一种高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体、其制备方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种能够高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体、其制备方法及用途。所述疫苗载体是经由基因工程化表达B细胞活化相关的分子的K562细胞，所述B细胞活化相关的分子包括CD40L、IL‑4、IL‑21、BAFF、霍乱毒素B亚单位或CXCR5以及上述不同因子的组合。此外，所述疫苗载体能够有效活化B细胞，提升B细胞的生存，并促使B细胞分泌抗体。可很好的搭载抗原，在体内也可有效的刺激B细胞成熟分化从而诱导有效的抗体应答，使其在预防和降低病毒感染中有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体、其制备方法及用途
本专利技术涉及疫苗领域，特别涉及一种能够高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体、其制备方法及用途。
技术介绍
疫苗是一种非常安全有效的对抗或者清除传染性疾病的方式。开发出一种能够进一步有效的提高抗体应答水平的疫苗载体，是疫苗研究领域中非常重要的目标。B细胞是体液免疫应答中至关重要的一群淋巴细胞，其在适应性免疫应答中的主要功能是分泌抗体，还能作为抗原递呈细胞发挥递呈抗原和分泌细胞因子的功能。B细胞可将抗原提呈给T辅助细胞(Th)，若活化的T细胞识别B细胞提呈的肽段，则通过其自身的CD40配体与B细胞表达的CD40受体相结合进而激活B细胞。与此同时，辅助性T淋巴细胞亚群1(Th1)分泌IL-2,辅助性T淋巴细胞亚群2(Th2)分泌IL-4，滤泡辅助性T细胞(Tfh)分泌IL-21,直接刺激B细胞，三者联合诱导B细胞增殖分化并促进抗体类型转换，最终分化成浆细胞和记忆B细胞。浆细胞可分泌大量的抗体并作用于抗原靶标。因此，如能开发一种搭载B细胞活化相关的分子与目标抗原的疫苗载体，有望高效活化体内B细胞，诱导出强劲的体液免疫应答。基于人肿瘤细胞的人工抗原提呈细胞(artificialantigenpresentingcell,aAPC)系统，已广泛用于扩增肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)，其中最常用的aAPC是人红白血病K562细胞株。它缺乏内源性表达HLA-A、B和DR分子，经基因工程表达外源性HLA-A、肿瘤抗原与其他免疫分子，可用于扩增肿瘤免疫治疗所需的抗原非特异性或特异性T细胞。本专利技术充分利用K562细胞的特性，搭载B细胞活化相关的分子，可在体外维持B细胞的生存与功能；搭载目标抗原后可作为一种有效的疫苗载体，诱导机体产生高效体液免疫应答。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体、其制备方法及用途。一方面，本专利技术提供一种高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述疫苗载体是经由基因工程化的K562细胞。在本专利技术的实施方式中，所述疫苗载体是经由基因工程化表达B细胞活化相关的分子的K562细胞，所述B细胞活化相关的分子包括CD40L、IL-4、IL-21、B细胞活化因子(BAFF)、霍乱毒素B亚单位(choleratoxinBsubunit,CTB),C-X-C趋化因子受体5(C-X-Cchemokinereceptortype5,CXCR5)以及上述不同因子的组合。在本专利技术的实施方式中，所述疫苗载体K562细胞经由基因工程化表达CXCR5、CCR7或CD62L。在本专利技术的实施方式中，所述高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，搭载所述B细胞活化相关的分子的蛋白，其中搭载B细胞活化相关的分子的蛋白包括经过修饰的蛋白、蛋白分子或其部分序列与其他分子融合表达形成的融合蛋白、以及蛋白来源的多肽片段；融合表达的方式包括与抗体的Fc序列融合、与不同信号肽的融合或与细胞因子融合。在本专利技术的实施方式中，所述疫苗载体K562细胞基因工程化表达免疫原，免疫原表达部位包括细胞内、细胞膜上或分泌性表达。在本专利技术的实施方式中，疫苗载体K562细胞基因工程化表达的免疫原来源包括病毒、细菌、肿瘤抗原或人源蛋白分子。在本专利技术的实施方式中，所述病毒包括流感病毒、冠状病毒、副粘病毒、风疹病毒、艾滋病病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、流行性脑炎病毒、登革病毒、森林脑炎病毒、西尼罗病毒、寨卡病毒、黄热病毒、汉坦病毒、埃博拉病毒、疱疹病毒、狂犬病毒、痘病毒或布尼亚病毒。在本专利技术的实施方式中，所述流感病毒包括人流感病毒、禽流感病毒，所述冠状病毒包括SARS、MERS、SARS-CoV-2、蝙蝠冠状病毒(bat-CoV),所述副粘病毒包括副流感病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、尼帕病毒、人偏肺病毒。在本专利技术的实施方式中，所述病毒免疫原来自于病毒囊膜蛋白，包括血凝素蛋白(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)、基质蛋白(Matrixprotein,M)、包膜蛋白(Envelope)、刺突蛋白(Spike)、膜蛋白(Membrane,M)、溶血素(Haemolysin,HL)、融合蛋白(Fusion,F)、黏附蛋白(G)。在本专利技术的实施方式中，所述肿瘤抗原，包括CD19、BCMA、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD47、CD52、CD70、CD117、CD123、CD133、CD138、CD147、CD171、RANKL、NKG2DL、HER2、MUC1、MUC16、CEA、EpCAM、IL-13Rα2、EGFR、EGFRvIII、GD2、DR5、EphA2、FRα、PSCA、PSMA、TARP、PIGF、cMet、VEGFR2、BCMA、CTLA-4、PD-L1、AFP、GPC3、AXL、ROR1、ROR2、FAP、Mesothelin、DLL3、CLD18、PDGF-Rα、SLAMF7和/或CCR4。在本专利技术的实施方式中，所述人源蛋白分子，包括人的细胞膜上蛋白分子。在本发的实施方式中，所述疫苗载体搭载抗原后，与不同的佐剂组合形成疫苗，所用佐剂包括铝盐佐剂、CpG佐剂、锰佐剂、MF59佐剂、QS21佐剂、TLR配体佐剂、NOD通路佐剂、干扰素佐剂、cGAS/STING通路佐剂、细胞因子佐剂、PD-1阻断抗体、CTLA-4阻断抗体、TIGIT阻断抗体、αGalcer及其衍生物佐剂，所述细胞因子佐剂包括IL-12、GM-CSF、IL-18、IL-21。另一方面，本专利技术提供了一种高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)分别构建含有CD40L、IL-4、IL-21、BAFF蛋白分子、霍乱毒素B亚单位、CXCR5、CCR7或CD62L的载体；2)将含有CD40L、IL-4、IL-21、BAFF蛋白分子、霍乱毒素B亚单位、CXCR5、CCR7或CD62L的载体感染、转染或者电转处理K562细胞，进行优选单克隆整合有CD40L、IL-4、IL-21、BAFF、霍乱毒素B亚单位、CXCR5、CCR7或CD62L的细胞系，即得。进一步地，将CD40L、IL-4、IL-21、BAFF、霍乱毒素B亚单位、CXCR5、CCR7或CD62L蛋白基因表达于慢病毒载体、质粒载体、痘病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、单纯疱疹病毒载体或CMV载体。进一步地，将CD40L、IL-4、IL-21、B细胞活化因子、霍乱毒素B亚单位、CXCR5、CCR7或CD62L蛋白基因表达于慢病毒载体。进一步地，CD40L、IL-4、IL-21、BAFF、霍乱毒素B亚单位、CXCR5，CCR7或CD62L蛋白基因，可以是单独表达在K562细胞上，也可以是两两组合，或者三三组合，四四组合，五五组合亦或是六本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述疫苗载体是经由基因工程化的K562细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述疫苗载体是经由基因工程化的K562细胞。


2.根据权利要求1所述的高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述疫苗载体是经由基因工程化表达B细胞活化相关的分子的K562细胞，所述B细胞活化相关的分子包括CD40L、IL-4、IL-21、B细胞活化因子、霍乱毒素B亚单位或C-X-C趋化因子受体5（CXCR5）以及上述不同因子的组合。


3.根据权利要求1所述的高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述疫苗载体K562细胞经由基因工程化表达CXCR5、CCR7或CD62L。


4.根据权利要求2所述高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，搭载所述B细胞活化相关的分子蛋白，其中搭载的B细胞活化相关的分子的蛋白包括经过修饰的蛋白、蛋白分子或其部分序列与其他分子融合表达形成的融合蛋白、以及蛋白来源的多肽片段；融合表达的方式包括与抗体的Fc序列融合、与不同信号肽的融合或与细胞因子融合。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述疫苗载体K562细胞基因工程化表达免疫原，免疫原表达部位包括细胞内、细胞膜上或分泌性表达。


6.根据权利要求5所述的高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，疫苗载体K562细胞基因工程化表达的免疫原来源包括病毒、细菌、肿瘤抗原或人源蛋白分子。


7.根据权利要求6所述的高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述病毒包括流感病毒、冠状病毒、副粘病毒、风疹病毒、艾滋病病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、流行性脑炎病毒、登革病毒、森林脑炎病毒、西尼罗病毒、寨卡病毒、黄热病毒、汉坦病毒、埃博拉病毒、疱疹病毒、狂犬病毒、痘病毒或布尼亚病毒。


8.根据权利要求7所述的高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述流感病毒包括人流感病毒、禽流感病毒，所述冠状病毒包括SARS、MERS、SARS-CoV-2、蝙蝠冠状病毒（bat-CoV）,所述副粘病毒包括副流感病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、尼帕病毒、人偏肺病毒。


9.根据权利要求6所述的高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述病毒免疫原来自于病毒囊膜蛋白，包括血凝素蛋白（Hemagglutinin,HA）、神经氨酸酶（Neuraminidase，NA）、基质蛋白（Matrixprotein,M）、包膜蛋白（Envelope）、刺突蛋白(Spike)、膜蛋白（Membrane,M）、溶血素(Haemolysin,HL)、融合蛋白（Fusion,F）、黏附蛋白（G）。


10.根据权利要求6所述的高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体，其特征在于，所述肿瘤抗原，包括CD19、BCMA、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD47、CD52、CD70、CD117、CD123、CD133、CD138、CD147、CD171、RANKL、NKG2DL、HER2、MUC1、MUC16、CEA、EpCAM、IL-13Rα2、EGFR、EGFRvIII、GD2、DR5、EphA2、FRα、PSCA、PSMA、TARP、PIGF、cMet、VEGFR2、BCMA、CTLA-4、PD-L1、AFP、GPC3、AXL、ROR1、ROR2、FAP、Mesothelin、DLL3、CLD18、PDGF-Rα、SLAMF7和/或CCR4。


11.根据权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐建青，张晓燕，何欢，何香川，丁相卿，
申请(专利权)人：上海市公共卫生临床中心，
类型：发明
国别省市：上海;31