【技术实现步骤摘要】
一种基于色素和酸释放响应的微生物检测方法及其应用
本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种基于色素和酸释放响应的微生物检测方法及其应用。
技术介绍
近年来食品安全事件时有发生，不仅造成了巨大的经济损失，而且严重威胁了公共卫生安全；其中，病原微生物是引起食物中毒的主要风险因子，引起的食品安全事件由于具有危害大、预防控制困难等特点，日益受到人们的关注，而病原微生物的快速筛查是预防和控制此类食品安全事件的关键。光学生物传感器由于具有非接触性和检测速度快等优点，已被广泛应用于病原微生物检测。传统比色光学生物传感器的检测方法大多数是基于酶对底物进行催化，引起底物颜色变化，通过底物颜色测定目标微生物含量；然而，该方法主要存在以下两方面缺陷：(1)酶属于比较昂贵的生物材料，且酶的本质是蛋白质，对环境要求较高，当温度较高(超过40℃)或不适pH值时，酶就会失去活性，从而限制了其实际应用；(2)由底物所引起的颜色变化通常不稳定，易受时间和温度影响，造成信号不稳定，从而降低了系统检测的灵敏度。姜黄素是一种具有二酮的色...
【技术保护点】
1.一种基于色素和酸释放响应的微生物检测方法，其特征在于，包括：/n先用氧化锌颗粒堵住负载有姜黄素的介孔材料的孔，得到氧化锌堵孔后的姜黄素@介孔材料复合体，再将所述氧化锌堵孔后的姜黄素@介孔材料复合体与目标微生物结合，得到目标微生物-姜黄素@介孔材料复合体，然后利用醋酸溶解所述目标微生物-姜黄素@介孔材料复合体中的氧化锌，将颜色和荧光信号释放，通过检测颜色变化和荧光强度得到姜黄素的浓度，进而计算得到目标微生物的浓度。/n
【技术特征摘要】
1.一种基于色素和酸释放响应的微生物检测方法，其特征在于，包括：
先用氧化锌颗粒堵住负载有姜黄素的介孔材料的孔，得到氧化锌堵孔后的姜黄素@介孔材料复合体，再将所述氧化锌堵孔后的姜黄素@介孔材料复合体与目标微生物结合，得到目标微生物-姜黄素@介孔材料复合体，然后利用醋酸溶解所述目标微生物-姜黄素@介孔材料复合体中的氧化锌，将颜色和荧光信号释放，通过检测颜色变化和荧光强度得到姜黄素的浓度，进而计算得到目标微生物的浓度。
2.根据权利要求1所述的微生物检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1、利用目标微生物的第一生物识别元件修饰的免疫磁珠对所述目标微生物进行捕获，通过磁分离得到纯化的和富集的磁珠-目标微生物复合体；
S2、利用负载了氧化锌堵孔后的姜黄素@介孔材料复合体并修饰了所述目标微生物的第二生物识别元件的免疫复合材料与所述磁珠-目标微生物复合体进行结合，形成磁珠-目标微生物-姜黄素@复合材料复合体；
S3、利用醋酸溶液重悬所述磁珠-目标微生物-姜黄素@复合材料复合体，醋酸溶解氧化锌的同时释放出姜黄素，使溶液颜色变化并具有荧光信号；
S4、通过检测颜色变化和荧光强度双重信号，得到所述姜黄素的浓度，进而计算得到目标微生物的浓度。
3.根据权利要求2所述的微生物检测方法，其特征在于，步骤S2具体包括：
S21、将姜黄素溶解在80v/v％乙醇中，以质量比1：2比例与介孔材料混合，超声后室温搅拌，离心后清洗得到负载了姜黄素的介孔材料；
S22、将负载了姜黄素的介孔材料溶入水中，加入修饰有氨基的氧化锌颗粒，混合后室温反应，随后离心并清洗得到氧化锌堵孔后的姜黄素@介孔材料复合体；
S23、利用点击化学反应四嗪和反式环辛烯，将所述目标微生物的第二生物识别元件与氧化锌堵孔后的姜黄素@介孔材料复合体结合，形成免疫姜黄素@介孔材料，优选地，所述第二生物识别元件为多克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的微生物检测方法，其特征在于，步骤S23具体包括：
S231、用二甲基甲酰胺为溶...
【专利技术属性】
技术研发人员：林建涵，薛丽，黄凤春，郭儒雅，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。