一种溶瘤病毒、合成DNA序列及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种溶瘤病毒、合成DNA序列及其应用。所述溶瘤病毒其基因组上插入有外源碱性肽段的表达序列，并在生理过程中表达所述碱性肽段，使得其感染的宿主环境pH值增大。所述合成DNA序列用于表达碱性肽段，所述碱性肽段中碱性氨基酸含量超过60％。本发明专利技术提供的溶瘤病毒及合成DNA序列，应用于制备抗肿瘤药物，具有良好的抗肿瘤效果。

A oncolytic virus, synthetic DNA sequence and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种溶瘤病毒、合成DNA序列及其应用
本专利技术属于生物医疗领域，更具体地，涉及一种溶瘤病毒、碱性肽段及其应用。
技术介绍
溶瘤病毒具备感染并在肿瘤细胞中增殖，进而破坏肿瘤组织的特性。在临床研究中，多种具备溶瘤特性的病毒用于治疗不同癌症的安全性和治疗效力已被报道和证实。目前的溶瘤病毒，主要作用原理包括：1)溶瘤病毒能利用靶细胞中特定基因的失活或缺失，选择性地感染肿瘤细胞，进而最终摧毁肿瘤细胞。例如腺病毒、新城病毒、柯萨奇病毒为代表的单链RNA病毒，RNA的复制在胞质中进行，不会导致宿主细胞的插入性基因变异。柯萨奇病毒基于在小鼠中的抗原性分为A和B两种亚型，大多数情况下，感染野生型柯萨奇病毒的患者只会出现温和的“感冒”症状。目前，两种亚型的柯萨奇病毒都有被单独或联合用于肿瘤治疗的尝试。2)以“杀死”肿瘤细胞为目的的溶瘤病毒，毒性较强，且当机体被野生型病毒感染后，可能会发生发热、寒栗之类的病理反应。伴随着血清中AMY、CK、AST、ALT等指标的升高，机体的脏器可能会受到损伤。例如，胰腺外泌组织损伤，心肌组织和肝部炎症等现象。
技术实现思路
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本专利技术提供了一种溶瘤病毒、合成DNA序列及其应用，其目的在于通过提供一种能改变肿瘤微环境的溶瘤病毒，抑制肿瘤细胞，由此解决现有的溶瘤病毒肿瘤抑制效果不佳或者毒性过强的技术问题。为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供了一种溶瘤病毒，其特征在于，其基因组上插入有外源碱性肽段的表达序列，并在生理过程中表达所述碱性肽段，使得其感染的宿主环境pH值增加，增幅约0.4约0.6。优选地，所述溶瘤病毒，其所述溶瘤病毒为疱疹病毒、柯萨奇病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、脊髓灰质炎病毒、逆转录酶病毒、呼肠孤病毒、呼吸道合胞病毒、细小病毒H1、水疱性口炎病毒、或新城疫病毒，优选腺病毒、新城病毒或柯萨奇病毒。优选地，所述溶瘤病毒，其所述外源碱性肽段为4肽至10肽。优选地，所述溶瘤病毒，其所述外源碱性肽段中碱性氨基酸含量超过60％。优选地，所述溶瘤病毒，其所述外源碱性肽段中碱性氨基酸含量超过80％。优选地，所述溶瘤病毒，其所述碱性氨基酸选自：精氨酸、赖氨酸或组氨酸。优选地，所述溶瘤病毒，其所述碱性氨基酸选自：精氨酸或赖氨酸。优选地，所述溶瘤病毒，其所述碱性肽段的N端氨基酸为赖氨酸。优选地，所述溶瘤病毒，其所述外源碱性肽段选自以下肽段：(1)Arg-Lys-Arg-Lys；(2)Lys-Arg-Lys-Arg；(3)Arg-Arg-Lys-Lys；(4)Lys-Lys-Arg-Arg；(5)Lys-Arg-Arg-Lys；(6)Arg-Lys-Lys-Arg；(7)Arg-Arg-His-Lys-Lys；(8)Lys-His-Arg-Lys-His-Arg；(9)Lys-His-Arg-Cys-Lys-Pro；(10)Arg-Arg-His-Lys-Met-Lys；(11)His-Arg-Lys-Cys-Arg-Lys；(12)Lys-Arg-Trp-Arg-Lys-His-Arg；(13)His-Lys-Gly-Arg-Lys-Cys-Arg-Val；(14)Lys-Arg-Trp-His-Lys-Met-Arg-Lys-His；(15)His-Phe-Trp-Arg-Gln-Cys-Ala-Met-Lys；(16)Tyr-Phe-Pro-Arg-His-Gln-Lys-Trp-Lys；(17)Trp-Lys-Tyr-Arg-Gln-Ile-Ser-Thr-Cys；(18)Arg-Lys-His-Lys-Met-Arg-Lys-Cys-His-Lys。优选地，所述溶瘤病毒，其所述溶瘤病毒为柯萨奇病毒B3株。优选地，所述溶瘤病毒，其所述外源碱性肽段选自：(5)Lys-Arg-Arg-Lys；(14)Lys-Arg-Trp-His-Lys-Met-Arg-Lys-His；(15)His-Phe-Trp-Arg-Gln-Cys-Ala-Met-Lys。优选地，所述溶瘤病毒，其所述溶瘤病毒为变异减毒株柯萨奇病毒B3株，包含如下碱基突变位点：T96C、G1180A、T1654C、T1756C、G2276A、A2685C、G2690A、C3120A、A3231G、G4327A、T5088C、A5270G、C7026T、和/或G7192A。优选地，所述溶瘤病毒，其所述外源碱性肽段的编码序列插入在pVAX1载体上。优选地，所述溶瘤病毒，其所述外源碱性肽段选自以下肽段：Lys-Arg-Trp-His-Lys-Met-Arg-Lys-His。按照本专利技术的另一个方面提供了所述溶瘤病毒的应用，本专利技术提供的溶瘤病毒应用于制备抗肿瘤药物。优选地，所述应用，其本专利技术提供的溶瘤病毒应用于制备抗实体瘤药物。优选地，所述应用，其本专利技术提供的溶瘤病毒应用于制备抗呼吸道系统肿瘤、消化道系统肿瘤、内分泌系统肿瘤、或妇科肿瘤的药物。按照本专利技术的另一个方面提供了一种抗肿瘤药物，其特征在于，包括本专利技术提供的溶瘤病毒。优选地，所述抗肿瘤药物还包括检验点抑制剂。按照本专利技术的另一个方面，提供了一种恶性肿瘤的治疗方法，其将本专利技术提供的抗肿瘤药物经静脉给药或局部给药至病灶。优选地，所述治疗方法，其所述恶性肿瘤为实体瘤。优选地，所述治疗方法，其所述恶性肿瘤为呼吸道系统肿瘤、消化道系统肿瘤、内分泌系统肿瘤、或妇科肿瘤。按照本专利技术的另一个方面提供了一种合成DNA序列，其所述合成DNA序列用于表达碱性肽段，所述碱性肽段中碱性氨基酸含量超过60％。优选地，所述合成DNA序列，其所述碱性肽段中碱性氨基酸含量超过80％。优选地，所述合成DNA序列，其所述碱性氨基酸选自：精氨酸、赖氨酸或组氨酸。优选地，所述合成DNA序列，其所述碱性氨基酸选自精氨酸或赖氨酸。优选地，所述合成DNA序列，其所述碱性肽段的N端氨基酸为赖氨酸。优选地，所述合成DNA序列，其所述外源碱性肽段选自以下肽段：(1)Arg-Lys-Arg-Lys；(2)Lys-Arg-Lys-Arg；(3)Arg-Arg-Lys-Lys；(4)Lys-Lys-Arg-Arg(5)Lys-Arg-Arg-Lys；(6)Arg-Lys-Lys-Arg；(7)Arg-Arg-His-Lys-Lys；(8)Lys-His-Arg-Lys-His-Arg；(9)Lys-His-Arg-Cys-Lys-Pro；(10)Arg-Arg-His-Lys-Met-Lys；(11)His-Arg-Lys-Cys-Arg-Lys；(12)Lys-Arg-Trp-Arg-Lys-His-Arg；(13)His-Lys-Gly-Arg-Lys-Cys-Arg-Val；(14)Lys-Arg-Tr本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种溶瘤病毒，其特征在于，其基因组上插入有外源碱性肽段的表达序列，并在生理过程中表达所述碱性肽段，使得其感染的宿主环境pH值增大。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180314 US 62/643166一种溶瘤病毒，其特征在于，其基因组上插入有外源碱性肽段的表达序列，并在生理过程中表达所述碱性肽段，使得其感染的宿主环境pH值增大。


如权利要求1所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒使得其感染的宿主环境pH值增大0.4至0.6。


如权利要求1所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述外源碱性肽段为4肽至10肽。


如权利要求3所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述外源碱性肽段中碱性氨基酸含量超过60％。


如权利要求4所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述外源碱性肽段中碱性氨基酸含量超过80％。


如权利要求3或4所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述碱性氨基酸选自：精氨酸、赖氨酸或组氨酸。


如权利要求6所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述碱性氨基酸选自：精氨酸或赖氨酸。


如权利要求1所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述外源碱性肽段选自以下肽段：
(1)Arg-Lys-Arg-Lys；(2)Lys-Arg-Lys-Arg；(3)Arg-Arg-Lys-Lys；(4)Lys-Lys-Arg-Arg；
(5)Lys-Arg-Arg-Lys；(6)Arg-Lys-Lys-Arg；(7)Arg-Arg-His-Lys-Lys；(8)Lys-His-Arg-Lys-His-Arg；
(9)Lys-His-Arg-Cys-Lys-Pro；(10)Arg-Arg-His-Lys-Met-Lys；(11)His-Arg-Lys-Cys-Arg-Lys；
(12)Lys-Arg-Trp-Arg-Lys-His-Arg；(13)His-Lys-Gly-Arg-Lys-Cys-Arg-Val；
(14)Lys-Arg-Trp-His-Lys-Met-Arg-Lys-His；(15)His-Phe-Trp-Arg-Gln-Cys-Ala-Met-Lys；
(16)Tyr-Phe-Pro-Arg-His-Gln-Lys-Trp-Lys；(17)Trp-Lys-Tyr-Arg-Gln-Ile-Ser-Thr-Cys；
(18)Arg-Lys-His-Lys-Met-Arg-Lys-Cys-His-Lys。


如权利要求1至8任意一项所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒为柯萨奇病毒B3株。


如权利要求9所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述外源碱性肽段选自：
(5)Lys-Arg-Arg-Lys；(14)Lys-Arg-Trp-His-Lys-Met-Arg-Lys-His；
(15)His-Phe-Trp-Arg-Gln-Cys-Ala-Met-Lys。


如权利要求10所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒为变异减毒株柯萨奇病毒B3株，包含如下碱基突变位点：T96C、G1180A、T1654C、T1756C、G2276A、A2685C、G2690A、C3120A、A3231G、G4327A、T5088C、A5270G、C7026T、和/或G7192A。

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡立刚，
申请(专利权)人：武汉博威德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42