嵌合抗原受体(CARs)、组合物及其使用方法技术

本发明专利技术涉及嵌合抗原受体(CARs)、组合物及其使用方法。在一个实施例中，本发明专利技术涉及一种在受试者中治疗自身免疫性疾病，哮喘和预防或介导器官排斥的方法。

Chimeric antigen receptor (cars), composition and use method

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合抗原受体(CARs)、组合物及其使用方法相关申请案之交叉引用本申请是根据2017年6月21日提交的先美国临时申请号62/523,147权益，及2017年6月21日提交的美国临时申请No.15/538,620，皆以全文引用之方式并入本文中。
技术介绍
T细胞，淋巴细胞的一种，在细胞介导之免疫性中起重要作用。其与其他淋巴细胞(诸如B细胞及自然杀手细胞(NK细胞))之区别在于细胞表面上存在T细胞受体(TCR)。T辅助细胞，亦称为CD4+T或CD4T细胞，在其表面上表达CD4糖蛋白。辅助T细胞在暴露于由MHC(主要组织相容复合体)II类分子呈递之肽抗原时活化。一旦活化，此等细胞快速增殖且分泌可调节免疫反应之细胞因子。细胞毒性T细胞，亦称为CD8+T细胞或CD8T细胞，在细胞表面上表达CD8糖蛋白。CD8+T细胞在暴露于由MHCI类分子呈递之肽抗原时活化。记忆T细胞，一种T细胞亚群，长期留存并回应于其等同源抗原，因此向免疫系统提供针对过去感染及/或肿瘤细胞之“记忆”。经基因改造后，T细胞可于其表面产生特殊受体，称为嵌合抗原受体(CAR)。CAR为允许T细胞识别肿瘤细胞上之特定蛋白)抗原)之蛋白。此等经工程改造之CART细胞接着在实验室中生长直至其数目达到数十亿。接着将扩增之CART细胞群输注至患者中。迄今为止，临床试验已证实嵌合抗原受体(CAR)T细胞在对标准化学疗法具有抗性之血液科恶性疾病中具有巨大前景。最值得注意的是，特定之CD19CAR(CD19CAR)T细胞疗法具有显著效果，包括B细胞恶性肿瘤之长期缓解)Kochenderfer，Wilson等人2010，Kalos，Levine等人2011，Porter，Levine等人2011，Davila，Riviere等人2013，Grupp，Frey等人2013，Grupp，Kalos等人2013，Kalos，Nazimuddin等人2013，Kochenderfer，Dudley等人2013，Kochenderfer，Dudley等人2013，Lee，Shah等人2013，Park，Riviere等人2013，Maude，Frey等人2014)。尽管CAR疗法在B细胞白血病及淋巴瘤中取得成功，但尚未有明确之CAR疗法应用于T细胞恶性肿瘤。鉴于T细胞恶性肿瘤之疗法比B细胞恶性肿瘤之疗法具有明显更差之效果(Abramson，Feldman等人2014)，因此CAR疗法具有进一步解决巨大临床需求之潜力。迄今为止，当前成果集中于在治疗多种B细胞恶性肿瘤中有显示功效之CART细胞。尽管在使用CD19CAR之B-ALL中约90％之初始缓解率为常见的，但大部分在一年内复发。至少部分复发原因归于抗原逃逸。因此，现时迫切地需要更有效的CART细胞治疗以防止复发。标靶探索及选择为初始步骤，因为不存在可确保或引导有效CAR设计之一般法则。现时存在一些阻碍CAR治疗性方法之更广泛应用之障碍。其中最常见挑战为：(1)抗原标靶及嵌合抗原受体之选择；(2)CAR设计；(3)肿瘤异质性，尤其肿瘤抗原之表面表达之差异。靶向单一抗原具有免疫逃逸之风险，此可由靶向多个所需抗原来解决；(4)免疫抑制微环境。CART细胞可以在到达肿瘤部位时被抑制和失效。大部分CAR嵌合抗原受体为来源于单株抗体之scFv且部分此等单株抗体已用于临床试验或疾病治疗。然而，单株抗体具有有限功效，表明需要替代的及更强效的靶向方法，诸如CAR。scFvs为CAR之最常用的嵌合抗原受体。然而，抗原上所识别之抗原决定基之CAR亲和结合及位置可影响功能。此外，T细胞或NK细胞之表面CAR表达量受适合的前导序列及启动子影响。此外，过表达之CAR蛋白可对细胞具有毒性。因此，现时仍然需要经改良之基于嵌合抗原受体之疗法，其可慮及T细胞相关恶性肿瘤之更有效、安全及有效靶向。
技术实现思路
在一个实施例中，本专利技术提供了一种含有嵌合抗原受体多肽的工程细胞，所述嵌合抗原受体多肽包含信号肽，抗原识别结构域，铰链区，跨膜结构域，信号传导结构域和共刺激结构域；其中所述抗原识别结构域包含FcER1A，FcER1，IgE，CD19，BCMA或CD45之一。在另一个实施例中，本专利技术提供了一种含有嵌合抗原受体多肽的工程改造的多肽，所述嵌合抗原受体多肽包括信号肽，抗原识别结构域，铰链区，跨膜结构域，信号传导结构域和共刺激结构域。其中所述抗原识别结构域包括FcER1A，CD19，BCMA或CD45之一；以及至少一个增强子；其中高效切割位点位于嵌合抗原受体多肽和增强子之间。在另一个实施例中，本专利技术提供了一种含有第一嵌合抗原受体多肽工程细胞，该多肽包括第一信号肽，第一抗原识别结构域，第一铰链区，第一跨膜结构域，第一信号结构域和第一共刺激结构域。第二嵌合抗原受体多肽，其包含第二信号肽，第二抗原识别结构域，第二铰链区，第二跨膜结构域，第二信号结构域和第二共刺激结构域。其中第一抗原识别结构域和第二抗原识别结构域不同；第一抗原识别结构域和第二抗原排斥结构域选自CD4，CD19，CD33，CD123，CLL-1，BAFFR，BCMA和CS-1。在另一个实施例中，本专利技术提供了含有第一嵌合抗原受体多肽的工程多肽，所述第一嵌合抗原受体多肽包括第一信号肽，第一抗原识别结构域，第一铰链区，第一跨膜结构域，第一信号结构域和第一共刺激结构域。第二嵌合抗原受体多肽，其包含第二信号肽，第二抗原识别结构域，第二铰链区，第二跨膜结构域，第二信号结构域和第二共刺激结构域。其中第一抗原识别结构域和第二抗原识别结构域不同；第一抗原识别结构域和第二抗原排斥结构域选自CD4，CD19，CD33，CD123，BAFFR，CLL-1，BCMA和CS-1。在另一个实施例中，本专利技术提供了一种治疗自身免疫疾病的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用上述工程细胞；其中所述自身免疫性疾病包括系统性红斑狼疮(SLE)，多发性硬化症(MS)，炎性肠病(IBD)，类风湿性关节炎，干燥综合征，皮肌病，自身免疫性溶血性贫血，视神经脊髓炎(NMO)，NMO频谱失调(NMOSD)，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，与系统性自身免疫性小血管血管炎综合征或显微镜下多管炎(MPA)相关的抗中性粒细胞胞浆自身抗体(ANCAs)，肉芽肿伴多管炎(GPA，Wegener肉芽肿病)，或嗜酸性肉芽肿伴多管炎(EGPA，Churg-Strauss综合征)。在另一个实施例中，本专利技术提供了一种治疗哮喘的方法。该方法包括施用上述工程细胞。在另一个实施例中，本专利技术提供了一种治疗器官排斥的方法。该方法包括施用上述工程细胞。在一个实施例中，本专利技术提供了具有第一嵌合抗原受体多肽的工程改造细胞，所述第一嵌合抗原受体多肽包括第一抗原识别结构域，第一信号肽，第一铰链区，第一跨膜结构域，第一共刺激结构域和第一信号域；第二嵌合抗原受体多肽，包括第二抗原识别结构域，第二信号肽，第二铰链区，第二跨膜结构域，第二共刺激结构域和第二信号结构域；其中第一抗原识别结构域不同于第二抗原识别结构域。在另一个实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种工程细胞，包括：/n嵌合抗原受体多肽，包含信号肽，抗原识别结构域，铰链区，跨膜结构域，信号传导结构域和共刺激结构域，其中所述抗原识别结构域包含FcER1A，FcER1，IgE，CD19，BCMA或CD45之一。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170621 US 15/538,620;20170621 US 62/523,1471.一种工程细胞，包括：
嵌合抗原受体多肽，包含信号肽，抗原识别结构域，铰链区，跨膜结构域，信号传导结构域和共刺激结构域，其中所述抗原识别结构域包含FcER1A，FcER1，IgE，CD19，BCMA或CD45之一。


2.根据权利要求1所述的工程细胞，其中所述共刺激域是CD28或4-1BB；和信令域为CD3zeta。


3.根据权利要求1所述的工程细胞，还包括一种或多种选自IL-15/IL-15sushi，IL-15/1L-15sushi锚，4-1BBL和IL-15的增强子。


4.一种工程多肽，其包含嵌合抗原受体多肽，所述嵌合抗原受体多肽包含信号肽，抗原识别结构域，铰链区，跨膜结构域，信号传导结构域和共刺激结构域；其中所述抗原识别结构域包含FcER1A，CD19，BCMA或CD45之一；至少一种增强子；其中高效切割位点位于嵌合抗原受体多肽和增强子之间。


5.根据权利要求4所述的工程多肽，其中，所述工程多肽包含两种增强子和两个高效裂解位点。


6.根据权利要求4所述的工程多肽，其中所述高效切割位点选自P2A，T2A，E2A和F2A。


7.一种工程多核苷酸，其用于编码权利要求4所述的多肽。


8.一种工程细胞，其包含：
第一嵌合抗原受体多肽，其包含第一信号肽，第一抗原识别结构域，第一铰链区，第一跨膜结构域，第一信号结构域和第一共刺激结构域；和
第二嵌合抗原受体多肽，其包含第二信号肽，第二抗原识别结构域，第二铰链区，第二跨膜结构域，第二信号结构域和第二共刺激结构域；
其中
第一抗原识别结构域和第二抗原识别结构域不同；和
第一抗原识别结构域和第二抗原排斥结构域选自CD4，CD19，CD33，CD123，CLL-1，BAFFR，BCMA和CS-1。


9.根据权利要求8所述的工程细胞，其中所述第一抗原识别结构域和第二抗原识别结构域选自：CD19和CD123，CD19和BAFFR，BCMA和CD19，BCMA和CS1，CD123和CD33，CD33和CLL-1，CD4和CD123，CD19和CS-1以及CD4和CLL-1。


10.一种工程多肽，其包含：
第一嵌合抗原受体多肽，其包含第一信号肽，第一抗原识别结构域，第一铰链区，第一跨膜结构域，第一信号结构域和第一共刺激结构域；和
第二嵌合抗原受体多肽，其包含第二信号肽，第二抗原识别结构域，第二铰链区，第二跨膜结构域，第二信号结构域和第二共刺激结构域；
其中
第一抗原识别结构域和第二抗原识别结构域不同；和
第一抗原识别结构域和第二抗原排斥结构域选自CD4，CD19，CD33，CD123，BAFFR，CLL-1，BCMA和CS-1。


11.根据权利要求10所述的工程多肽，其中所述第一抗原识别结构域和第二抗原识别结构域选自：CD19和CD123，BCMA和CD19，CD19和BAFFR，BCMA和CS1，CD123和CD33，CD33和CLL-1，CD4和CD123，CD19和CS-1以及CD4和CLL-1。


12.根据权利要求10所述的工程多肽，其中，所述第一共刺激域和所述第二共刺激域是不同的。


13.根据权利要求10所述的工程多肽，其中高效切割位点位于所述第一抗原识别结构域和第二抗原识别结构域之间。


14.一种工程多核苷酸，其用于编码权利要求9所述的工程多肽。


15.一种治疗哮喘的方法，所述方法包括将包含根据权利要求1的工程细胞的组合物施用于需要其的患者，其中嵌合抗原受体包含FcER1A或FcER1。


16.一种裂解具有FcER1A，FcER1或IgE细胞表面抗原的靶细胞的方法，该方法包括使所述细胞与根据权利要求1所述的工程细胞接触。


17.根据权利要求15所述的方法，其中所述靶细胞包括浆细胞，肥大细胞或嗜碱细胞。


18.一种治疗自身免疫疾病的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用权利要求1的工程细胞；其中所述自身免疫疾病包括系统性红斑狼疮(SLE)，多发性硬化症(MS)，炎性肠病(IBD)，类风湿关节炎，干燥综合征，皮肌病，自身免疫性溶血性贫血，视神经脊髓炎(NMO)，NMO频谱异常(NMOSD)，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，与系统性自身免疫性小血管血管炎综合征或显微镜下多管炎(MPA)相关的抗中性粒细胞胞浆自身抗体(ANCAs)，肉芽肿伴多管炎(GPA，Wegener肉芽肿病)，或嗜酸性肉芽肿伴多管炎(EGPA，Churg-Strauss综合征)。


19.一种治疗自身免疫疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用权利要求7所述的工程细胞；其中所述自身免疫疾病包括系统性红斑狼疮(SLE)，多发性硬化症(MS)，炎性肠病(IBD)，类风湿关节炎，干燥综合征，皮肌病，自身免疫性溶血性贫血，视神经脊髓炎(NMO)，NMO频谱异常(NMOSD)，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，与系统性自身免疫性小...

【专利技术属性】
技术研发人员：马钰波，凯文·平茨，蒋迅，雅之·瓦达，陈凯文，
申请(专利权)人：美商生物细胞基因治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US