一种分离筛查三明尤溪烟叶中焦甜香成分的方法技术

本发明专利技术涉及一种分离筛查三明尤溪烟叶中焦甜香特成分的方法，具体包括以下步骤：(1)用水、有机溶剂或二者的混合溶剂对所述烟叶进行提取，得到烟叶提取液，浓缩所述烟叶提取液得到烟叶浸膏；(2)用大孔树脂对步骤(1)所述烟叶浸膏进行分离，得到多个流分；(3)对步骤(2)中得到的流分进行香气评价，合并其中焦甜香香韵特征突出的流分并浓缩，得焦甜香浓缩物；(4)以氘代萘和氘代蒽作为内标，采用GC×GC‑TOF MS对步骤(3)所得焦甜香浓缩物进行分析，得到所述焦甜香浓缩物中的化学成分及浓度；(5)以OAV作为评价标准，从步骤(4)所分析得出的化学成分中选择得到所述焦甜香成分。所述方法可快速、简单、全面地对烟叶中焦甜香成分进行筛查。

A method of separating and screening the sweet components in Sanming Youxi tobacco leaves

【技术实现步骤摘要】
一种分离筛查三明尤溪烟叶中焦甜香成分的方法
：本专利技术属于分离鉴定
，具体涉及一种从三明尤溪烟叶中提取、分离和筛查焦甜香成分的方法。
技术介绍
：在全国烤烟烟叶香型风格区划中，三明尤溪烟叶风格特征是以干草香、清甜香、蜜甜香为主体，辅以青香、醇甜香、木香、烘焙香、焦香、花香、辛香等，其特征为清甜香突出，蜜甜香明显，花香微显，香韵种类丰富[1]。清甜香作为三明尤溪烟叶最主要的香韵特征，以往受到研究者广泛关注，关注点主要是定性分析三明尤溪烟叶中具有清甜香、蜜甜香、花香和果香等香韵的化学成分及其单体感官特征，而对于例如焦甜香、辛香等其他香韵对三明尤溪香韵特征的贡献研究较少。事实上，三明尤溪烟叶中含有许多焦甜香化合物，若仅仅分析主体香韵而忽略这部分非主体香韵，那么对于三明尤溪烟叶整体香韵风格的把握会有所缺失，因此，分离筛查三明尤溪烟叶中焦甜香特征赋予成分对于提高三明尤溪烟叶整体香韵风格的认识有所帮助。复杂体系中致香成分的感官贡献机制十分复杂，香气化合物浓度和香气强度并非简单的正比关系，仅通过化学成分的含量比较并不能完整揭示出香味成分对香韵的贡献大小。不同香气成分的混合，可能会存在协同或抑制效应。将成分间的协同作用留给经验性实验，尽可能明确体系中各种香气成分对香型风格的感官贡献度和贡献类型，有助于对复杂体系的香气特征进行相对精准的把握。而香气活性值(Odoractivityvalue，OAV)从浓度和阈值两个维度上揭示了香气成分对香气体系的贡献度，是表征关键香气成分的一种有效技术手段。
技术实现思路
本专利技术提供了一种分离筛查烟叶中焦甜香成分的方法，该方法通过大孔树脂法对烟叶浸膏进行分离，并通过感官评价筛查富集焦甜香香韵突出的组分，采用GC×GC-TOFMS对其进行定性和半定量分析，进一步以香气活性值(OAV)为标准，从中筛选出对烟叶焦甜香香韵具有贡献的化学成分。所述方法可对烟叶中焦甜香成分进行比较全面的分离和分析，对认知烟叶中关键焦甜香成分具有重要作用。本专利技术提供一种分析烟叶中焦甜香成分的方法，其包括以下步骤：(1)用水、有机溶剂或二者的混合溶剂对所述烟叶进行提取，得到烟叶提取液，浓缩所述烟叶提取液得到烟叶浸膏；(2)用大孔树脂对步骤(1)所述烟叶浸膏进行分离，得到多个流分；(3)对步骤(2)中得到的流分进行香气评价，合并其中焦甜香香韵特征突出的的流分并浓缩，得焦甜香浓缩物；(4)以氘代萘和氘代蒽作为内标，采用GC×GC-TOFMS对步骤(3)所得焦甜香浓缩物进行分析，得到所述焦甜香浓缩物中的化学成分及浓度；(5)以OAV(香气活性值)作为评价标准，从步骤(4)所分析得出的化学成分中选择得到所述焦甜香成分。在一些实施方案中，所述烟叶为三明尤溪烟叶；优选为复烤三明尤溪烟叶。在一些实施方案中，步骤(2)中所述大孔树脂填料选自DiaionHP-10、-20、-30、-40或-50，AB-8，D101，D102和D402，优选D101。在一些实施方案中，采用5.5cmx80cm玻璃层析柱进行步骤(2)所述分离。在一些实施方案中，以下述溶剂作为流动相进行洗脱：乙醇、甲醇、异丙醇、水、或其混合体系，优选乙醇水溶液，例如20％乙醇水溶液。在一些实施方案中，所述流动相的流速为10-50mL/min(例如10mL/min，15mL/min，20mL/min，25mL/min，30mL/min，35mL/min，40mL/min，45mL/min或50mL/min)。在一些实施方案中，步骤(1)中所述提取操作如下所述：用50％-95％乙醇(例如50％乙醇、70％乙醇或95％乙醇)、二氯甲烷或水作为溶剂，在50℃-80℃或者回流条件下对所述烟叶提取10min-2h(例如10min、30min、1h或2h)。在一些实施方案中，步骤(1)中所述浓缩为减压浓缩。在一些实施方案中，控制浓缩液密度为1.36-1.42g/cm3。在一些实施方案中，在步骤(4)中，所述GC×GC-TOFMS色谱分析条件选自下述的一项或多项：：(1)色谱柱一：HP-5MS(60m×0.25mm×0.25μm)；(2)色谱柱二：DB-l7(2.3m×0.1mm×0.1μm)；(3)柱温程序：50℃(1min)→3℃/min→220℃→2℃/min→260℃(10min)；(4)载气：He；(5)载气控制方式：恒流，1-1.5mL/min；(6)进样口温度：250-300℃；(7)调制周期：3-6秒；(8)进样量：1μL；(9)分流模式：分流进样，分流比10-30:1。在一些实施方案中，在步骤(4)中，所述GC×GC-TOFMS质谱分析条件选自下述的一项或多项：：(1)离子化方式：EI；(2)离子源温度：220-280℃；(3)GC/MS传输线温度：250-260℃；(4)EI电离能量：70eV；(5)溶剂延迟时间：7-16min；(6)采集方式：全扫描Scan；(7)质量范围：45～450amu。在一些实施方案中，所述步骤(4)具体包括以下步骤：(4-1)以氘代萘和氘代蒽作为内标，采用GC×GC-TOFMS对步骤(3)所得焦甜香浓缩物进行检测，得色谱和质谱；(4-2)在NIST标准图谱库中对步骤(4-1)所得质谱与化合物标准质谱进行匹配，选择正向和反向匹配度均大于700(例如大于800，大于900或者大于999)的化合物，即确定相应色谱峰所对应的化学成分，并利用内标法计算该化学成分的浓度。在一些实施方案中，所述步骤(5)具体包括以下步骤：(5-1)确定步骤(4)中所述各化学成分的香气阈值(单位：μg/mL)(例如通过查阅文献，或者按照GB/T22366-2008中“最优估计阈值的估计”的方法确定所述阈值)，通过公式OAV＝C/T计算OAV，其中C为根据步骤(4)所测得的各化学成分的浓度(单位：μg/mL)；(5-2)OAV越大，表示相应化学成分对焦甜香韵的贡献越大，反之表示相应化学成分对焦甜香韵的贡献越小。在另一个方面，本专利技术提供一种组合物或者由上述的方法制备得到的组合物。在一些实施方案中，所述组合物中含有糠醛、1,2-环戊烯二酮、5-甲基糠醛、3-甲基-1,2-环戊烯二酮、2,5-二甲基-4-羟基-3(2H)-呋喃酮、麦芽酚和2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4H-吡喃-4-酮中的任一种或多种。在一些实施方案中，所述组合物中含有1-羟基-2-丙酮、2-羟甲基呋喃、2-环戊烯-1,4-二酮、糠醛、1,2-环戊烯二酮、5-甲基糠醛、2,4-二羟基-2,5-二甲基-3(2H)-呋喃-3-酮、3-甲基-1,2-环戊烯二酮、2,5-二甲基-4-羟基-3(2H)-呋喃酮、麦芽酚、2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4H-吡喃-4-酮和5-羟甲基糠醛中的任一种或多种。在另一个方面，本专利技术提供一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分析烟叶中焦甜香成分的方法，其包括以下步骤：/n(1)用水、有机溶剂或二者的混合溶剂对所述烟叶进行提取，得到烟叶提取液，浓缩所述烟叶提取液得到烟叶浸膏；/n(2)用大孔树脂对步骤(1)所述烟叶浸膏进行分离，得到多个流分；/n(3)对步骤(2)中得到的流分进行香气评价，合并其中焦甜香香韵特征突出的流分并浓缩，得焦甜香浓缩物；/n(4)以氘代萘和氘代蒽作为内标，采用GC×GC-TOF MS对步骤(3)所得焦甜香浓缩物进行分析，得到所述焦甜香浓缩物中的化学成分及浓度；/n(5)以OAV(香气活性值)作为评价标准，从步骤(4)所分析得出的化学成分中选择得到所述焦甜香成分；/n优选地，所述烟叶为三明尤溪烟叶；优选为复烤三明尤溪烟叶。/n

【技术特征摘要】
1.一种分析烟叶中焦甜香成分的方法，其包括以下步骤：
(1)用水、有机溶剂或二者的混合溶剂对所述烟叶进行提取，得到烟叶提取液，浓缩所述烟叶提取液得到烟叶浸膏；
(2)用大孔树脂对步骤(1)所述烟叶浸膏进行分离，得到多个流分；
(3)对步骤(2)中得到的流分进行香气评价，合并其中焦甜香香韵特征突出的流分并浓缩，得焦甜香浓缩物；
(4)以氘代萘和氘代蒽作为内标，采用GC×GC-TOFMS对步骤(3)所得焦甜香浓缩物进行分析，得到所述焦甜香浓缩物中的化学成分及浓度；
(5)以OAV(香气活性值)作为评价标准，从步骤(4)所分析得出的化学成分中选择得到所述焦甜香成分；
优选地，所述烟叶为三明尤溪烟叶；优选为复烤三明尤溪烟叶。


2.权利要求1的方法，步骤(2)中所述大孔树脂填料选自DiaionHP-10、-20、-30、-40或-50，AB-8，D101，D102和D402，优选D101；
优选地，以下述溶剂作为流动相进行洗脱：乙醇、甲醇、异丙醇、水、或其混合体系，优选乙醇水溶液，例如20％乙醇水溶液；
优选地，所述流动相的流速为10-50mL/min(例如10mL/min，15mL/min，20mL/min，25mL/min，30mL/min，35mL/min，40mL/min，45mL/min或50mL/min)。


3.权利要求1或2的方法，步骤(1)中所述提取操作如下所述：用50％-95％乙醇(例如50％乙醇、70％乙醇或95％乙醇)、二氯甲烷或水作为溶剂，在50℃-80℃或者回流条件下对所述烟叶提取10min-2h(例如10min、30min、1h或2h)；
优选地，步骤(1)中所述浓缩为减压浓缩；优选地，控制浓缩液密度为1.36-1.42g/cm3。


4.权利要求1-3任一项的方法，在步骤(4)中，所述GC×GC-TOFMS色谱分析条件选自下述的一项或多项：：
(1)色谱柱一：HP-5MS(60m×0.25mm×0.25μm)；
(2)色谱柱二：DB-l7(2.3m×0.1mm×0.1μm)；
(3)柱温程序：50℃(1min)→3℃/min→220℃→2℃/min→260℃(10min)；
(4)载气：He；
(5)载气控制方式：恒流，1-1.5mL/min；
(6)进样口温度：250-300℃；
(7)调制周期：3-6秒；
(8)进样量：1μL；
(9)分流模式：分流进样，分流比10-30:1。


5...

【专利技术属性】
技术研发人员：茅中一，张峰，陈小明，周培琛，伊勇涛，章雪锋，洪祖灿，谢金栋，
申请(专利权)人：福建中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：福建;35