一种基因组整合方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种基因组整合方法及用途。具体公开了一种大肠杆菌大片段基因组整合载体及其在合成类胡萝卜素中的应用，该大肠杆菌基因组整合载体，包括复制子、目的外源代谢途径、抗性基因和整合位点，所述的整合位点为IS序列；该工程菌包括大肠杆菌和整合进大肠杆菌基因组的上述整合载体。本发明专利技术以大肠杆菌基因组中的拷贝数较多的IS序列作为整合位点，进行载体与基因组的整合，不仅整合方法简单，而且整合到基因组上的目的基因遗传稳定，既解决了质粒作为表达载体时，分离不稳定的问题，又简化了现有的整合技术，解决了现有大片段整合技术繁琐、耗时等问题。

【技术实现步骤摘要】
一种基因组整合方法及用途
本专利技术属于基因工程和生物
，涉及一种基因组整合方法及用途，具体涉及一种大肠杆菌大片段基因组整合载体及其在合成类胡萝卜素中的应用。
技术介绍
由于大肠杆菌基因操作简便，商业化可供选择的表达载体众多，不同的启动子、不同拷贝数的复制子极大的方便了蛋白在大肠杆菌内的表达；所以对于大肠杆菌的代谢工程策略，当前普遍采用的是利用质粒作为表达载体。但是质粒的存在往往会导致过重的代谢负担、分离的不稳定性以及蛋白表达的不可控性；同时为了维持菌株中质粒的稳定存在，通常需要添加抗生素，这不仅增加生产成本，还会带来抗药性的问题，威胁人类健康。所以，基因组整合展现了巨大的优势。当前在大肠杆菌中进行基因组整合，主要有同源重组，定点整合和转座酶介导的重组。同源重组最常用的是λ-Red重组，但此技术在在进行每次整合时需要寻找合适的重组位点，然后根据整合位点设计不同同源臂，比较耗时费力；并且随着目的基因长度的增加，其重组效率会大幅下降，整合基因的长度有较大限制。定点整合往往借助的是大肠杆菌内的噬菌体整合位点进行整合。转座酶介导的重组需要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大肠杆菌基因组的整合载体，包括复制子、目的外源代谢途径、抗性基因和整合位点，其特征在于，所述的目的外源代谢途径包括MEP途径中的限速步骤和番茄红素合成基因。/n

【技术特征摘要】
1.一种大肠杆菌基因组的整合载体，包括复制子、目的外源代谢途径、抗性基因和整合位点，其特征在于，所述的目的外源代谢途径包括MEP途径中的限速步骤和番茄红素合成基因。


2.根据权利要求1所述的整合载体，其特征在于，所述的MEP途径中的限速步骤包括前馈控制模块dxs-dxr和反馈控制模块idi-crtE，所述的dxs-dxr模块在phoR启动子之下，所述的idi-crtE模块在yejG启动子之下。


3.根据权利要求1或2所述的整合载体，其特征在于，所述的番茄红素合成基因在trc启动子之下。


4.根据权利要求3所述的整合载体，其特征在于，所述的番茄红素合成基因包括crtE、crtB和crtI基因。


5.根据权利要求1所述的整合载体，其特征在于，所述的整合位点为IS序列；所述的复...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱红惠，苏卜利，宋丹丹，冯广达，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：广东;44