本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒SARS‑CoV‑2 S蛋白检测方法,利用SARS‑CoV‑2病毒依赖表面的spike蛋白与细胞表面的血管紧张素转换酶2结合得以进入细胞，该方法使用到化学发光免疫分析中常用的原材料，与ACE2都容易从市面采购，且生物素标记和碱性磷酸酶标记快速，可以快速制备用于检测SARS‑CoV‑2 S蛋白的试剂，该方法与SARS‑CoV‑2荧光定量PCR结果做比对，阳性符合率、阴性符合率和总符合率都较高。
A novel coronavirus SARS-CoV-2 S protein detection method
【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法
本专利技术涉及病毒检测方法，具体涉及一种新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法。
技术介绍
病毒抗原检测免疫学分析方法通常采用双抗体夹心法，以检测SARS-CoVN蛋白抗原为例，固相端为SARS-CoVN蛋白特异性抗体，标记端为SARS-CoVN蛋白特异性抗体，加入待测物后孵育，待测物中的SARS-CoVN蛋白与固相端SARS-CoVN蛋白特异性抗体结合形成免疫复合物，同时标记端的SARS-CoVN蛋白特异性抗体与样本中SARS-CoVN蛋白上的不同抗原位点结合，形成标记后的免疫复合物，通过洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除。通过显色或者发光等方式对标记物进行检测，可以判断待测物中是否含有SARS-CoVN蛋白。该方法检测抗原的关键是要制备针对抗原的特异性抗体。无论是制备单抗隆抗体还是多克隆抗体，都需要通过基因工程重组表达抗原，然后免疫动物制备抗体，制备出抗体还需要筛选出亲和力高的用于检测。要完成这一系列工作，通常会花费很多时间、物力、人力。传统的双抗体夹心法一些固有的缺点，SARS-CoV-2病毒自爆发以来还未出现检测抗原的试剂。
技术实现思路
本专利技术提供了一种新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，解决了现有技术无法有效检测新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白问题。为了解决该技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白用生物素酯标记后包被于链霉亲和素磁珠；S2、将ACE2活化后与活化的碱性磷酸酶ALP混匀反应，制备碱性磷酸酶ALP标记的ACE2；S3、将步骤1、2中的试剂与待测样本混匀后孵育；S4、洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除；S5、加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子，通过光子数判断待测物中是否存在SARS-CoV-2S蛋白。优选的，所述S1具体为：将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白与生物素酯标记试剂NHS-LC-Biotin按1:20(mol/mol)比例室温混匀反应30min，将生物素标记的ACE2重组蛋白与链霉亲和素磁珠按5μg/mg混匀室温反应30min制备ACE2重组蛋白包被磁微粒。优选的，所述S2中活化的碱性磷酸酶ALP制备过程为：将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯SMCC和碱性磷酸酶ALP按1:38(w/w)比例室温混匀30min制备活化碱性磷酸酶ALP。优选的，所述S2中ACE2活化过程为：将2-亚氨基硫烷盐酸盐2-IT和ACE2重组蛋白按1:12(w/w)比例室温混匀30min制备活化ACE2重组蛋白。优选的，所述S2中ALP标记的ACE2制备过程为：将活化的碱性磷酸酶与活化的ACE2重组蛋白按1:1.2(w/w)比例室温混匀2h，制备碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白。优选的，所述S3具体为：取10μL待测样本于反应管中，加入50μLACE2重组蛋白包被磁微粒，加入50μL碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白，混匀后37℃反应20min。优选的，所述S3具体为：加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子，光子的数量与样本中S蛋白的浓度成正比；将SARS-CoV-2重组S蛋白梯度稀释作为检测系统校准品，通过浓度-相对发光值(RLU)的校准曲线，计算出样本中S蛋白的浓度。本专利技术还提供了一种新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法的试剂盒，所述试剂盒包括：生物素酯标记的ACE2重组蛋白包被的磁微粒、碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白和发光底物AMPPD。本专利技术和现有技术相比，具有以下优点：SARS-CoV-2病毒依赖表面的spike蛋白(S蛋白)与细胞表面的血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，才得以进入细胞，且两者之前具有高亲和力。本专利技术利用该特性设计一种检测SARS-CoV-2S蛋白的方法。该方法使用到化学发光免疫分析中常用的原材料，与ACE2都容易从市面采购。且生物素标记和碱性磷酸酶标记快速。可以快速制备用于检测SARS-CoV-2S蛋白的试剂。该方法与SARS-CoV-2荧光定量PCR结果做比对，阳性符合率、阴性符合率和总符合率都较高。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的示意性实施方式及其说明仅用于解释本专利技术，并不作为对本专利技术的限定。实施例1S1、将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白与生物素酯标记试剂NHS-LC-Biotin按1:20(mol/mol)比例室温混匀反应30min；将生物素酯标记的ACE2重组蛋白与链霉亲和素磁珠按5μg/mg混匀室温反应30min制备ACE2重组蛋白包被磁微粒；S2、将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯SMCC和碱性磷酸酶ALP按1:38(w/w)比例室温混匀30min制备活化碱性磷酸酶ALP；将2-IT和ACE2重组蛋白按1:12(w/w)比例室温混匀30min制备活化ACE2重组蛋白；将活化碱性磷酸酶与活化ACE2重组蛋白按1:1.2(w/w)比例室温混匀2h，制备碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白；S3、取10μL待测样本于反应管中，加入50μLACE2重组蛋白包被磁微粒，加入50μL碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白，混匀后37℃反应20min；S4、洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除。S5、加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子，光子的数量与样本中S蛋白的浓度成正比。将SARS-CoV-2重组S蛋白梯度稀释作为检测系统校准品，通过浓度-相对发光值(RLU)的校准曲线，计算出样本中S蛋白的浓度。实施例2一种新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法的试剂盒，所述试剂盒包括：生物素酯标记的ACE2重组蛋白包被的磁微粒、碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白和发光底物AMPPD。生物素酯标记的ACE2重组蛋白包被的磁微粒的制备过程为：将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白与生物素酯标记试剂NHS-LC-Biotin按1:20(mol/mol)比例室温混匀反应30min，将生物素标记的ACE2重组蛋白与链霉亲和素磁珠按5μg/mg混匀室温反应30min制备ACE2重组蛋白包被磁微粒；碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白的制备过程为：将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯SMCC和碱性磷酸酶ALP按1:38(w/w)比例室温混匀30min制备活化碱性磷酸酶ALP；将2-IT和ACE2重组蛋白按1:12(w/w)比例室温混匀30min制备活化ACE2重组蛋白；将活化碱性磷酸酶与活化ACE2重组蛋白按1:1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1、将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白用生物素酯标记后包被于链霉亲和素磁珠；/nS2、将ACE2活化后与活化的碱性磷酸酶ALP混匀反应，制备碱性磷酸酶ALP标记的ACE2；/nS3、将步骤1、2中的试剂与待测样本混匀后孵育；/nS4、洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除；/nS5、加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子，通过光子数判断待测物中是否存在SARS-CoV-2S蛋白。/n
【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白用生物素酯标记后包被于链霉亲和素磁珠；
S2、将ACE2活化后与活化的碱性磷酸酶ALP混匀反应，制备碱性磷酸酶ALP标记的ACE2；
S3、将步骤1、2中的试剂与待测样本混匀后孵育；
S4、洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除；
S5、加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子，通过光子数判断待测物中是否存在SARS-CoV-2S蛋白。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，所述S1具体为：将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白与生物素酯标记试剂NHS-LC-Biotin按1:20(mol/mol)比例室温混匀反应30min，将生物素标记的ACE2重组蛋白与链霉亲和素磁珠按5μg/mg混匀室温反应30min制备ACE2重组蛋白包被磁微粒。
3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，所述S2中活化的碱性磷酸酶ALP制备过程为：将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯SMCC和碱性磷酸酶ALP按1:38(w/w)比例室温混匀30min制备活化碱性磷酸酶ALP。
4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，所述S...
【专利技术属性】
技术研发人员：文莉惠，
申请(专利权)人：四川沃文特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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