一种β-半乳糖苷酶、基因、工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种β‑半乳糖苷酶、基因、工程菌及其应用，所述酶的氨基酸序列为SEQIDNO.2所示。本发明专利技术构建的重组大肠杆菌BL21/pET‑28a(+)‑βgal所产的β‑半乳糖苷酶为酶源进行生物催化反应，可将乳糖转化为低聚半乳糖，其中低聚半乳糖粗品中低聚半乳糖质量浓度为40～50％。

A \u03b2 - galactosidase, gene, engineering bacterium and its application

【技术实现步骤摘要】
一种β-半乳糖苷酶、基因、工程菌及其应用
本专利技术涉及一种β-半乳糖苷酶，特别涉及一种来源于产酸克雷伯菌(KlebsiellaoxytocaZJUH1705)菌株的β-半乳糖苷酶基因、酶、重组表达载体、基因工程菌，及其在制备低聚半乳糖中的应用。
技术介绍
β-半乳糖苷酶(β-galactosidase，E.C.3.2.1.23)广泛存在于动物、植物及微生物中。β-半乳糖苷酶可催化转化乳糖为低聚半乳糖，低聚半乳糖是一种功能性低聚糖，广泛应用于婴幼儿配方食品，烘焙食品，动物饲料等领域。目前已有不同来源的β-半乳糖苷酶基因分别被克隆和测序，并且实现了在不同宿主中的表达。然而野生型β-半乳糖苷酶分离困难，酶活较低，限制了其大规模的制备及应用，因此，构建表达活性高的β-半乳糖苷酶基因工程菌具有实际的应用意义。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种来源于产酸克雷伯菌(KlebsiellaoxytocaZJUH1705)菌株的β-半乳糖苷酶、编码基因、重组表达载体、基因工程菌，及其在制备低聚半乳糖中的应用。本专利技术采本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种来源于产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)ZJUH1705的β-半乳糖苷酶，其特征在于所述酶的氨基酸序列为SEQIDNO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种来源于产酸克雷伯菌(Klebsiellaoxytoca)ZJUH1705的β-半乳糖苷酶，其特征在于所述酶的氨基酸序列为SEQIDNO.2所示。


2.一种权利要求1所述β-半乳糖苷酶的编码基因，其特征在于所述编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.1所示。


3.一种权利要求1所述β-半乳糖苷酶在催化乳糖制备低聚半乳糖中的应用。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的应用为：以含β-半乳糖苷酶基因的重组工程菌经发酵培养获得的菌体细胞再经超声破碎、分离纯化后获得的酶液作为酶源，加入pH值为6.0～9.0的缓冲溶液和乳糖构成转化体系，在20～40℃、100～300rpm条件下振荡反应30～60h，反应结束后，即得低聚半乳糖粗品。


5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述酶源的用量以底物质量计为1～4U/g，所述缓冲液体积加入量以乳糖重量计为1-10mL/g。


6.如权利要求4所述的应用，其特征在于反应条件为40℃、200rpm反应48h。


7.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述缓冲液为pH7.0、0.05M磷酸缓冲液。


8.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述酶源按如下方法制备：(1)湿菌体的制备：将含β-半乳糖苷酶基因的重组工程菌接种至含50...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄金，竺胜权，杜美妮，赵琳琪，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33