一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物及其试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物及其试剂盒和应用，涉及生物技术领域。该核酸组合物包括其包括引物对1和/或引物对2，该核酸组合物解决了现有幽门螺杆菌耐药基因耐药基因的突变位点检测单一且昂贵的缺陷，提供了一种新的能快速且高效地检测幽门螺杆菌耐药基因的途径。

A nucleic acid composition for detecting drug resistance gene of Helicobacter pylori and its kit and Application

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物及其试剂盒和应用
本专利技术涉及生物
，且特别涉及一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物及其试剂盒和应用。
技术介绍
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H.pylori，Hp)，是一种微需氧的革兰氏阴性螺旋杆菌，1994年被世界卫生组织列为与胃癌发生相关的I类致癌因子。研究显示幽门螺杆菌感染与胃部炎症、胃黏膜萎缩、胃黏膜肠化、胃黏膜异型增生以及胃癌等的发生发展具有密切相关。目前，用于治疗H.pylori感染的主要药物有：克拉霉素(clarithromycin，CLA)、甲硝唑(metronidazole，MTZ)、阿莫西林(amoxicillin，AMX)和左氧氟沙星(levofloxacin，LEV)等。但目前H.pylori耐药现象日趋严峻，严重影响其临床疗效和根除率。研究显示，对克拉霉素耐药的H.pylori菌株50S亚基的23SrRNA的V区的突变位点如A2143G、A2142G以及A2142C等占所有克拉霉素耐药原因的80％～90％，其他位于Hp23SrRNAV区的突变位点有A2144G、T2115G、G2141A、T2190C、C2195T、A2223G、C2694A、G2254T、GA2172T，以及位于23SrRNAV区以外的T2617C、T2289C、G2224A、C2245T、T2115G、G2141A、2717.2182.2289.2223.2694少见。H.pylori对喹诺酮类如左氧氟沙星的高度耐药有gyrA氨基酸序列的突变引起，gyrA氨基酸序列有4种突变(Asn-87-Lys，Ala88-Val，Aso91-Gly，ASN或TYR取代Ala97-Val)。其中，第91位氨基酸的突变占左氧氟沙星耐药原因的30％-50％左右。鉴于此，怎样快速、准确的对H.pylori耐药基因进行检测分析是本领域技术人员需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物及其试剂盒和应用。本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。第一方面，本专利技术实施例提供了一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物，其包括其包括引物对1和/或引物对2；所述引物对1的上游引物的碱基序列如SEQIDNo.1所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNo.2所示；所述引物对2的上游引物的碱基序列如SEQIDNo.3所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNo.4所示。第二方面，本专利技术实施例提供一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的试剂盒，其包括如前述实施例所述的用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物。第三方面，本专利技术实施例提供了前述实施例所述的用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物在幽门螺杆菌的抗生素耐药性检测和/或分析中的应用。第四方面，本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物在制备用于检测和/或诊断幽门螺杆菌相关疾病的产品中的应用。本专利技术实施例的核酸组合物的有益效果为：本专利技术实施例提供了一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物，其包括引物对1和/或引物对2，该核酸组合物解决了现有幽门螺杆菌耐药基因耐药基因的突变位点检测单一且昂贵的缺陷，提供了一种新的能快速且高效地检测幽门螺杆菌耐药基因的途径。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术验证例1中引物对1对幽门螺杆菌进行实时荧光定量PCR在不同退火温度(50～60℃)下的扩增图；图2为本专利技术验证例1中引物对2对幽门螺杆菌进行实时荧光定量PCR在不同退火温度(50～60℃)下的扩增图；图3本专利技术验证例2中引物对1的上游引物和下游引物均为400nM时的荧光定量PCR的扩增图；图4本专利技术验证例2中引物对2的上游引物和下游引物均为400nM时的荧光定量PCR的扩增图；图5为本专利技术验证例3中的引物对1的最低检测限图；图6为本专利技术验证例3中的引物对2的最低检测限图；图7为本专利技术验证例6中的引物对1的ROC曲线图；图8为本专利技术验证例6中的引物对2的ROC曲线图；图9为本专利技术验证例7中的幽门螺杆菌耐药基因特异性实验结果图；图10为本专利技术验证例8中的引物对1的差分曲线图；图11为本专利技术验证例8中的引物对1的溶解曲线图；图12为本专利技术验证例8中的引物对2的差分曲线图；图13为本专利技术验证例8中的引物对2的溶解曲线图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。有必要在此指出的是以下实施例只用于对本专利技术进行进一步说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述本
技术实现思路
对本专利技术作出一些非本质的改进和调整。文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术中。下面对本申请提供的一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物及其试剂盒和应用进行具体说明。本专利技术实施例提供了一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物，其包括其包括引物对1和/或引物对2；所述引物对1的上游引物的碱基序列如SEQIDNo.1所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNo.2所示；所述引物对2的上游引物的碱基序列如SEQIDNo.3所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNo.4所示。具体地，通过采用上述引物对1对待测样品进行PCR检测，能够针对幽门螺杆菌23SrRNA的2142、2143位点的多态性进行检测和分析，可同时获得该基因上2个突变位点的检测结果。同理，通过采用上述引物对2对待测样品进行PCR检测，能够针对幽门螺杆菌gyrA基因的261以及272位点的多态性进行检测和分析，可同时获得该基因上2个突变位点的检测结果。一方面，上述检测引物对不需要合成荧光探针，克服了现在耐药基因检测价格昂贵的缺陷。另一方面，采用上述引物对进行PCR检测时间(从标本处理开始)仅为2-3小时，操作时间远远短于药敏实验，且PCR检测是全封闭操作，加入样本抽提产物之后可以不再打开管盖，减少了污染产生的机会。同时，采用上述引物对针对幽门螺杆菌的耐药基因进行检测，具有灵敏度高、特异性好、可重复性强以及检测结果快速客观等优点。需要说明的是，只要包含上述任一引物对的核酸组合物均在本申请的保护范围内。需要说明的是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物，其特征在于，其包括引物对1和/或引物对2；/n所述引物对1的上游引物的碱基序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的碱基序列如SEQID No.2所示；/n所述引物对2的上游引物的碱基序列如SEQ ID No.3所示，下游引物的碱基序列如SEQID No.4所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物，其特征在于，其包括引物对1和/或引物对2；
所述引物对1的上游引物的碱基序列如SEQIDNo.1所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNo.2所示；
所述引物对2的上游引物的碱基序列如SEQIDNo.3所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNo.4所示。


2.一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因的试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1所述的用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物。


3.根据权利要求2所述的用于检测幽门螺杆菌耐药基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括以下任意一种或多种试剂的组合：PCR缓冲液、MgCl2溶液、dNTPs、热启动DNA聚合酶以及PCR反应染料；
优选地，所述PCR反应染料为饱和染料。


4.如权利要求1所述的用于检测幽门螺杆菌耐药基因的核酸组合物在幽门螺杆菌抗生素耐药性检测或分析中的应用，其特征在于，所述幽门螺杆菌的抗生素耐药性检测和/或分析包括采用所述核酸组合物对待测样品进行PCR检测。


5.根据权利要求4所述的应用，在进行PCR检测中，所述核酸组合物中所述引物对1的上游引物与下...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛倚澜，邓玲，何晓奕，刘文正，卜姣，张雨，解庆华，冯宇阳，
申请(专利权)人：重庆博利达医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50