反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产菌株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸生产菌株的构建方法，所述方法包括增强所述反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸生产菌株中铵转运蛋白的活性。本发明专利技术还公开了利用所述方法构建的反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸生产菌株和利用所述菌株制备反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的方法。本发明专利技术构建的反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸生产菌株的反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸产量显著提高，并且为构建反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸生产菌株开拓了新的思路。

Production of trans-4-hydroxy-l-proline and its construction and Application

【技术实现步骤摘要】
反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产菌株及其构建方法和应用
本专利技术涉及生物
具体地说，本专利技术涉及反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株、这种生产菌株的构建方法和应用。
技术介绍
反式-4-羟基-L-脯氨酸是一种具有独特生理活性的氨基酸，广泛应用于医药、食品添加剂、动物饲料和美容业等领域，由于价格昂贵目前主要用于合成碳青霉烯类抗生素(第三代，抗生素的最后一道防线)的侧链。碳青霉烯类抗生素是抗菌谱最广的一类非典型β-内酰胺类抗生素，具有抗菌谱广、抗菌活性强的特点，全球总体市场已超过了30亿美元。国内传统生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的主要方法是化学提取法，利用动物蛋白如明胶、猪皮为原料，经酸水解后提取反式-4-羟基-L-脯氨酸，该方法纯化步骤长，得率低(约4-7％)，生产成本高达30万/吨，且每生产1吨成品需要排放150至300吨高盐高氮废水及大量有毒的氧化氮废气。受环保压力影响，传统的反式-4-羟基-L-脯氨酸生产企业都已停产。随着市场成熟度的提高，竞争加剧，碳青霉烯类抗生素侧链价格显著下降，如美罗培南侧链的市场售价由最初的数千元本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株的构建方法，其特征在于，增强所述反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株中铵转运蛋白AmtB的活性。/n

【技术特征摘要】
1.一种反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株的构建方法，其特征在于，增强所述反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株中铵转运蛋白AmtB的活性。


2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述铵转运蛋白AmtB是：
1)如SEQIDNO:1所示氨基酸序列的多肽；或
2)具有1)所限定的序列，在两端添加一个或几个氨基酸残基，优选1-20个、更优选1-15个、更优选1-10个、更优选1-3个、最优选1个氨基酸残基而形成的序列，且基本具有1)所限定的多肽功能的由1)衍生的多肽。


3.如权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株包括但不限于：大肠杆菌(Escherichiacoli)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)、黄色短杆菌(Brevibacteriumflavum)、粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、指孢囊菌(Dactylosporangiumspp.)和拟无枝酸菌(Amycolatopsisspp.)等；优选大肠杆菌或谷氨酸棒杆菌；最优选大肠杆菌。


4.一种反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株，其特征在于，所述反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株中铵转运蛋白AmtB的活性增强。


5.如权利要求4所述的反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株，其特征在于，所述铵转运蛋白AmtB是：
1)如SEQIDNO:1所示氨基酸序列的多肽；或
2)具有1)所限定的序列，在两端添加一个或几个氨基酸残基，优选1-20个、更优选1-15个、更优选1-10个、更优选1-3个、最优选1个氨基酸残基而形成的序列，且基本具有1)所限定的多肽功能的由1)衍生的多肽。


6.如权利要求4或5所述的反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株，其特征在于，所述反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株包括但不限于：大肠杆菌(E...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙际宾，刘娇，王兴初，周文娟，郑平，马延和，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12