【技术实现步骤摘要】
一种利用脂肪干细胞胞外囊泡促进皮肤损伤修复的方法
本专利技术涉及一种利用脂肪干细胞胞外囊泡促进皮肤损伤修复的方法。
技术介绍
随着经济社会的发展，皮肤抗衰老越来越受到大众的关注。皮肤的衰老不仅表现在容貌上的老态，也会导致一系列的病态，如：皮肤干燥、皮肤屏障功能下降、皮肤肿瘤的发生等。因此，如何能有效的预防皮肤衰老已经成为整形修复科医生和皮肤科医生关注的热点问题。从病因上讲，皮肤衰老由内源性(遗传)因素和外源性(环境)因素决定。内源性衰老即为自然性衰老，是与年龄直接相关的退行性变化，而外源性衰老是机体皮肤受到暴露因素作用后的衰老，其中紫外线的照射为主要的暴露因素，其通过引起皮肤的损伤而导致衰老。目前，针对外源性的皮肤衰老，主要是通过口服或外用药物进行预防和治疗，其机制复杂，总的来说主要是通过拮抗氧化应激、调节炎症反应、抑制衰老相关基因和通路的表达来延缓皮肤的衰老，但其生物利用度低、部分药物不良反应多以及部分药物抗皮肤衰老的疗效有限等问题限制了其应用。近年来，大量的研究表明干细胞的应用能够改善皮肤的光损伤。这其中，脂肪干...
【技术保护点】
1.一种利用脂肪干细胞胞外囊泡促进皮肤损伤修复的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1，细胞提取与鉴定步骤，包括以下工序：/n(1)脂肪干细胞的提取和鉴定：用胶原酶消化法消化抽脂术后废弃的颗粒脂肪，提取脂肪干细胞，长满后传代，分别通过流式细胞术和三向诱导鉴定提取的脂肪干细胞；/n(2)皮肤成纤维细胞的提取：用Dispase浸泡废弃的包皮24小时，去除表皮，用胶原酶消化法消化剩余的真皮，提取皮肤成纤维细胞，长满后传代，第3～5代用于体外研究胞外囊泡对皮肤成纤维细胞光损伤的研究；/nS2，脂肪干细胞胞外囊泡的提取步骤：第三代的脂肪干细胞长满以后，对脂肪干细胞进行饥饿处理48小...
【技术特征摘要】
1.一种利用脂肪干细胞胞外囊泡促进皮肤损伤修复的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，细胞提取与鉴定步骤，包括以下工序：
(1)脂肪干细胞的提取和鉴定：用胶原酶消化法消化抽脂术后废弃的颗粒脂肪，提取脂肪干细胞，长满后传代，分别通过流式细胞术和三向诱导鉴定提取的脂肪干细胞；
(2)皮肤成纤维细胞的提取：用Dispase浸泡废弃的包皮24小时，去除表皮，用胶原酶消化法消化剩余的真皮，提取皮肤成纤维细胞，长满后传代，第3～5代用于体外研究胞外囊泡对皮肤成纤维细胞光损伤的研究；
S2，脂肪干细胞胞外囊泡的提取步骤：第三代的脂肪干细胞长满以后，对脂肪干细胞进行饥饿处理48小时，然后收集细胞上清，用超滤法提取脂肪干细胞胞外囊泡，提取好的胞外囊泡重悬在PBS中，负80度保存；
S3，脂肪干细胞胞外囊泡的鉴定步骤：通过透射电镜观察胞外囊泡的形态和大小，纳米颗粒追踪分析计算胞外囊泡的平均直径，WesternBlot检测胞外囊泡的标志物CD81、CD63、CD9及TSG101；
S4，皮肤光损伤裸鼠模型的构建和治疗步骤：取5周龄大小的雌性BALB/c裸鼠40只，常规饲养在SPF环境下1周以适应环境；从第6周开始，裸鼠随机均分成4组：
(1)对照组：不进行UVB照射，也不进行皮下注射治疗；
(2)UVB组：对裸鼠进行UVB照射+皮下注射PBS；
(3)UVB+150ug/week组：对裸鼠进行UVB照射+皮下注射150ug/week的胞外囊泡；
(4)UVB+300ug/week组：对裸鼠进行UVB照射+皮下注射300ug/week的胞外囊泡；
皮肤光损伤裸鼠模型建立过程如下：在鼠笼上方架设UVB灯管，使裸鼠处在UVB的直射下并能自由活动，在UVB灯下放置能量检测仪，第一周的照射的能量由最小红斑量确定，每周照射5天，后续每周增加一个最小红斑量的照射剂量，一共照射8周；
S5，脂肪干细胞胞外囊泡治疗光老化的效果评估步骤，包括以下工序：
(1)对每组裸鼠的注射部位进行皮肤多功能成像仪检测大体皱纹情况，通过偏振光模式反应皮肤的厚度，3D粗糙度评估皮肤粗糙程度，并综合进行评分；
(2)对每组裸鼠的注射部位取材，分别进行HE染色和马松染色，计算表皮厚度和真皮厚度并统计，进行PCNA和CD68染色了解皮肤中细胞的增殖情况和巨噬细胞浸润情况；
S6，体外皮肤成纤维细胞光损伤模型建立步骤：将皮肤成纤维细胞接种在96孔板或者6孔板，根据分组加入/不加入不同浓度的胞外囊泡，培养24小时后，去除细胞上清液，用PBS清洗两遍，用一薄层PBS覆盖细胞，然后将紫外线灯架在细胞之上，调节...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘凯，许鹏，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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