一种同时检测中枢脱髓鞘自身抗体AQP4、MOG和MBP的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测中枢脱髓鞘自身抗体AQP4、MOG和MBP的方法，所述方法为：将AQP4、MOG、MBP基因分别导入HEK293T细胞中，分别与待测样品共同孵育，以转染空载体的HEK293T细胞为对照，采用免疫荧光法进行检测，若荧光信号强于对照，则待测样品为阳性；荧光信号等于或小于对照信号，则为阴性。本发明专利技术提供的在同一系统同时检测中枢脱髓鞘自身抗体AQP4、MOG、MBP的方法，采用灵敏度和特异性更高的荧光免疫细胞染色技术，用于临床定性检测AQP4、MOG、MBP抗体，使检测结果更加稳定，且极大节约人力和时间成本。

A method for simultaneous detection of central demyelinating autoantibodies AQP4, MOG and MBP

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测中枢脱髓鞘自身抗体AQP4、MOG和MBP的方法(一)
本专利技术涉及一种中枢脱髓鞘自身抗体的检测，特别涉及同时检测中枢脱髓鞘自身抗体AQP4、MOG和MBP的方法。(二)
技术介绍
中枢神经系统脱髓鞘疾病是以中枢神经系统多灶性以及炎性脱髓鞘为主的一种自身免疫系统疾病，其临床特征主要包括反复发作、多次缓解及复发。临床较为常见的中枢神经系统脱髓鞘疾病包括多发性硬化症(MultipleSclerosis,MS)、视神经脊髓炎(neuromyelitisoptica,NMO)、急性散播性脑脊髓炎等。近年来中枢神经系统脱髓鞘疾病发病率呈逐年升高趋势，对患者生活质量产生严重影响，对患者身心健康构成严重威胁。多发性硬化和视神经脊髓炎是中枢神经系统最为常见的脱髓鞘疾病，已成为中青年非外伤致残首要疾病之一。两种疾病均常累及视神经和脊髓，因此临床上较难区分，尤其是发病早期。目前研究认为MS是由CD4辅助T细胞(包括Th1和Th17亚群)介导的自身免疫疾病，故治疗多以免疫调节为主，如β-干扰素等。而NMO以体液免疫为主，治疗多以免疫抑制为主。因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测中枢脱髓鞘自身抗体AQP4、MOG和MBP的方法，其特征在于所述方法为：将AQP4、MOG、MBP基因分别导入HEK293T细胞中，分别与待测样品共同孵育，以转染空载体的HEK293T细胞为对照，采用免疫荧光法进行检测，若荧光信号强于对照，则待测样品为阳性；荧光信号等于或小于对照信号，则为阴性。/n

【技术特征摘要】
1.一种同时检测中枢脱髓鞘自身抗体AQP4、MOG和MBP的方法，其特征在于所述方法为：将AQP4、MOG、MBP基因分别导入HEK293T细胞中，分别与待测样品共同孵育，以转染空载体的HEK293T细胞为对照，采用免疫荧光法进行检测，若荧光信号强于对照，则待测样品为阳性；荧光信号等于或小于对照信号，则为阴性。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述检测的方法为：(1)将细胞贴壁试剂与PBS以体积比1:10混合，加入含盖玻片的6孔板中，37℃，5％CO2中孵育1小时；然后加入分别转有AQP4、MOG、MBP基因的稳定HEK293T细胞系，37℃，5％CO2培养至80％融合度；
(2)盖玻片细胞面朝上，粘贴于载玻片上，PBST洗涤，3％BSA封闭，弃去；加入经PBST以体积比1:10稀释后的待测血清，在37℃，5％CO2条件下孵育1小时；PBST洗涤；加入PBST以体积比1:700稀释的生物素与链霉素结合的山羊抗人IgG50μl，37℃，5％CO2条件下孵育30分钟；PBST洗涤；加入PBST以体积比1:700稀释的荧光素488月链霉素结合物，PBST洗涤；封片；同样条件下，以转染空载体的HEK293T细胞为对照；然后进行荧光显微镜检测，若荧光信号强于对照，则待测样品为阳性；荧光信号等于或小于对照信号，则为阴性。


3.如权利要求2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：施福东，李敏淑，金薇娜，方朝君，金立方，么阳，贾冬梅，
申请(专利权)人：天津天海新域生物科技有限公司，浙江达美生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12