本发明专利技术公开了检测及靶向lncRNA生物标志物的试剂及其在肝细胞癌中的应用，本发明专利技术首次发现了CTD‑2561J22.5在肝癌患者中表达上调，通过对有关数据进行ROC曲线分析，发现CTD‑2561J22.5具有较高的诊断效能。本发明专利技术同时通过细胞实验证明了下调CTD‑2561J22.5的表达水平可以降低肝癌细胞的增殖活性，说明CTD‑2561J22.5可作为分子靶标应用于肝细胞癌的治疗。
Reagents for detecting and targeting lncrna biomarkers and their application in HCC
【技术实现步骤摘要】
检测及靶向lncRNA生物标志物的试剂及其在肝细胞癌中的应用
本专利技术涉及生物
，涉及检测及靶向lncRNA生物标志物的试剂及其在肝细胞癌中的应用。
技术介绍
肝细胞癌(HepatocellularCarcinoma)的发病率在世界范围内总体呈明显上升的趋势，作为全球最常见的恶性癌症之一，肝细胞癌具有高致死率的特征(FornerA,ReigM,BruixJ[J].Hepatocellularcarcinoma.Lancet.2018,391(10127):1301-14.)。目前，肝细胞癌的潜在治愈性治疗包括肝切除和移植，但五年的术后生存率仍然很低。在所有恶性癌症中肝细胞癌发病率目前排在的第五位。作为全球最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率中极高，排名前三名分别是胃癌、肺癌、肝癌。最近几年，肝细胞癌的发病率在非洲和亚洲这样的发展中国家依然居高不下，其中我国目前肝细胞癌患者总人数比重已经超过全球肝细胞癌患者总数的50％(LiuY，HeH，WuG，etal.CIP2Aishighlyexpressedinhepatocellularcarcinomaandpredictspoorprognosis.[J].DiagnosticMolecularPathology,2012,21(3):143-149.)。我国肝细胞癌患者中最主要的病因各类病毒性肝炎，其中主要部分是慢性病毒性乙型肝炎和病毒性丙型肝炎；由于长期的饮酒导致的酒精性肝硬化，以及饮用水被污染同样也是诱发肝细胞癌发生的重要原因。许多原发性肝癌的患者早期并无任何特殊症状，直至进展期出临床症状才得以发现(FengJT，ShangS，BerettaL.Proteomicsfortheearlydetectionandtreatmentofhepatocellularcarcinoma[J].Oncogene,2006,25(27):3810-3817.)。近年来，伴随着有效的外科手术技术的发展以及诊断水平的提高，原发性肝癌患者的预后较过去已有所改善，然而，由于肝细胞癌患者外科切除术后复发率高达50-70％，患者的长期预后仍然不太理想。由于人们对肝细胞型肝癌发病的分子机制了解太少，因此对于肝细胞癌患者来讲迫切需要确定可靠的有价值的诊断及与预后相关的生物指标，以此改善患者的临床结局以及发展有效的个体化治疗策略。长链非编码RNA(longnon-codingRNAs,1ncRNAs)是一类长度大于200个核苷酸、不编码蛋白的内源性RNA。它们通常位于相邻基因间或编码蛋白的序列重叠区，并由RNA聚合酶II转录(QuinnJJ,ChangHY.Uniquefeaturesoflongnon-codingRNAbiogenesisandfunction[J].NatRevGenet,2016,17(1):47-62)。LncRNAs可以折叠形成独特的二级结构，包括DNA结合结构域、RNA结合结构域以及蛋白质结合结构域，从而广泛调节DNA,RNA和蛋白质的功能。大量研究表明，1ncRNAs可以在转录水平或转录后水平以多种机制调控蛋白编码基因的表达，如参与染色质重塑、作为ceRNAs抑制miRNA的功能或影响mRNA的稳定性等(HuynhNP,AndersonBA,GuilakF,McAlindenA.EmergingrolesforlongnoncodingRNAsinskeletalbiologyanddisease[J].ConnectTissueRes,2017,58(1):116-141.)。近年来，越来越多的证据表明，1ncRNAs参与调控细胞的增殖、凋亡、分化以及肿瘤的发生发展等正常生理以及病理过程(ShinVY,ChenJ,CheukIW,SiuMT,HoCW,WangX,JinH,KwongA.Longnon-codingRNANEAT1confersoncogenicroleintriple-negativebreastcancerthroughmodulatingchemoresistanceandcancersternness[J].CellDeathDis,2019,10(4):270.)。随着lncRNA研究的进展，寻找更多对肝细胞癌具有重要调控作用的长链非编码RNA对认识肿瘤的发生发展，并以此提供相应的防治措施有不可忽略的作用，成为目前研究的热点。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种与肝细胞癌发生发展相关的生物标志物及其在诊断和治疗肝细胞癌中的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了用于测定肝细胞癌病相关基因的试剂在制备诊断肝细胞癌的产品中的应用，相关基因包括生物标志物CTD-2561J22.5。进一步，相比于生物标志物CTD-2561J22.5正常对照表达水平，肝细胞癌患者中生物标志物CTD-2561J22.5的表达水平升高。进一步，在转录水平上测定生物标志物CTD-2561J22.5的表达水平。进一步，通过检测探针与所述生物标志物CTD-2561J22.5杂交或通过扩增所述生物标志物CTD-2561J22.5来测定生物标志物CTD-2561J22.5的表达水平。进一步，杂交步骤在核酸微阵列芯片或微流体测定板中进行。进一步，扩增反应。包括聚合酶链式反应(PCR)。进一步，聚合酶链式反应包括实时定量聚合酶链式反应。进一步，实时定量聚合酶链式反应的引物序列如SEQIDNO.1～2所示。进一步，在选自血液、血清、血浆和组织的生物样本中检测所述表达水平。在本专利技术的具体实施方式中，所述样本为组织。本专利技术提供了一种诊断肝细胞癌的产品，所述产品包括检测生物标志物CTD-2561J22.5的试剂。本专利技术提供了CTD-2561J22.5在构建预测肝细胞癌的计算模型中的应用。本专利技术提供了CTD-2561J22.5作为分子靶标在制备治疗肝细胞癌的药物组合物中的应用。进一步，所述药物组合物包括生物标志物CTD-2561J22.5的抑制剂。进一步，所述抑制剂降低CTD-2561J22.5的表达。进一步，所述抑制剂为siRNA。进一步，所述siRNA的序列如SEQIDNO.5～6所示。本专利技术提供了一种治疗肝细胞癌的药物组合物，所述药物组合物包括生物标志物CTD-2561J22.5的抑制剂。进一步，所述抑制剂为降低CTD-2561J22.5表达水平的物质，优选的，所述抑制剂为siRNA。进一步，所述siRNA的序列如SEQIDNO.5～6所示。进一步，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。本专利技术提供了CTD-2561J22.5在筛选治疗肝细胞癌的候选药物中的应用，包括以下步骤：1)使测试物质与表达CTD-2561J22.5基因的细胞接触；并2)选择与在该测试物质不存在时检测到的表达水平相比降低CTD-2561J22.5基因的表达水本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于测定肝细胞癌相关基因的试剂在制备诊断肝细胞癌的产品中的应用，其特征在于，相关基因包括生物标志物CTD-2561J22.5。/n
【技术特征摘要】
1.用于测定肝细胞癌相关基因的试剂在制备诊断肝细胞癌的产品中的应用，其特征在于，相关基因包括生物标志物CTD-2561J22.5。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，相比于生物标志物CTD-2561J22.5在正常对照中的表达水平，肝细胞癌患者中生物标志物CTD-2561J22.5的表达水平升高。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过检测探针与所述生物标志物CTD-2561J22.5杂交或通过扩增所述生物标志物CTD-2561J22.5来测定生物标志物CTD-2561J22.5的表达水平。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，扩增反应包括实时定量聚合酶链式反应，优选的，实时定量聚合酶链式反应的引物序列如SEQIDNO.1～2所示。
5.一种诊断肝细胞癌的产品，其特征在于，所述产品包括检测生物标志物CTD-2561J22.5的试剂。
6.CTD-2561J22.5在构建预测肝细胞癌的计算模型中的应用。
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄孝伦，姚豫桐，冯天航，赖春友，
申请(专利权)人：四川省人民医院，
类型：发明
国别省市：四川;51
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