分离牙胚单细胞的方法及应用技术

本发明专利技术涉及单细胞的分离方法，具体涉及一种对牙胚组织单细胞分离的方法。该方法包括依次利用胶原酶、胰蛋白酶和DNA水解酶对牙胚组织进行消化处理，获得牙胚单细胞。本发明专利技术所提供的分离单细胞的方法，操作简单，耗时短；对细胞伤害小，细胞能够最大程度维持原始特性；得到的单细胞悬液无黏连，符合单细胞测序要求。

The method and application of separating tooth germ cell

【技术实现步骤摘要】
分离牙胚单细胞的方法及应用
本专利技术涉及细胞生物学领域，具体的，本专利技术涉及单细胞的分离方法，更具体的，本专利技术涉及适用于单细胞转录组测序的牙胚组织单细胞分离方法。
技术介绍
众所周知，因龋病、牙周病、创伤和肿瘤等疾病因素，人类倍受牙齿缺失的困扰。牙齿缺失造成咀嚼、发音等生理和心理功能障碍。据统计，在50岁以前，美国平均每人缺失牙达到8个，65岁前牙齿缺失率达35％，而中国这一比率为40％，即全国约有5亿人患有不同程度的牙齿缺失。传统的牙齿修复方法完全不能恢复患者牙齿的基本生理功能，即使近年来在临床逐渐普及的种植牙，因其价格昂贵、流程复杂，适应症有限，难以解决全部的缺失牙问题。因此，越来越多的学者将牙组织再生，甚至全牙器官再生作为解决牙齿缺失这一问题的最终目标。在牙组织工程中，除了支架材料和生物活性因子外，种子细胞的选择是牙组织工程中最重要的组成部分。牙齿的发育是上皮-间充质相互作用的结果，牙齿间充质细胞形成了除釉质外的牙齿大部分组织，包括牙髓-牙本质复合体、牙骨质、牙周膜和牙周支持组织。因此构成牙齿间充质细胞的种子细胞成为研究的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离牙胚单细胞的方法，其特征在于，包括：/n依次利用胶原酶、胰蛋白酶和DNA水解酶对牙胚组织进行消化处理，获得牙胚单细胞；/n任选地，所述胶原酶为Ⅰ型胶原酶；/n任选地，所述DNA水解酶为DNase I。/n

【技术特征摘要】
1.一种分离牙胚单细胞的方法，其特征在于，包括：
依次利用胶原酶、胰蛋白酶和DNA水解酶对牙胚组织进行消化处理，获得牙胚单细胞；
任选地，所述胶原酶为Ⅰ型胶原酶；
任选地，所述DNA水解酶为DNaseI。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：
利用胶原酶对牙胚组织进行第一消化处理，除去胶原酶，加入第一培养液清清洗，获得第一消化产物；
利用胰蛋白酶对所述第一消化产物进行第二消化处理，加入第二培养液终止，获得第二消化产物；
利用DNA水解酶对所述第二消化产物进行第三消化处理，加入终止液终止，获得牙胚单细胞。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述胶原酶的作用浓度为50～100U/mL，作用时间为15～30分钟，作用温度为37摄氏度；
任选地，所述胰蛋白酶的作用浓度为质量百分浓度0.05～0.25％，作用时间为2～5分钟，作用温度为37摄氏度；
任选地，所述DNA水解酶的作用浓度为10～30U/mL，作用时间为5～10分钟，作用温度为37摄氏度。


4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述第一培养液为DMEM/F12培养液；
任选地，所述第二培养液为含有血清的培养液。


5.根据权利要求2～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述终止液为EDT...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴端卿，蔡景蕾，赵艺帆，王曜峰，陈树彬，陈小明，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44