一种小鼠心外膜细胞分离培养方法技术

本发明专利技术公开了一种小鼠心外膜细胞分离培养方法，包括如下步骤：将离体小鼠心脏放置于无菌离心管I中，加入混合消化液，在37℃进行震荡消化，静置，后将消化后含有悬浮细胞的上清液转移至离心管II中；所述离心管II的环境温度为0℃以下；重复上述消化步骤以消化小鼠心脏，后加入胎牛血清中止消化；将收集在离心管II内的所有含有悬浮细胞的上清液进行过滤、离心；离心后，去除上清液，加入含胎牛血清的培养液，混悬沉淀细胞，流式分选，然后将细胞均匀接种于涂有明胶的培养皿中，置于培养箱中培养，即可培养得到小鼠心外膜细胞。本发明专利技术利用心肌梗死后心外膜活化，EPDCs重新表达WT1的原理，从转基因小鼠中分离和培养EPDCs。

A method for isolation and culture of epicardial cells in mice

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠心外膜细胞分离培养方法
本专利技术涉及细胞培养
，尤其涉及一种小鼠心外膜细胞分离培养方法。
技术介绍
干细胞移植一直是心肌再生领域的研究热点。大量的基础研究和临床试验证实干细胞移植能够在一定程度上修复梗死心肌。然而，受到局部不利微环境等多种因素的影响，干细胞移植面临着存活和分化效率低等瓶颈问题。近来，内源性心肌修复已引起人们的广泛关注，为心肌梗死的治疗开辟了新的途径。通过调动自身的内源性心肌再生机制，不仅可以补充受损的心肌细胞，也可避免因细胞移植带来的副作用，故此策略在心肌修复方面具备独特的优势。心外膜作为心脏的重要组成部分之一，其在内源性心肌修复中的作用已引起人们的极大兴趣。在心脏发育过程中，部分心外膜细胞活化，发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)形成具有多向分化潜能的心外膜源性细胞(epicardium-derivedcells,EPDCs)。EPDCs迁入心肌层参与心脏的发生和冠状血管的形成。此外，心外膜对心肌细胞的成熟、增殖和心室致密层的形成也起到重要调节作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小鼠心外膜细胞分离培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1、将离体小鼠心脏放置于无菌离心管I中，加入混合消化液，并在37℃条件下进行震荡消化，静置，后将消化后含有悬浮细胞的上清液转移至离心管II中；所述离心管II的环境温度为0℃以下；/nS2、重复上述消化步骤7～8次，以消化小鼠心脏，后加入胎牛血清中止消化；将收集在离心管II内的所有含有悬浮细胞的上清液进行过滤、离心；/nS3、离心后，去除上清液，加入含15％胎牛血清的培养液，混悬沉淀细胞，进行流式分选得到纯度较高的心外膜细胞，然后将心外膜细胞均匀接种于涂有明胶的培养皿中，置于培养箱中进行培养，即可培养得到小鼠心外膜细胞；/n其中...

【技术特征摘要】
1.一种小鼠心外膜细胞分离培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将离体小鼠心脏放置于无菌离心管I中，加入混合消化液，并在37℃条件下进行震荡消化，静置，后将消化后含有悬浮细胞的上清液转移至离心管II中；所述离心管II的环境温度为0℃以下；
S2、重复上述消化步骤7～8次，以消化小鼠心脏，后加入胎牛血清中止消化；将收集在离心管II内的所有含有悬浮细胞的上清液进行过滤、离心；
S3、离心后，去除上清液，加入含15％胎牛血清的培养液，混悬沉淀细胞，进行流式分选得到纯度较高的心外膜细胞，然后将心外膜细胞均匀接种于涂有明胶的培养皿中，置于培养箱中进行培养，即可培养得到小鼠心外膜细胞；
其中，所述小鼠为转基因小鼠，为诱导性的特异性重组酶荧光小鼠。


2.根据权利要求1所述的小鼠心外膜细胞分离培养方法，其特征在于，所述混合消化液包括0.05％胰蛋白酶和0.08％IV型胶原蛋白酶；所述混合消化液采用Hank's平衡盐溶液配置。


3.根据权利要求1所述的小鼠心外膜细胞分离培养方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晓欣，陆海霞，王用利，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31