北沙参酸性多糖提取方法及其提取物与其免疫调节的应用技术

一种北沙参酸性多糖提取方法，具体为：1)以北沙参为原材料，经过热水提取步骤、乙醇沉淀步骤、去除蛋白步骤、透析浓缩冷冻干燥步骤，制得北沙参粗多糖；2)对北沙参粗多糖，采用DEAE Sepharose

The extraction method of acid polysaccharide from Radix Glehniae and its application in immunoregulation

【技术实现步骤摘要】
北沙参酸性多糖提取方法及其提取物与其免疫调节的应用
本专利技术涉及植物提取
，特别是一种北沙参酸性多糖的提取方法及其提取物与应用。
技术介绍
北沙参(Glehnialittoralis)，别名莱阳参、海沙参、银沙参，为伞形科植物珊瑚菜干燥根。北沙参主要有效成分为多糖、挥发油类、香豆素类和苷类等，其中多糖成分含量最高。北沙参多糖(Glehnialittoralispolysaccharides,GLP)不仅增强机体免疫功能，还具有抗肿瘤活性，能抑制肺癌细胞的增殖和迁移，可作为一种新型天然抗癌药物的来源。研究表明许多免疫类多糖可以通过激活免疫细胞，特别是抗原呈递细胞来发挥免疫调节作用。抗原呈递细胞表面有大量的Toll样受体(TLR)，可以识别抗原并激活细胞内信号通路，在先天和适应性免疫反应中至关重要。TLR4广泛表达于多种肿瘤细胞和免疫细胞，作为宿主先天免疫反应的重要激活剂，参与了一些中药多糖的抗肿瘤活性。传统的多糖的分离提取方法包括水提醇沉法以及酶提取法、超声波辅助提取法、超临界流体萃取法、超高压提取技术微波辅助提取法和双水相萃取等本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种北沙参酸性多糖提取方法，其特征在于，具体步骤如下：/n1)以北沙参为原材料，粗提取北沙参粗多糖；/n2)对北沙参粗多糖提取物，采用DEAE Sepharose

【技术特征摘要】
1.一种北沙参酸性多糖提取方法，其特征在于，具体步骤如下：
1)以北沙参为原材料，粗提取北沙参粗多糖；
2)对北沙参粗多糖提取物，采用DEAESepharoseTMFastFlow柱层析技术提取北沙参多糖GLP-2；
3)对北沙参多糖GLP-2，采用SephacrylTMS-300HighResolution柱层析技术提取北沙参酸性多糖GLP-2a。


2.如权利要求1所述的北沙参酸性多糖提取方法，其特征在于，步骤1)中所述粗提取北沙参粗多糖的具体方法如下：
1-1)热水提取步骤：将原料北沙参在粉碎机里粉碎，得到北沙参粉末；在热水提取反应杯中加入北沙参粉末，再加入蒸馏水Ⅰ，置于80℃水浴中搅拌2小时，过滤收集提取液Ⅰ；残渣中再加入蒸馏水Ⅱ，置于80℃水浴中搅拌2小时，过滤收集提取液Ⅱ；合并提取液Ⅰ和提取液Ⅱ，离心去除沉淀，在旋转蒸发仪上减压浓缩，得到北沙参水溶性粗提取物；北沙参粉末、蒸馏水Ⅰ和蒸馏水Ⅱ的重量份数比为：北沙参粉末200份、蒸馏水Ⅰ2000份、蒸馏水Ⅱ1600份；
1-2)乙醇沉淀步骤：取冷却后的北沙参水溶性粗提取物，加入4倍体积的无水乙醇，同时不断搅拌，置于4℃环境，沉淀24小时，离心取沉淀物Ⅰ；
1-3)去除蛋白步骤：取沉淀物Ⅰ，用蒸馏水Ⅲ溶解，加入其体积五分之一的sevag试剂，电动快速搅拌10Min，再4000rpm离心处理3min；取上清液Ⅰ重复加入其体积五分之一的sevag试剂搅拌离心处理，直到蛋白除尽，得到上清液Ⅱ；沉淀物Ⅰ和蒸馏水Ⅲ的重量份数比为：沉淀物Ⅰ10份、蒸馏水Ⅲ25份；
1-4)透析浓缩冷冻干燥步骤：取上清液Ⅱ，选取截留分子量为8000Da的透析袋，在纯水中透析48小时；在旋转蒸发仪上减压浓缩，并在冻干机内冷冻干燥，制得北沙参粗多糖。


3.如权利要求2所述的北沙参酸性多糖提取方法，其特征在于，步骤2)中所述采用DEAESepharoseTMFastFlow柱层析技术提取北沙参多糖的具体步骤如下：
2-1)预处理：向柱管中加入用于防止气泡的蒸馏水，将DEAESepharoseTMFastFlow加入柱管中，静置24小时；用0.5mol/L的HCl洗1个柱体积，速度为6mL/min，时间为35Min；再用超纯水平衡4个柱体积，速度为8mL/min，时间为90Min；
2-2)取北沙参粗多糖，溶于蒸馏水Ⅳ中，以速度4mL/min上样，分别用水、0.2mol/L和0.4mol/L的NaCl洗脱30管，8mL/管，速度6mL/min，分别得到洗脱液GLP-1、洗脱液GLP-2...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲍依稀，张旭裕，刘子靖，钟诚，蒲有为，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：重庆;50