的灵敏度和特异性，可同时检测针对多种宿主的结核分枝杆菌复合群感染引起的结核病，操作简便，具有应用于结核病检测的价值。

【技术实现步骤摘要】
一种分泌结核分枝杆菌ESAT6蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株、其抗体及应用
本专利技术涉及一种生物
，特别是涉及一种分泌结核分枝杆菌ESAT6蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株、其抗体及应用。
技术介绍
结核病是由结核分枝杆菌复合群(Mycobacteriumtuberculosiscomplex,MTC)感染引起的一种慢性、消耗性传染疾病，同时也是一种可以引起动物和人类共同感染的人兽共患疾病。结核分枝杆菌复合群主要包括：结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、牛分枝杆菌(M.bovis)、非洲分枝杆菌(M.africanum)、田鼠分枝杆菌(M.microti)等，其中结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)是重要人类病原体，可引起结核病；麻风分枝杆菌(Mycobacteriumleprae)引起麻风病；鸟分枝杆菌(M.avium)和其他非典型分枝杆菌经常感染艾滋病人，是免疫抑制病人的致病菌；牛分枝杆菌则是令人类和家畜感染结核病的主要源头，其不仅可以使牛患病，也可以让人患结核病。近年来，世界范围内艾滋病的流行及其耐药性的日益严重，结核病流行趋势又有所回升。结核病仍是一个全球性的需要高度重视的公共卫生和社会问题。结核分枝杆菌早期分泌性6kDa靶抗原(ESAT6)是从结核分枝杆菌早期培养滤液蛋白中分离出的一种小分子量蛋白，仅存在于牛分枝杆菌和结核分枝杆菌中，在所有BCG菌株中均缺失，是与结核分枝杆菌毒力和致病力相关的一种分泌性蛋白。ESAT6蛋白可刺激机体产生强烈的T细胞免疫应答并释放高水平的IFN-γ，是结核分枝杆菌感染早期阶段宿主细胞识别的主要靶抗原，可影响宿主的信号通路作用。鉴于以上特性，ESAT6蛋白已经成为结核病预防与控制研究的热点，有望发展成为结核病预防和诊断的最佳候选疫苗和特异性试剂。结核菌素皮肤试验(TST)是目前检测结核分枝杆菌感染的主要手段，但是这种方法缺乏一定的特异性，易受到其他分枝杆菌抗原间交叉反应的影响，还会受到BCG接种的影响而使得检测结果呈现假阳性。结核分枝杆菌特异性抗原介导的IFN-γ释放试验具有较高的特异性，但此方法特异性的高低与所选用的刺激原即结核分枝杆菌相关抗原有关，且检测结果存在一定的假阳性，检测的准确性不强。现有方法的缺陷及不足，以及各种免疫学检测诊断方法的建立和应用，都需要应用到高特异性、高亲和力的单克隆抗体。因此，ESAT6的研究及其抗体的研制具有较高的价值。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种分泌ESAT6单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，以及该杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体在免疫检测领域的应用。所述杂交瘤细胞株分泌的抗ESAT6的单克隆抗体效价高，其试剂盒可单独用于结核病检测，也可以作为一种补充检测方法与其它方法联合使用，1小时内即可获得检测结果，用于多种宿主结核病的检测。本专利技术第一方面提供了一种分泌ESAT6单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞8G4或其传代细胞株，所述杂交瘤细胞株8G4保藏号为CCTCCNO:C2019287。本专利技术第二方面提供一种ESAT6单克隆抗体8G4，其由上述杂交瘤细胞株或其传代细胞株产生。本专利技术第三方面提供一种抗ESAT6抗体，所述抗ESAT6抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述轻链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的CDR-L1、氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的CDR-L2、氨基酸序列如SEQIDNO.3所示的CDR-L3，所述重链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQIDNO.6所示的CDR-H1、氨基酸序列如SEQIDNO.7所示的CDR-H2、氨基酸序列如SEQIDNO.8所示的CDR-H3。本专利技术第四方面提供一种多核苷酸，编码前述的抗ESAT6抗体的重链可变区和/或轻链可变区或全长氨基酸。本专利技术第五方面提供一种构建体，含有所述的多核苷酸。本专利技术第六方面提供一种抗体的表达系统，所述表达系统含有前述的构建体或基因组中整合有外源的前述的多核苷酸。本专利技术第七方面提供前述抗ESAT6抗体的制备方法，包括如下步骤：在适合表达所述抗体的条件下，培养前述抗体的表达系统，从而表达出所述的抗体，纯化分离出所述的抗体；和/或，由保藏号为CCTCCNO:C2019287的杂交瘤细胞株或其传代细胞株产生。本专利技术第八方面提供前述抗ESAT6抗体在制备结核病的检测试剂中的用途。本专利技术第九方面提供一种用于快速检测结核病的cELISA检测试剂盒，所述检测试剂盒包括如前述抗ESAT6抗体。本专利技术提出由前述杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体或其保守性突变体或其活性片段。本专利技术的试剂盒，试剂或药剂中，其所述的单克隆抗体，其保守性突变体或其活性片段是生物标记或化学标记的。本专利技术的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有效价高、特异性好、与天然抗原的亲和力强的优势，可用于结核病的检测。基于此建立的竞争ELISA检测试剂盒，可以直接对结核分枝杆菌感染的血清样品进行检测，具有较好的灵敏度及特异性。采用本专利技术的检测试剂盒操作简便，极大地缩短了检测时间，可以广泛应用于免疫学研究，用作结核分枝杆菌样品的检测及结核病的临床诊断和流行病学的调查。附图说明图1：cELISA灵敏度实验。图2：cELISA检测方法截止值的确定。图3：cELISA检测方法的约登指数。图4：cELISA检测试剂盒检测兔血清结果。图5：cELISA检测试剂盒检测牛血清结果。图6：cELISA检测试剂盒检测人血清结果。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。本专利技术的目的是提供一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的抗ESAT6抗体，以及该杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体在免疫检测方面的应用。本专利技术的杂交瘤细胞株或其传代细胞株，申请人于2019年10月31日在中国典型培养物保藏中心(ChinaCenterforTypeCultureCollection，简称CCTCC)(湖北省武汉市武昌珞珈山，武汉大学，保藏中心)对其进行了保藏，保藏号CCTCCNO:C2019287。分类命名为B细胞杂交瘤8G4。本专利技术的抗ESAT6抗体，由保藏号为CCTCCNO:C2019287的杂交瘤细胞株或其传代细胞株产生。本专利技术涉及一种本专利技术所述的杂交瘤细胞株8G4或其传代细胞株分泌产生的单克隆抗体MAb8G4。本专利技术的单克隆抗体MAb8G4具有很高的效价，效价达1:81920000。本专利技术提供的抗ESAT6抗体，所述抗ESAT6抗体包括重链可变区和轻链可变区。CDR(互补决定区，complementaritydeterminingregion)通常指抗体中在空间结构上可以与抗原决定簇形成互补的区域。其中重链可变区通常包括三个互补决定区，即CDR-H1、CDR-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分泌抗ESAT6单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株8G4或其传代细胞株，其保藏号为CCTCC NO:C2019287。/n

【技术特征摘要】
1.一种分泌抗ESAT6单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株8G4或其传代细胞株，其保藏号为CCTCCNO:C2019287。


2.一种抗ESAT6单克隆抗体MAb8G4，其由根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。


3.一种抗ESAT6抗体，所述抗ESAT6抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述轻链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的CDR-L1、氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的CDR-L2、氨基酸序列如SEQIDNO.3所示的CDR-L3，所述重链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQIDNO.6所示的CDR-H1、氨基酸序列如SEQIDNO.7所示的CDR-H2、氨基酸序列如SEQIDNO.8所示的CDR-H3。


4.如权利要求3所述的抗ESAT6抗体，其特征在于，所述抗ESAT6抗体为单克隆抗体；
和/或，所述抗ESAT6抗体的轻链可变区的氨基酸序列包括如SEQIDNO.4所示的氨基酸序列；
和/或，所述抗ESAT6抗体的重链...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦新安，王海宁，陈祥，李昕，徐正中，解晓莉，孟闯，顾丹，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32