HIV在解剖保护区(例如大脑)中的持久性阻止了病毒的根除。尽管联合抗逆转录病毒疗法(cART)可以通过标准的临床检测将病毒复制抑制到无法检测的水平，但它不能选择性地消除病毒库。为了靶向HIV病毒库，本发明专利技术人开发了一种带有HIV Rev的慢病毒载体，该载体携带一系列治疗基因，例如白喉毒素，炭疽芽孢杆菌的炭疽溶菌素O，人TRAF6或单纯疱疹1病毒胸苷激酶基因(HSV‑tk)。本公开提供了用于SIV/猕猴模型中靶向病毒储库的Rev依赖性载体。从感染后12周开始，首先用cART处理感染SIV的恒河猕猴6个月以上，然后注射由携带HSV‑tk的SIV Rev依赖载体组装的病毒颗粒。颗粒注射后，用更昔洛韦(GCV)对动物进行短暂的短暂治疗(两周)，这会导致杀死表达SIV+，HSV‑tk的细胞。GCV治疗后终止了cART，并且在cART停止后的4个月内观察到部分病毒反弹。用另外的Rev依赖性载体颗粒进一步治疗动物，并且在不进行任何治疗的情况下，在超过一年的时间内将病毒载量降低至无法检测的水平。这些结果表明，具有或不具有功能基因的Rev依赖性载体具有减少体内病毒库的潜力，并且可以提供功能治愈HIV/SIV感染的方法。
Relying on lentivirus vaccine particles can reduce virus rebound and virus reserve in vivo
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】依赖慢病毒疫苗颗粒可减少体内的病毒反弹和病毒储备关于联邦政府资助的研究的声明本专利技术是在美国政府的支持下完成的，并获得了美国国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)授予的资助号R01MH102144。美国政府享有本专利技术的某些权利。相关申请的交叉引用本申请要求2017年10月23日提交的美国临时申请No.62/575,629的优先权，该申请的内容通过引用整体合并于此。
本公开体现了用于治疗HIV感染的组合物，制品，方法学等。
技术介绍
HIV在解剖保护区(例如外周血，淋巴组织和大脑)中的持久性阻止了病毒的根除。尽管联合抗逆转录病毒疗法(cART)可以通过标准的临床检测将病毒复制抑制到无法检测的水平，但它不能选择性地消除病毒库。cART的成功以血浆病毒血症的急剧减少为特征(1-5)，已使HIV感染从致命疾病转变为可控制的慢性感染。但是，在存在cART的情况下病毒库的持久性无法治愈(6-13)。已经提出主要的病毒库是血液中的CD4T细胞和单核细胞/巨噬细胞谱系的细胞(14、15)。两者都是HIV-1的天然靶标。Eisele和Siliciano将病毒库定义为“受感染的细胞群体，可以在几年的时间范围内以最佳HAART方案在人类患者中持久保持具有复制能力的HIV-1”(15)。长期以来，人们已经认识到血液CD4T细胞和巨噬细胞均可被HIV感染(15-17)。在高致病性猿猴免疫缺陷病毒/HIV1型(SHIV)嵌合病毒感染中，CD4T细胞和巨噬细胞均被确定为主要储库。特别是，在CD4+T细胞耗尽后，巨噬细胞可在猕猴中维持较高的病毒载量(18)。众所周知，由于病毒储库的持续存在，随着cART的停止，病毒反弹总是会发生的(6-13)。在过去的10到15年中，HIV研究领域一直广泛关注血液中的CD4T细胞作为主要储藏室和反弹病毒的来源(14、15)。另外，新出现的证据表明组织中的其他细胞类型也可以作为重要的病毒库。例如，已经证明反弹的血浆病毒不能完全反映静止的CD4T细胞的病毒遗传库(19、20)，表明存在其他提供反弹病毒的储库(21-23)。另一方面，已证明即使同时发生cART(21-23)，体内仍可能发生低水平的持续病毒产生，这表明诸如肠道和淋巴结等组织中的细胞可能继续产生低水平的艾滋病毒。因此，基于这些发现，反弹病毒可能来自HIV储库，这些储库允许(a)具有复制能力的HIV持续存在，(b)在最佳cART方案下在人类患者中连续产生低水平的病毒颗粒或病毒蛋白。病毒库可能包括“潜伏库”，例如具有复制能力的HIV但不产生病毒蛋白的静止CD4T细胞，以及可以连续产生病毒颗粒或病毒蛋白的“活性库”。已知巨噬细胞具有代谢活性并支持持续不断的病毒生产(24)。巨噬细胞对艾滋病毒感染的细胞病理学影响极小，并且可以长期存活以进行病毒生产(18、25)。总之，来自大量动物和人体研究的大量实验证据表明，血液CD4T细胞和组织巨噬细胞都是主要的病毒库和反弹病毒的重要来源。专利技术概述一方面，本文提供了通过注射到受试者体内的治疗性疫苗(HIV样颗粒)来减少SIV/HIV病毒反弹并减少病毒库的方法和组合物等。如下文在体内动物试验中所详述，本专利技术人首次令人惊讶地发现，具有或不具有功能基因的Rev依赖性载体可以治愈HIV/SIV感染，并完全消除病毒反弹。这是因为(1)表达功能基因的Rev依赖型载体可以递送治疗性有毒蛋白质或核酸序列，从而诱导HIV/SIV+细胞的杀伤或凋亡。空的依赖Rev的载体还可以通过竞争性抑制HIV/SIVTat和Rev调节的病毒基因转录和病毒基因组包装来灭活病毒库。在没有cART的情况下，依赖Rev的载体本身可以促进抗HIV/SIV免疫以完全阻断病毒反弹，这确实是出乎意料的，无法预测。通过这样做，本专利技术人确定杀死HIV+阳性细胞涉及非常复杂的治疗策略，如下所示：(1)首先，使用抗体或抗HIV/SIV清除受试者体内的CD8T细胞，以确保人体的杀伤性T细胞(CD8)不排斥治疗性疫苗。(2)在注射疫苗颗粒期间，受试者需要从抗HIV治疗(cART)休息约2周，以使注射的疫苗颗粒能够扩增和复制。(3)在疫苗颗粒扩增后，需要重新启动抗HIV治疗(cART)以降低病毒对基线的载量。本专利技术人在下面的动物试验中发现，如果不重新开始抗HIV治疗(cART)，则疫苗将不起作用，因为cART可以通过减少HIV/SIV复制来帮助载体起作用。仅通过动物试验发现了这一点，无法预测。(4)本专利技术人在下述动物试验中还发现更昔洛韦治疗约2周或更长时间可降低病毒载量。(5)在SIV+/HIV+细胞中表达HSV-1TK(胸苷激酶)或TRAF6等治疗性基因可以降低体内病毒反弹。在目前的动物试验之前尚不清楚。(6)将单纯疱疹病毒(HSV)胸苷激酶基因传递到HIV/SIV感染的细胞中，可以将HIV+细胞转化为类似于体内“HSV感染的细胞”的细胞。这些细胞可以通过使用抗HSV药物如更昔洛韦来减少。(7)即使没有功能基因的表达，依赖Rev的载体本身也可以减少病毒载量和反弹。在目前的动物试验之前尚不清楚。一方面，提供了用于减少受试者中的SIV/HIV病毒反弹和减少病毒库的组合物。在一个实施方案中，该组合物是一种治疗性疫苗(HIV样颗粒)。在另一个实施方案中，所述组合物包含依赖于Rev的载体。在另一个实施方案中，Rev依赖性载体包含治疗基因，例如HSV-1TK(胸苷激酶)或TRAF6(肿瘤坏死因子)。在另一个实施方案中，Rev依赖性载体是不表达治疗基因的空的Rev依赖性载体。在一个实施方案中，并且如本文所用，所述受试者是患者，例如人类患者或动物。在另一方面，提供了用于减少受试者中的SIV/HIV病毒反弹和减少病毒库的方法，其包括向受试者施用包含可以启动抗HIV应答或诱导杀死HIV+细胞的基因的组合物。在一个实施方案中，该组合物包含依赖于Rev的载体。在另一方面，提供了用于减少受试者中的SIV/HIV病毒反弹并灭活病毒贮库的方法，其包括向受试者施用包含表达基因或不表达基因的Rev依赖性载体的组合物。该载体可通过竞争性抑制HIV转录和病毒基因组包装来灭活病毒库。在另一方面，本文提供了用于选择性杀死受试者中HIV感染的细胞的Rev依赖性载体系统，其中所述载体包含单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)。在另一方面，本申请提供了Rev依赖性载体系统，用于选择性杀死受试者中HIV感染的细胞，其中所述载体包含肿瘤坏死因子(TRAF6)。在另一方面，本文提供了用于减少受试者中的SIV/HIV病毒反弹和减少病毒库的方法，其包括向受试者施用包含单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)的Rev依赖性载体系统。在另一方面，本文提供了用于减少受试者中的SIV/HIV病毒反弹和减少病毒储库的方法，其包括向受试者施用包含肿瘤坏死因子(TRAF6)的Rev依赖性载体系统。在另一方面，本文提供了用于减少受试者中的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于减少受试者中SIV/HIV病毒反弹并减少病毒库的组合物。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171023 US 62/575,6291.一种用于减少受试者中SIV/HIV病毒反弹并减少病毒库的组合物。
2.权利要求1的组合物，其中所述组合物是治疗性疫苗(HIV样颗粒)。
3.权利要求1的组合物，其中所述组合物包含Rev依赖性载体。
4.权利要求3的组合物，其中所述Rev依赖性载体包含治疗基因。
5.权利要求4的组合物，其中所述治疗基因是HSV-1TK(胸苷激酶)或TRAF6。
6.权利要求3的组合物，其中所述Rev依赖性载体是不表达治疗基因的空的Rev依赖性载体。
7.一种用于在受试者中减少SIV/HIV病毒反弹并减少病毒库的方法，其包括向所述受试者施用包含可以启动抗HIV应答或诱导杀死HIV+细胞的基因的组合物。
8.权利要求7的方法，其中所述组合物包含Rev依赖性载体。
9.一种Rev依赖性载体系统，用于选择性杀死受试者中HIV感染的细胞，其中所述载体包含单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)。
10.用于选择性杀死受试者中HIV感染的细胞的Rev依赖性载体系统，其中所述载体包含肿瘤坏死因子(TRAF6)。
11.一种用于在受试者中减少SIV/HIV病毒反弹并减少病毒库的方法，其包括向所述受试者施用Rev依赖性载体系统。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述依赖于Rev的载体系统是不表达功能基因的空的依赖于Rev的载体系统。
13.权利要求11的方法，其中所述Rev依赖性载体系统包含单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)。
14.权利要求11的方法，其中所述Rev依赖性载体系统包含肿瘤坏死因子(TRAF6)。
15.一种用于将HIV+阳性细胞杀死至需要其的受试者的方法，包括：
(a)施用抗体或抗HIV/SIV来清除受试者体内的CD8T细胞，以确保人体杀伤性T细胞(CD...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴云涛，
申请(专利权)人：吴云涛，
类型：发明
国别省市：美国;US
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