【技术实现步骤摘要】
溶瘤病毒疫苗和过继性免疫细胞联合疗法
本公开涉及用于治疗癌症的免疫治疗方法，包括溶瘤病毒治疗，溶瘤病毒疫苗以及溶瘤病毒疫苗与T细胞组合疗法。
技术介绍
癌症和常规的癌症治疗剂目前在情绪/身体痛苦、失去生命和增加医疗保健成本方面带来了显著的社会经济负担。常规的疗法显示出一些有益的临床效果但是伴随着产生降低患者的生活质量的毒副作用[1]。临床治疗中需要有更有效的且更低的毒副作用的癌症疗法。充分理解的是，恶性肿瘤(neoplasticmalignancy)可以被免疫系统有效地消除，并且相对于其它治疗方式，免疫疗法是癌症治疗最具前景的替代方式[2]。例如通常认为，具有针对肿瘤相关抗原具有特异性识别能力的的T细胞等免疫细胞具有破坏肿瘤的能力，作为自然肿瘤细胞更新的结果或者通过给予治疗性疫苗，可以在癌症患者中诱导出这样的细胞。不幸的是，一旦浸润至肿瘤组织中，这些细胞通常被证明是不能发挥功能的，并且它们经常显示出功能障碍的表型并且由于肿瘤诱导的局部免疫抑制而导致缺乏对于减少或破坏肿瘤必要的对抗肿瘤细胞的能力[3-5]。因此，免疫抑制型肿瘤微环境仍然是肿瘤治疗的显著障碍，其会减弱常规的癌症免疫治疗诱导产生的免疫应答。基于免疫检查点抑制剂的疗法已经开发用于减轻对肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的抑制性信号传导并且可以激活内源性抗肿瘤应答[6,7]。检查点抑制剂已经在临床试验中显示出疗效，但是未在所有经治疗的受试者中观察到应答[8]。免疫检查点抑制剂疗法依赖于预先存在的TAA特异性T细胞的活化，但是在一些患者中，由于...
【技术保护点】
1.一种重组溶瘤棒状病毒的改性基质蛋白(M)，其特征在于，编码所述改性基质蛋白(M)的氨基酸序列与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列相比，具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少98％相同的序列；并且，所述氨基酸序列和SEQ ID NO：1相比，存在如(i)或(ii)所示的替换：/n(i)第21位置、第51位置、第111位置和第221位置同时具有氨基酸替换；/n(ii)第51位置、第221位置、第226位置同时具有氨基酸替换。/n
【技术特征摘要】
1.一种重组溶瘤棒状病毒的改性基质蛋白(M)，其特征在于，编码所述改性基质蛋白(M)的氨基酸序列与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列相比，具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少98％相同的序列；并且，所述氨基酸序列和SEQIDNO：1相比，存在如(i)或(ii)所示的替换：
(i)第21位置、第51位置、第111位置和第221位置同时具有氨基酸替换；
(ii)第51位置、第221位置、第226位置同时具有氨基酸替换。
2.根据权利要求1所述的改性基质蛋白(M)，其中，所述重组溶瘤棒状病毒选自水疱性口炎病毒；优选的，所述重组溶瘤棒状病毒选自水疱性口炎病毒印第安纳株；更优选的，所述重组溶瘤棒状病毒选自MuddSummer株。
3.根据权利要求1-2任一项所述的改性基质蛋白(M)，其特征在于，所述的改性的基质蛋白(M)的序列和SEQIDNO:1相比，编码改性基质蛋白(M)的氨基酸序列存在如(i)或(ii)所示的替换：
(i)第21位置、第51位置、第111位置和第221位置同时具有氨基酸替换，所述氨基酸替换方式为：
(a)第21位甘氨酸G替换为谷氨酸E，
(b)第51甲硫氨酸M替换为丙氨酸A，
(c)第111位亮氨酸L替换为苯丙氨酸F，
(d)第221位缬氨酸V替换为苯丙氨酸F；
或
(ii)第51位置、第221位置、第226位置同时具有氨基酸替换，所述氨基酸替换方式为：
(a)第51位甲硫氨酸M替换为精氨酸R，
(b)第221位缬氨酸V替换为苯丙氨酸F，
(c)第226位甘氨酸G替换为精氨酸R；
优选的，所述改性基质蛋白(M)第21位置、第51位置、第111位置和第221位置同时具有氨基酸替换的序列为如SEQIDNO:3所示的序列；
所述改性基质蛋白(M)第51位置、第221位置、第226位置同时具有氨基酸替换的序列为如SEQIDNO:5所示的序列。
4.一种重组溶瘤棒状病毒，其特征在于，所述重组溶瘤棒状病毒基因组包含改性基质蛋白(M)，其特征在于，所述改性基质蛋白(M)的氨基酸序列为如权利要求1-3任一项中所示的氨基酸序列；优选的，所述重组溶瘤棒状病毒为减毒的溶瘤棒状病毒；更优选的，所述重组溶瘤棒状病毒为减毒延时感染的溶瘤棒状病毒。
5.一种包含分离的重组溶瘤棒状病毒的组合物，所述重组溶瘤棒状病毒基因组具有核酸片段，所述核酸片段编码改性基质蛋白(M)，其特征在于，所述改性基质蛋白(M)的氨基酸序列为根据权利要求1-3任一项中所示的氨基酸序列；优选的，所述重组溶瘤棒状病毒为减毒的重组溶瘤棒状病毒；更优选的，所述重组溶瘤棒状病毒为减毒延时感染的溶瘤棒状病毒。
6.根据权利要求5所述的组合物，所述组合物进一步包含第二溶瘤病毒；优选的，所述第二溶瘤病毒选自包含弹状病毒、牛痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、腺病毒、甲病毒、细小病毒、肠道病毒株的一种或多种；更优选的，所述第二溶瘤病毒为减毒的溶瘤病毒；最优选的，其中所述第二溶瘤病毒为减毒的弹状病毒。
7.根据权利要求5-6任一项所述的组合物，所述组合物进一步包括第二抗肿瘤制剂；优选的，所述第二抗肿瘤制剂是免疫治疗剂、化学治疗剂或放射治疗剂；更优选的，所述第二抗肿瘤制剂选自小分子，大分子，细胞，病毒载体，基因载体，DNA，RNA，多肽，和纳米复合物中的一种或多种。
8.一种疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包含治疗有效量的一种或多种重组溶瘤棒状病毒，其中，所述一种或多种重组溶瘤棒状病毒基因组包含改性基质蛋白(M)，所述改性基质蛋白(M)的氨基酸序列为如权利要求1-3任一项所示的氨基酸序列。
9.根据权利要求8所述的疫苗组合物，其特征在于，其还可以包含如权利要求6中所述的第二溶瘤病毒，或如权利要求7中所述的第二抗肿瘤制剂。
10.一种分离的肽，其由氨基酸序列编码而成，所述氨基酸序列选自包含与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少98％相同的序列，并且，所述氨基酸序列和SEQIDNO：1相比，存在如(i)或(ii)所示的替换：
(i)第21位置、第51位置、第111位置和第221位置同时具有氨基酸替换，所述氨基酸替换方式为：
(a)第21位甘氨酸G替换为谷氨酸E，
(b)第51甲硫氨酸M替换为丙氨酸A，
(c)第111位亮氨酸L替换为苯丙氨酸F，
(d)第221位缬氨酸V替换为苯丙氨酸F；
或
(ii)第51位置、第221位置、第226位置同时具有氨基酸替换，所述氨基酸替换方式为：
(a)第51位甲硫氨酸M替换为精氨酸R，
(b)第221位缬氨酸V替换为苯丙氨酸F，
(c)第226位甘氨酸G替换为精氨酸R；
优选的，所述改性基质蛋白(M)第21位置、第51位置、第111位置和第221位置同时具有氨基酸替换的序列为如SEQIDNO:3所示的序列；
所述改性基质蛋白(M)第51位置、第221位置、第226位置同时具有氨基酸替换的序列为如SEQIDNO:5所示的序列。
11.一种用于编码权利要求10所述分离的肽的核苷酸序列。
12.根据权利要求5-7任一项所述的包含分离的重组溶瘤棒状病毒的组合物或权利要求8-9任一项所述的疫苗在制备药物中的应用，所述药物可以杀死异常增生性细胞、诱导促进抗肿瘤免疫反应、抗肿瘤免疫细胞特异性增殖、抗肿瘤免疫细胞归巢侵润肿瘤组织和/或消除肿瘤组织微环境免疫抑制。
13.根据权利要求11所述的应用，其中所述异常增生性细胞被包含在患者体内。
14.根据权利要求12所述的应用，其中所述异常增生性细胞选自肿瘤细胞或肿瘤组织相关细胞；优选的，所述肿瘤细胞是癌细胞；更优选的，所述癌细胞是转移性癌细胞。
15.根据权利要求5-7任一项所述的包含分离的重组溶瘤棒状病毒的组合物或根据权利要求8-9任一项所述的疫苗在制备治疗患有肿瘤的患者的药物中的应用。
16.一种缓慢持续杀伤异常增生性细胞的方法，包括将所述异常增生性细胞与根据权利要求4所述的重组溶瘤棒状病毒、根据权利要求5-7任一项所述的包含分离的重组溶瘤棒状病毒的组合物或根据权利要求8-9任一项所述的疫苗接触的步骤。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述异常增生性细胞被包含在患者体内。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述异常增生性细胞选自肿瘤细胞或肿瘤组织相关细胞；优选的，所述肿瘤细胞是癌细胞；更优选的，所述癌细胞是转移性癌细胞。
19.根据权利要求16所述的方法，其中所述重组溶瘤棒状病毒、包含分离的重组溶瘤棒状病毒的组合物或疫苗被施用至患者体内。
20.根据权利要求16所述的方法，其中所述重组溶瘤棒状病毒、包含分离的重组溶瘤棒状病毒的组合物或疫苗通过包括腹膜内、静脉内、动脉内、肌肉内、皮肤内、瘤内、皮下或鼻内给药中的一种或多种的给药方式而被施用；优选的，所述给药方式的给药途径包括内镜、腔镜、介入、微创、传统手术中的一种或多种。
21.根据权利要求16所述的方法，所述方法进ー步包括施用第二抗肿瘤疗法的步骤。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述第二抗肿瘤疗法选自施用第二溶瘤病毒；优选的，所述第二溶瘤病毒选自包含弹状病毒、牛痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、腺病毒、甲病毒、细小病毒、肠道病毒株的一种或多种；更优选的，所述第二溶瘤病毒为减毒的溶瘤病毒；最优选的，其中所述第二溶瘤病毒为减毒的弹状病毒。
23.根据权利要求21所述的方法，其中所述第二抗肿瘤疗法选自化学疗法、放射疗法、免疫疗法、手术疗法中的一种或多种。
24.一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其特征在于所述方法包含对受试者施用选自如权利要求4所述的重组溶瘤棒状病毒、权利要求5-7任一项所述包含分离的重组溶瘤棒状病毒的组合物或权利要求8-9任一项所述的疫苗中的一种或多种。
25.一种诱导促进抗肿瘤免疫反应，抗肿瘤免疫细胞特异性增殖，抗肿瘤免疫细胞浸润肿瘤组织或消除肿瘤组织微环境免疫抑制的方法，包括将肿瘤或肿瘤组织与根据权利要求4所述的重组溶瘤棒状病毒、根据权利要求5-7任一项所述的包含分离的重组溶瘤棒状病毒的组合物或根据权利要求8-9任一项所述的疫苗接触的步骤。
26.一种抗肿瘤用组合物，所述抗肿瘤用制品包括(i)复制型溶瘤病毒疫苗；(ii)过继性免疫细胞。
27....
【专利技术属性】
技术研发人员：秦晓峰，万永红，斯科特·沃尔什，吴飞，陈岚，
申请(专利权)人：苏州奥特铭医药科技有限公司，鸿易医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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