一种带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术提供的带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法带有荧光标记基因的荧光标记表达盒连接至感染性克隆质粒上的连接位点，连接位点位于N蛋白基因序列的下游和3’端非编码序列的上游之间，得到可视化的带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒。该构建方法操作难度小、可操作性强，能够获得稳定的表达荧光蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒，其为进一步开展新型病毒疫苗研制及猪繁殖与呼吸综合征病毒相关基础研究提供了有力工具。

【技术实现步骤摘要】
一种带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒及其构建方法和应用
本专利技术涉及基因工程
，具体而言，涉及一种带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒及其构建方法和应用。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)属于套氏病毒目(Nidovirales)、动脉炎病毒科(Arteriviridae)、动脉炎病毒属(Arterivirus)，为有囊膜的单股正链RNA病毒，基因组全长约为15.4kb，基因组3’末端有Poly(A)尾序列，5’末端有帽状引导序列。其基因组含有9个相互重叠的开放读码框(openreadingframe,ORF)。在PRRSV的结构蛋白中，GP5、M、N蛋白是主要结构蛋白，而GP2a、2b、GP3、GP4是次要结构蛋白。反向遗传学(Reversegenetics)技术相对于经典遗传学方法具有方法简便、定点可控等优点，在研究病毒的分子生物学以及病毒的致病机理中发挥着重要的作用。RNA聚合酶II(RNApolymeraseII)拯救系统直接利用真核生物RNA聚合酶II启动子本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，其特征在于，其包括：将含有荧光标记基因的荧光标记表达盒连接至感染性克隆质粒上的连接位点；将所述感染性克隆质粒转染宿主细胞，经培养后得到带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒；其中，所述感染性克隆质粒含有用于表达所述猪繁殖与呼吸综合征病毒的结构蛋白的表达序列，所述表达序列包括N蛋白基因序列和连接至所述N蛋白基因序列下游的3’端非编码序列，所述连接位点位于所述N蛋白基因序列的下游和所述3’端非编码序列的上游之间。

【技术特征摘要】
1.一种带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，其特征在于，其包括：将含有荧光标记基因的荧光标记表达盒连接至感染性克隆质粒上的连接位点；将所述感染性克隆质粒转染宿主细胞，经培养后得到带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒；其中，所述感染性克隆质粒含有用于表达所述猪繁殖与呼吸综合征病毒的结构蛋白的表达序列，所述表达序列包括N蛋白基因序列和连接至所述N蛋白基因序列下游的3’端非编码序列，所述连接位点位于所述N蛋白基因序列的下游和所述3’端非编码序列的上游之间。2.根据权利要求1所述的带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，其特征在于，所述荧光标记表达盒还含有调控所述荧光标记基因表达的调控序列，所述调控序列选自SEQIDNO.1-6中的任意一种。3.根据权利要求2所述的带有荧光标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，其特征在于，所述调控序列的3’端与所述荧光标记基因的5’端之间插入有Kozark序列，所述Kozark序列的碱基序列如SEQIDNO.7所示。4.根据权利要求1所述的带有荧光标记的猪...

【专利技术属性】
技术研发人员：王承宝，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61