【技术实现步骤摘要】
一种体外诱导牙髓干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的细胞培养方法
本专利技术涉及一种将牙髓干细胞应用于膀胱平滑肌组织工程再生的细胞培养方法，特别是一种体外诱导牙髓干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的细胞培养方法。属于医学领域。
技术介绍
正常的膀胱逼尿肌具有扩张以储存低压下的尿液以及收缩排尿的功能。各种泌尿系统的疾病(包括癌症、脊柱损伤、良性膀胱痉挛等)将会引起膀胱逼尿肌的功能病变，这样的病人需要进行膀胱扩大成形术或置换术。然而，迄今为止没有合适的替代品能够有效的恢复膀胱逼尿肌的正常功能。目前常用的膀胱扩大成形术或置换术是截取一段小肠组织，经过处理后移植入膀胱以增加膀胱容量或替代膀胱部分组织的方法。然而这样的组织由于缺乏收缩功能将引起一系列并发症，此外小肠粘膜有产生粘液和吸收电解质的副作用，以及存在感染、结石，并且在小肠和膀胱吻合处存在癌变风险等一系列并发症。因此，小肠粘膜远远替代不了正常的膀胱组织。如何探索一种与膀胱组织功能相近的修复组织或方法，使其能有效替代膀胱组织发挥正常功能，以期为患者提供更好的生活质量，成为了目前研究的热点...
【技术保护点】
1.一种体外诱导牙髓干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的细胞培养方法，其特征在于，该细胞培养方法包括如下步骤：/n步骤(1)牙髓干细胞DPSCs的分离和培养；/n步骤(2)膀胱平滑肌细胞SMCs的分离和培养；/n步骤(3)膀胱平滑肌细胞SMCs条件培养液CM收集；/n步骤(4)筛选膀胱平滑肌细胞SMCs体外诱导培养液；/n步骤(5)体外诱导牙髓干细胞DPSCs向膀胱平滑肌细胞SMCs方向分化。/n
【技术特征摘要】
1.一种体外诱导牙髓干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的细胞培养方法，其特征在于，该细胞培养方法包括如下步骤：
步骤(1)牙髓干细胞DPSCs的分离和培养；
步骤(2)膀胱平滑肌细胞SMCs的分离和培养；
步骤(3)膀胱平滑肌细胞SMCs条件培养液CM收集；
步骤(4)筛选膀胱平滑肌细胞SMCs体外诱导培养液；
步骤(5)体外诱导牙髓干细胞DPSCs向膀胱平滑肌细胞SMCs方向分化。
2.根据权利要求1所述的一种体外诱导牙髓干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的细胞培养方法，其特征在于，所述的步骤(1)牙髓干细胞DPSCs的分离和培养包括如下步骤：
1)在无菌条件下，从脱落的牙齿中取出牙髓组织，将牙髓组织置于EP管中，加入1ml浓度为4μg/μl的Ⅰ型胶原酶，将EP管转移至CO2孵箱中进行消化，每隔20min充分震荡EP管，使牙髓组织与消化酶充分接触；充分消化1h后，将EP管内容物分别通过70μm的细胞筛，转移至新的EP管中，以获取单细胞悬液；利用PBS缓冲液充分漂洗细胞悬液后，待用；
2)利用纤维连接蛋白干细胞筛选法进行牙髓干细胞DPSCs筛选：
将纤维连接蛋白溶于PBS缓冲液中，制备成浓度为10μg/ml包被液；将含有纤维连接蛋白的包被液滴加于6孔板中，每孔1ml，置于孵箱中过夜；转天PBS缓冲液充分漂洗去未粘附的纤维连接蛋白后，晾干待用；
将上述获得的DPSCs细胞悬液，滴加于纤维连接蛋白预包被的6孔板，其中，每孔40,000细胞，移至孵箱中孵育20min后，去除培养液及未粘附的细胞，重新加入2ml新鲜培养液，继续培养；每隔2天换一次液；待单克隆长到至少32个细胞后，将1ml枪头上端减去，留下圆柱状的下端，下端涂上凡士林，在镜下标记出不同克隆，将制备好的枪头下端置于克隆上，利用Accutase进行消化后，传至T25瓶中；分离培养出牙髓干细胞DPSCs。
3.根据权利要求1所述的一种体外诱导牙髓干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的细胞培养方法，其特征在于，所述的步骤(2)膀胱平滑肌细胞SMCs的分离和培养具体如下：将脱离人体的膀胱组织置于含有1％青霉素/链霉素的PBS中充分漂洗后，置于含有1000U/ml中性蛋白酶...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋文凯，王迪雅，仇珺，孙书恺，张亚庆，宋冰，余擎，王胜朝，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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