一种检测儿童安全用药相关基因突变位点的引物组合序列和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测儿童安全用药相关基因突变位点的引物组合序列和试剂盒。试剂盒包括23对扩增引物，能特异地扩增儿童安全用药相关基因23个常见突变位点区域；23条单碱基延伸引物，用于检测儿童安全用药相关基因23个突变位点基因型；另外包括预处理及检测专用试剂。本发明专利技术所述试剂盒可实现1孔检测临床儿童安全用药相关基因23种突变，灵敏度高、特异性强、准确性高，并且操作简便、低成本、高通量，检测快速，结果自动判读，易于临床推广应用。本发明专利技术可应用于新生儿或儿童安全用药相关基因的检测，指导临床正确用药，避免用药风险，减少用药伤害，真正地做到精准用药。

A primer combination sequence and kit for detecting mutation sites of drug safety related genes in children

【技术实现步骤摘要】
一种检测儿童安全用药相关基因突变位点的引物组合序列和试剂盒
本专利技术涉及分子生物检测
，更具体地，涉及以多重PCR技术结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)技术通过质谱技术与多引物延伸技术和MassARRAY技术结合使用进行儿童安全用药基因检测的引物序列及试剂盒。技术背景目前，儿童药物中毒已成为全球公共卫生问题，全球每天有125名儿童因中毒而死亡。在中国，中毒也是儿童伤害死亡的主要原因之一。据国家食药监总局《2016儿童用药安全调查报告白皮书》中数据显示，在儿童群体中，药物中毒占所有中毒就诊儿童的比例从2012年的53％上升到2014年的73％。我国儿童不合理用药高达12％-32％，儿童用药不良反应率为12.9％，其中新生儿高达24.4％。因用药不当，我国每年约7000例儿童死亡，造成肝肾功能、神经系统等损伤的儿童难以计数。据中国聋儿康复研究中心统计，我国7岁以下儿童因不合理使用抗生素造成耳聋的数量多达30万，占总体聋哑儿童比例的30％-40％，50％以上的婴幼儿都在超标用药，每年有30000名儿童，因用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于儿童安全用药相关基因突变区域扩增的引物序列，其特征在于，包括如下表所示引物：/n

【技术特征摘要】
1.一种用于儿童安全用药相关基因突变区域扩增的引物序列，其特征在于，包括如下表所示引物：








2.一种用于儿童安全用药相关基因突变位点的单碱基延伸检测的引物序列，其特征在于，包括如下表所示引物序列：






上述69种核酸序列在1孔检测中使用。


3.一种用于儿童安全用药相关基因检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括如下试剂：
(1)飞行时间质谱检测系统核酸样本预处理试剂：包括如下主要组分



(2)扩增反应引物预混合液：所述权利要求1中的SEQIDNO：1～46所示的核苷酸序列的混合液，各引物浓度为0.3～3μM；
(3)单碱基延伸反应引物预混合液：所述权利要求2中的SEQIDNO：47～69所示的核苷酸序列的混合液，各引物浓度介于5～30μM；
(4)除盐树脂：包括去除延伸反应液盐离子的阳离子交换树脂粉末；
(5)检测芯片：包括含384个已预点基质的检测点的硅基芯片；
(6)纯突变对照：包含23个位点突变阳性片段质粒水溶液，浓度大于500拷贝/μL；
(7)杂合对照：包含23个位点突变阳性片段质粒、野生型人基因组(gDNA)的混合水溶液，突变型质粒和野生型人gDNA拷贝浓度相等，浓度大于500拷贝/μL；
(8)纯野生对照：包含野生型人gDNA的水溶液，浓度大于2ng/μL。


4.根据权利要求3所述的用于儿童安全用药相关基因突变检测的试剂盒，其特征在于，所述扩增反应引物预混合液具体为：所述权利要求1中的SEQIDNO：1～46所示的引物的混合液，各引物等比例混合，最终摩尔浓度浓度均为0.5μM。


5.根据权利要求3所述的用于儿童安全用药相关基因突变检测的试剂盒，其特征在于，所述单碱基延伸反应引物预混合液具体为，各延伸引物摩尔浓度比值如下：









引物名称
检测位点
摩尔浓度比


SEQIDNO：47
rs72554665
5.75


SEQIDNO：48
rs8330
6.46


...

【专利技术属性】
技术研发人员：虞闰六，罗英，宣文静，任绪义，郭惠民，殳晓强，胡志刚，
申请(专利权)人：浙江迪谱诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33