一种人体脂肪干细胞的培养方法技术

本发明专利技术提供了一种人体脂肪干细胞的培养方法，本发明专利技术涉及一种快捷简便、高效经济和稳定的细胞培养体系。包括以下主要步骤：(1)将离体后的脂肪组织在室温下浸润于含有青霉素和链霉素的PBS中静置3‑5分钟，剪去脂肪组织上的血块、血管、结缔组织和皮肤组织；(2)将脂肪组织在胎牛血清中剪碎成糊状；(3)将糊状脂肪组织贴附于培养瓶底部，向培养瓶中加入含60％胎牛血清的低糖DMEM培养液，然后将培养瓶翻转，并置于孵育箱中培养12至18小时；(4)再次翻转培养瓶，加入低糖DMEM培养液，随着培养液的换液将DMEM培养液中胎牛血清的浓度由60％逐渐递减至10％。本发明专利技术将对脂肪干细胞临床应用的规范化、标准化、规模化提供了实验依据，具有良好的临床转化推广前景。

A culture method of human adipose stem cells

【技术实现步骤摘要】
一种人体脂肪干细胞的培养方法
本专利技术涉及一种人体脂肪干细胞的培养方法。
技术介绍
脂肪干细胞(adipose-drivedstemcells，ADSCs)是来源于脂肪组织的干细胞，与其它成体干细胞一样具有自我更新和多向分化的能力，在适宜诱导条件下可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。脂肪干细胞在组织工程和细胞治疗方面具有广泛的应用前景，吸引了越来越多研究者的关注。当前脂肪干细胞培养方法主要采用胶原酶消化法，在CN201511026437.3、CN201910418282.X、CN201210454794.X、CN201510033480.6等专利文献中公开的已公开次方法，典型的操作步骤如下：无菌条件下提取脂肪组织约200mL，PBS液反复冲洗以洗去红细胞。眼科剪剔除脂肪组织中可见血管后将脂肪组织剪碎至细小颗粒，加入0.1％I型胶原酶，37℃震荡、消化60min，胎牛血清终止消化。1500r/min离心10分钟，去除脂肪细胞及上清液，PBS液重悬，200目细胞筛过滤，1500r/min离心10分钟，所得细胞提取物用含10％胎牛血清本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人体脂肪干细胞的培养方法，其特征在于通过改进的脂肪组织块贴壁方法培养出脂肪干细胞，包括以下步骤。/n步骤1):将离体后的脂肪组织在室温下浸润于含有500U/ml青霉素和500ug/ml链霉素的PBS中静置3-5分钟。/n步骤2):使用眼科剪剪去脂肪组织上的血块、血管、筋膜等结缔组织和皮肤组织。/n步骤3):修剪后的脂肪组织用含有100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素的PBS洗涤2次，彻底洗去残留血细胞、麻醉剂、组织碎片。使用无菌纱布吸干洗涤液。/n步骤4):加入含60％胎牛血清的低糖DMEM培养液浸润脂肪组织，修剪成直径2.5-5mm、体积约为15-80mm

【技术特征摘要】
1.一种人体脂肪干细胞的培养方法，其特征在于通过改进的脂肪组织块贴壁方法培养出脂肪干细胞，包括以下步骤。
步骤1):将离体后的脂肪组织在室温下浸润于含有500U/ml青霉素和500ug/ml链霉素的PBS中静置3-5分钟。
步骤2):使用眼科剪剪去脂肪组织上的血块、血管、筋膜等结缔组织和皮肤组织。
步骤3):修剪后的脂肪组织用含有100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素的PBS洗涤2次，彻底洗去残留血细胞、麻醉剂、组织碎片。使用无菌纱布吸干洗涤液。
步骤4):加入含60％胎牛血清的低糖DMEM培养液浸润脂肪组织，修剪成直径2.5-5mm、体积约为15-80mm3的小块。
步骤5):培养瓶中加入1ml的含60％胎牛血清的低糖DMEM培养液，将脂肪组织块贴附于培养瓶底部，每块相距5-10mm，然后将培养瓶翻转，并置于温度为37℃，体积分数为5％的二氧化碳培养箱中培养12至18小时。
步骤6):再次翻转培养瓶，每隔24小时加入低糖DMEM培养液，使胎牛血清的浓度按60％、30％、15％、10％的梯度降低，共培养72小时。
步骤7):脂肪干细胞长出后使用含有10％胎牛血清的DMEM培养基继续培养，至细胞融合至90％时传代，传代使用0.25％胰酶消化细胞1-3分钟。
步骤8):离体后的脂肪组织如果不能立即培养，应置于含10％胎牛血清的低糖DMEM培养液中于4℃保存2小时。


2.根据权利要求1所述的脂肪干细...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔立峰，张培华，李瑾，
申请(专利权)人：崔立峰，张培华，
类型：发明
国别省市：上海;31