低分子量猴头菌多糖及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种低分子量猴头菌多糖及其制备方法与应用。本发明专利技术的低分子量猴头菌多糖是通过将猴头菌水提醇沉，得到的多糖粗提物脱色、脱蛋白，再经过透析和超滤，得到的粗多糖溶液经过纯化、浓缩和干燥，制得低分子量猴头菌多糖。本发明专利技术的低分子量猴头菌多糖制备方法反应条件温和，制备过程绿色环保，得到的低分子量猴头菌多糖保持了良好的活性，在预防和修复胃黏膜细胞氧化损伤方面效果显著，对GES‑1细胞的相对增殖率的提高可达到69.07％和78.7％。

Low molecular weight Hericium erinaceus polysaccharide and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
低分子量猴头菌多糖及其制备方法与应用
本专利技术涉及药用菌多糖的提取纯化
，尤其涉及一种低分子量猴头菌多糖及其制备方法与应用。
技术介绍
猴头菌(Hericiumerinaceus)是一种珍贵的药食两用菌，其子实体和菌丝体含有大量多糖、多肽、低聚糖和脂肪族酰类等重要活性物质。其中，多糖是猴头菌中含量最丰富的生物活性物质。现代药理研究结果表明，猴头菌多糖提取物具有治疗慢性胃炎、抗氧化、增强免疫力等功效，且具有许多潜在的药用价值。机体胃黏膜细胞损伤很常见，尤其是氧化损伤，此类损伤可以进一步诱发胃痛、胃穿孔以及十二指肠胃溃疡等。相比传统制酸剂和胃黏膜保护化学制剂，猴头菌多糖因其作用靶点多、安全性好的作用特点而受到广泛关注。但是，目前现有研究多数集中于猴头菌多糖的粗放制备，制得的猴头菌多糖的分子量较大；与之对应的低分子量猴头菌多糖及其制备方法则鲜见报道。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种低分子量猴头菌多糖的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供通过上述制备方法得到的低分子量猴头菌多糖。本专利技术的再一目的在于提供上述低分子量猴头菌多糖的应用。本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：一种低分子量猴头菌多糖的制备方法，包括如下步骤：将猴头菌进行水提、醇沉、脱色、脱蛋白、纯化、分离，得到低分子量猴头菌多糖；具体包括如下优选步骤：(1)将猴头菌粉末进行水提，得到猴头菌多糖水提物；(2)向步骤(1)得到的猴头菌多糖水提物醇沉，收集沉淀，干燥，得到多糖粗提物；(3)用水将步骤(2)得到的多糖粗提物溶解，得到粗多糖溶解液；将粗多糖溶解液和大孔树脂混合进行脱色，固液分离，将得到的液体干燥，得到脱色的粗多糖；(4)用水将步骤(3)得到的脱色的粗多糖溶解，使用蛋白酶进行酶解脱蛋白，过滤，得到脱色脱蛋白的粗多糖溶液；(5)将步骤(4)得到的脱色脱蛋白的粗多糖溶液透析，超滤，离心，得到分子量＜10kDa的粗多糖溶液；(6)将步骤(5)得到的分子量＜10kDa的粗多糖溶液采用柱层析进行纯化，浓缩，干燥，得到低分子量猴头菌多糖。步骤(1)中所述的猴头菌粉末是将猴头菌子实体干燥、粉碎、过筛后得到的粉末。所述的干燥的温度为40～70℃；优选为50℃。所述的过筛为过80～120目筛；优选为过100目筛，得到的猴头菌粉末的颗粒尺寸约为150μm。步骤(1)中所述的水提的方法如下：将水与猴头菌粉末混匀，加热，固液分离，得到的药渣重复提取0次以上；将得到的提取液合并。所述的水的用量为按照猴头菌粉末：水＝料液比为1：10～1：20(g：mL)配比计算；优选为按照猴头菌粉末：水＝料液比为1：15(g：mL)配比计算。所述的加热为70～100℃条件下水浴1～5h；优选为85℃条件下水浴3h。所述的水为蒸馏水。所述的重复提取的次数优选为3次。所述的固液分离的方式优选为离心。所述的离心的条件为2000～5000rpm离心10～20min；优选为3000rpm离心15min。步骤(2)中所述的醇沉中所用的醇优选为乙醇。所述的乙醇的用量为按照醇在醇沉体系中的浓度为体积比80～85％计算；优选为按照醇在醇沉体系中的浓度为体积比85％计算。步骤(2)中所述的收集沉淀的方式优选为抽滤。步骤(3)中所述的大孔树脂为食品级D315大孔树脂；其用量按相当于粗多糖溶解液1/3～1/2体积计算。步骤(3)中所述的脱色优选在搅拌状态下进行。所述的搅拌为200～500rpm搅拌2～5h；优选为300rpm搅拌4h。步骤(2)和(3)中所述的干燥为-0.1MPa、50℃条件下真空干燥。步骤(4)中所述的脱色脱蛋白的粗多糖溶液为了更有利于进行步骤(5)中的透析，优选还包括浓缩或干燥步骤，使其体积进一步缩小。步骤(4)中所述的蛋白酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶中的至少一种；优选为木瓜蛋白酶。所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶时，调整pH值至4～6；优选为调整pH值至5.5。所述的蛋白酶为胰蛋白酶时，调整pH值至6～8；优选为调整pH值至7.5。所述的蛋白酶为胃蛋白酶时，调整pH值至2～4；优选为调整pH值至2.5。所述的蛋白酶为菠萝蛋白酶时，调整pH值至6～8；优选为调整pH值至7.0。所述的木瓜蛋白酶的用量为10～20U/mg；优选为15U/mg。所述的胰蛋白酶的用量为5～15U/mg；优选为10U/mg。所述的胃蛋白酶的用量为5～15U/mg；优选为10U/mg。所述的菠萝蛋白酶的用量为10～20U/mg；优选为15U/mg。步骤(4)中所述的脱蛋白的温度为55～60℃；优选为60℃。步骤(4)中所述的脱蛋白的时间为3～8h；优选为4h。步骤(5)中所述的透析是采用透析袋在离子水中透析24～36h；优选为透析36h。所述的透析袋的截留分子量为3.5kDa。步骤(5)中所述的超滤的超滤膜截留分子量为10kDa。步骤(5)中所述的超滤优选采用MilliporeAmiconUltra超滤离心管。步骤(5)中所述的离心为25℃条件下7500g离心10min。步骤(6)中所述的柱层析是采用DEAE-52纤维素树脂进行柱层析。所述的DEAE-52纤维素树脂的上样量为柱床体积的1～5％。步骤(6)中所述的浓缩为真空浓缩。步骤(6)中所述的干燥为冷冻干燥。一种低分子量猴头菌多糖，通过上述制备方法制备得到。上述低分子量猴头菌多糖在制备预防和修复胃黏膜细胞氧化损伤药物中的应用。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：1.本专利技术的制备方法反应条件温和，制备过程绿色、环保，得到的低分子量猴头菌多糖保持了良好的活性。2.本专利技术的低分子量猴头菌多糖分子量在10kDa以下，将其用于预防和修复胃黏膜细胞氧化损伤效果更加显著，对GES-1细胞相对增殖率的提高分别达到69.07％和78.7％。附图说明图1是胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶的脱蛋白效果图。图2是猴头菌粗多糖HEPC和低分子量猴头菌多糖HEPW1的FT-IR谱图。图3是猴头菌粗多糖HEPC和低分子量猴头菌多糖HEPW1的SEM图。图4是猴头菌粗多糖HEPC、低分子量猴头菌多糖HEPW1及对照样品HEP1的细胞毒性评估结果图。图5是猴头菌粗多糖HEPC、低分子量猴头菌多糖HEPW1及对照样品HEP1预防胃黏膜细胞氧化损伤效果图；其中，a、b、c和d代表显著性差异水平，相同字母表示差异性不显著，b、c和d依次代表差异更显著。图6是猴头菌粗多糖HEPC、低分子量猴头菌多糖HEPW1及对照样品HEP1修复胃黏膜细胞氧化损伤效果图；其中，a、b、c和d代表显著性差异水平，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种低分子量猴头菌多糖的制备方法，其特征在于具体包括如下步骤：/n(1)将猴头菌粉末进行水提，得到猴头菌多糖水提物；/n(2)向步骤(1)得到的猴头菌多糖水提物醇沉，收集沉淀，干燥，得到多糖粗提物；/n(3)用水将步骤(2)得到的多糖粗提物溶解，得到粗多糖溶解液；将粗多糖溶解液和大孔树脂混合进行脱色，固液分离，将得到的液体干燥，得到脱色的粗多糖；/n(4)用水将步骤(3)得到的脱色的粗多糖溶解，使用蛋白酶进行酶解脱蛋白，过滤，得到脱色脱蛋白的粗多糖溶液；/n(5)将步骤(4)得到的脱色脱蛋白的粗多糖溶液透析，超滤，离心，得到分子量＜10kDa的粗多糖溶液；/n(6)将步骤(5)得到的分子量＜10kDa的粗多糖溶液采用柱层析进行纯化，浓缩，干燥，得到低分子量猴头菌多糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种低分子量猴头菌多糖的制备方法，其特征在于具体包括如下步骤：
(1)将猴头菌粉末进行水提，得到猴头菌多糖水提物；
(2)向步骤(1)得到的猴头菌多糖水提物醇沉，收集沉淀，干燥，得到多糖粗提物；
(3)用水将步骤(2)得到的多糖粗提物溶解，得到粗多糖溶解液；将粗多糖溶解液和大孔树脂混合进行脱色，固液分离，将得到的液体干燥，得到脱色的粗多糖；
(4)用水将步骤(3)得到的脱色的粗多糖溶解，使用蛋白酶进行酶解脱蛋白，过滤，得到脱色脱蛋白的粗多糖溶液；
(5)将步骤(4)得到的脱色脱蛋白的粗多糖溶液透析，超滤，离心，得到分子量＜10kDa的粗多糖溶液；
(6)将步骤(5)得到的分子量＜10kDa的粗多糖溶液采用柱层析进行纯化，浓缩，干燥，得到低分子量猴头菌多糖。


2.根据权利要求1所述的低分子量猴头菌多糖的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的醇沉中所用的醇为乙醇；
步骤(3)中所述的大孔树脂为食品级D315大孔树脂；
步骤(4)中所述的蛋白酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶中的至少一种；
步骤(4)中所述的脱蛋白的温度为55～60℃；
步骤(4)中所述的脱蛋白的时间为3～8h；
步骤(5)中所述的透析是采用透析袋在离子水中透析24～36h；
所述的透析袋的截留分子量为3.5kDa；
步骤(5)中所述的超滤的超滤膜截留分子量为10kDa；
步骤(6)中所述的柱层析是采用DEAE-52纤维素树脂进行柱层析。


3.根据权利要求2所述的所述的低分子量猴头菌多糖的制备方法，其特征在于：
所述的乙醇的用量为按照乙醇在醇沉体系中的浓度为体积比80～85％计算；
步骤(3)中所述的大孔树脂其用量按相当于粗多糖溶解液1/3～1/2体积计算；
步骤(4)中所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶；
步骤(4)中所述的脱蛋白的温度为60℃；
步骤(4)中所述的脱蛋白的时间为4h；
步骤(5)中所述的透析是采用透析袋在离子水中透析36h；
所述的DEAE-52纤维素树脂的上样量为柱床体积的1～5％。


4.根据权利要求3所述的低分子量猴头菌多糖的制备方法，其特征在于：
所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶时，调整pH值至4～6；
所述的蛋白酶为胰蛋白酶时，调整pH值至6～8；
所述的蛋白酶为胃蛋白酶时，调整pH值至2～4；
所述的蛋白酶为菠萝蛋白酶时，调整pH值至6～8；
所述的木瓜蛋白酶的用量为10～20U/mg；
所述的胰蛋白酶的用量为5～15U/mg；
所述的胃蛋白酶的用量为5～15U/mg；
所述的菠萝蛋白酶的用...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘婷婷，蔡玉荣，周春晖，王兴广，黄惠华，廖兵武，
申请(专利权)人：广东太阳神集团有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44