一种共聚体酶复合物的制备方法、共聚体酶复合物和应用技术

本发明专利技术提供了一种共聚体酶复合物的制方法备、共聚体酶复合物和应用，属于蛋白质工程技术及生物标志物诊断技术领域，包括：将SAM基因与SpT基因、SnT基因融合后，插入载体，得重组质粒；将SAHH基因与SnC基因融合后，插入载体，得重组质粒；将HMT基因与SpC基因融合后，插入载体，得重组质粒；将得到的三个重组质粒分别或共同转化到感受态细胞中，得到工程菌，将所述工程菌诱导表达后，得到共聚体酶复合物。采用本发明专利技术制备方法使共聚体酶复合物的酶活性提高，稳定性增强，并且能够提高生产效率，减少在配制Hcy检测试剂时上述关键酶的加入量，从而降低成本。

Preparation method, copolymerase complex and application of a kind of copolymerase complex

【技术实现步骤摘要】
一种共聚体酶复合物的制备方法、共聚体酶复合物和应用
本专利技术属于蛋白质工程技术及生物标志物诊断
，尤其涉及一种共聚体酶复合物的制备方法、共聚体酶复合物和应用。
技术介绍
同型半胱氨酸(Hcy)为含巯基氨基酸，是体内甲硫氨酸循环过程中的一个代谢中间产物。血液中总Hcy浓度的病理性升高会导致高同型半胱氨酸血症。近年来的研究已确认，高同型半胱氨酸血症与作为人类第一杀手的动脉粥样硬化、高血压、心肌梗死等多种心血管疾病的发生有密切关系，是心血管疾病的一个新的独立和重要的危险因素。目前国内外已经把Hcy作为心血管疾病的一个检测指标。王学忠首次在专利中公开了一种新的测定体液样本中Hcy的酶循环方法，该方法不受体液样本中干扰物质的干扰，具有优良的反应灵敏度。并首次采用测定Hcy方法中常用的工具酶，如：HMT和SAHH，用于酶循环增量测定。龚俊、刘希等人利用基因工程技术将SAM基因构建至原核表达载体中，并转化大肠杆菌构建重组宿主细胞；通过补料分批发酵得到高产量的菌体；之后通过亲和层析技术，对SAM纯化，所得蛋白的色谱纯度在90％以上。彭毅等人采用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种共聚体酶复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)将SAM基因与SpT基因、SnT基因融合后，插入至pET-28a载体中，得到pET-28a-SAM-SpT-SnT重组质粒；/n2)将SAHH基因与SnC基因融合后，插入至pACYCDuet-1载体中，得到pACYCDuet-SAHH-SnC重组质粒；/n3)将HMT基因与SpC基因融合后，插入至pCDFDuet

【技术特征摘要】
1.一种共聚体酶复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将SAM基因与SpT基因、SnT基因融合后，插入至pET-28a载体中，得到pET-28a-SAM-SpT-SnT重组质粒；
2)将SAHH基因与SnC基因融合后，插入至pACYCDuet-1载体中，得到pACYCDuet-SAHH-SnC重组质粒；
3)将HMT基因与SpC基因融合后，插入至pCDFDuetTM-1载体中，得到pCDFDuetTM-HMT-SpC重组质粒；
4)将所述步骤1)得到的pET-28a-SAM-SpT-SnT重组质粒、步骤2)得到的pACYCDuet-SAHH-SnC重组质粒、步骤3)得到的pCDFDuetTM-HMT-SpC重组质粒分别或共同转化到感受态细胞中，得到工程菌，将所述工程菌诱导表达后，得到共聚体酶复合物；
所述步骤1)、2)和3)之间无时间顺序限定。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4)感受态细胞包括BL21感受态细胞。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)SAM基因的GenBank登录号为AAA24164.1。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)HMT基因的GenBank登录号为CAA98009...

【专利技术属性】
技术研发人员：严竹林，
申请(专利权)人：湖南博奥瑞康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43