用于诊断黑色素瘤的尿液蛋白标记物制造技术

本发明专利技术涉及用于诊断黑色素瘤的尿液蛋白标记物。具体地，本发明专利技术涉及检测受试者尿液中蛋白质含量的试剂在制备用于诊断所述受试者黑色素瘤的药物中的用途，其中所述检测受试者尿液中蛋白质含量的试剂是质谱鉴定试剂、抗体或其抗原结合片段。

Urinary protein markers for diagnosis of melanoma

【技术实现步骤摘要】
用于诊断黑色素瘤的尿液蛋白标记物
本专利技术涉及临床诊断的
具体地，本专利技术涉及用于诊断黑色素瘤的尿液蛋白标记物。具体而言，本专利技术涉及利用质谱分析蛋白组学技术获得的与人黑色素瘤相关的尿液蛋白标志物及其用途。
技术介绍
皮肤黑色素瘤是全球第12大最常见的癌症，参见Ferlay,J.等人Cancerincidenceandmortalityworldwide:Sources,methodsandmajorpatternsinGLOBOCAN2012.InternationalJournalofCancer,2015，136(5):p.E359-E386。黑色素瘤由黑素细胞恶性转化产生，可以发生在皮肤和黏膜的所有部位，易转移，具有高度侵袭性、高度恶性导致高死亡率。黑色素瘤的诊断由临床和病理学标准相结合，包括查体、病理组织学检查和影像学检查，参见CSCO黑色素瘤专家委员会,中国黑色素瘤诊治指南(2011版)临床肿瘤学杂志,2012.17(2):p.159-171。然而，由于其组织学形态多变，或仅有少量甚至没有任何可见色素，患者自身早期发现困难，临床有时与良性痣鉴别不易，早期诊断困难，参见，Li,H等人,Primarymalignantmelanomaoftheduodenumwithoutvisiblemelaninpigment:amimickeroflymphomaorcarcinoma.DiagnPathol,2012.7:p.74。黑色素瘤早期治疗以外科手术为主，晚期则包括化疗、靶向治疗和免疫治疗。相较于单独使用化疗治疗，靶向治疗和免疫治疗目前已明显改善晚期黑色素瘤患者的生存率，但这两种疗法通常受到耐药率的限制，且不具有普遍适用性，参见Hugo,W.等人,GenomicandTranscriptomicFeaturesofResponsetoAnti-PD-1TherapyinMetastaticMelanomaCell2016，165(1):p.35-44；Caenepeel,S.等人,MAPKpathwayinhibitioninducesMETandGAB1levels,primingBRAFmutantmelanomaforrescuebyhepatocytegrowthfactor，Oncotarget,2017，8(11):p17795-17809，患者绝对生存率仍然很低，参见Hamid,O.等人,Five-yearsurvivaloutcomesforpatientswithadvancedmelanomatreatedwithpembrolizumabinKEYNOTE-001.AnnOncol,2019.30(4):p.582-588。据报道，皮肤黑色素瘤I～IV期的5年生存率依次为97％(IA期)、84％(IB期)、68％、55％、17％，参见Aubuchon,M.M.F.等人,Epidemiology,managementandsurvivaloutcomesofprimarycutaneousmelanoma:aten-yearoverview.ActaChirurgicaBelgica:p.1-7。因此，早期诊断可为早期治疗提供帮助，从而提高患者生存率。生物标志物是能够客观反应正常生理、病理过程的一类指示物，参见Strimbu,K.和J.A.Tavel,Whatarebiomarkers？CurrOpinHIVAIDS,2010.5(6):p.463-6。从临床的角度来看，生物标志物能够帮助多因素疾病不同阶段的监测、预测和诊断，参见Gerszten,R.E.和T.J.Wang,Thesearchfornewcardiovascularbiomarkers.Nature,2008.451(7181):p.949-952。血液是一个相对稳定的系统，随着病情的推进，当血液到达代偿的临界点时，开始失代偿。在达到失代偿的临界点之前，疾病引起的变化被血液排除，在这个过程中，一个最重要的废品收集站就是尿液。所以，在存在多种变化的尿液中更有可能找到敏感的早期标志物，参见Gao,Y.,Urine—anuntappedgoldmineforbiomarkerdiscovery？ScienceChinaLifeSciences,2013.56(12):p.1145-1146。尿液易受性别，年龄，饮食等多种因素影响，参见Wu,J.andY.Gao,Physiologicalconditionscanbereflectedinhumanurineproteomeandmetabolome.ExpertReviewofProteomics,2015.12(6):p.623-636，使用生存条件可控、遗传背景清晰的动物模型既可避免以上因素干扰，又可对病程进行连续监控。已有研究表明，尿液能够敏感反映肿瘤细胞在动物模型中的变化，参见Wu,J.,Z.Guo,andY.Gao,DynamicchangesofurineproteomeinaWalker256tumor-bearingratmodel.Cancermedicine,2017.6(11):p.2713-2722；Zhang,L.,Y.Li,andY.Gao,Earlychangesintheurineproteomeinadiethyldithiocarbamate-inducedchronicpancreatitisratmodel.JournalofProteomics,2018.186:p.8-14。因此，为探索黑色素瘤的发生发展对尿液蛋白质组中的影响，本研究通过皮下注射B16肿瘤细胞建立荷瘤小鼠模型，收集与肿瘤发生发展对应的4个时间点的尿液样本，利用液相色谱串联高分辨率质谱(LC-MS/MS)分析尿液蛋白质组，寻找差异蛋白，为黑色素瘤的早期诊断提供一些线索。
技术实现思路
本专利技术通过皮下注射B16细胞建立荷瘤小鼠模型，收集肿瘤生长期间4个时间点的尿液样本，通过液相色谱串联高分辨质谱技术(LC-MS/MS)进行分析。与注射肿瘤细胞前相比，B16荷瘤模型共鉴定到38种人同源差异蛋白质，其中4种蛋白质在肿瘤可见前出现显著差异。通过以上实验与分析，可以在尿液中找到黑色素肿瘤的早期生物标志物信息，并为相关肿瘤的临床早期诊断提供线索。一方面，本专利技术提供了检测受试者尿液中蛋白质含量的试剂在制备用于诊断所述受试者黑色素瘤的药物中的用途，其中所述尿液中蛋白质选自以下的一种或多种、或其组合：骨桥蛋白、碳酸酐酶1、粘蛋白13、肌动蛋白α心肌1、三肽基肽酶1、线粒体硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶、胰岛素样生长因子结合蛋白4、溶质载体家族12成员3、生长停滞特异性蛋白6、肝细胞生长因子激活剂、铜转运蛋白ATOX1、前列腺素-H2D-异构酶、唾液酸酶1、真核翻译起始因子6、免疫球蛋白κ常数、C4b结合蛋白、细胞间粘附分子1、凝血酶原、肝细胞生长因子样蛋白、核运输因子2、体细胞细胞色素c、微管蛋白beta-4B链、CVB3结合蛋白、半乳糖凝集素-3结合蛋白、Costars家本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测受试者尿液中蛋白质含量的试剂在制备用于诊断所述受试者黑色素瘤的药物中的用途，其中所述尿液中蛋白质选自以下的一种或多种、或其组合：骨桥蛋白、碳酸酐酶1、粘蛋白13、肌动蛋白α心肌1、三肽基肽酶1、线粒体硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶、胰岛素样生长因子结合蛋白4、溶质载体家族12成员3、生长停滞特异性蛋白6、肝细胞生长因子激活剂、铜转运蛋白ATOX1、前列腺素-H2D-异构酶、唾液酸酶1、真核翻译起始因子6、免疫球蛋白κ常数、C4b结合蛋白、细胞间粘附分子1、凝血酶原、肝细胞生长因子样蛋白、核运输因子2、体细胞细胞色素c、微管蛋白beta-4B链、CVB3结合蛋白、半乳糖凝集素-3结合蛋白、Costars家族蛋白ABRACL、ATP结合盒亚家族A成员13、α-1-酸性糖蛋白1、整合素和金属蛋白酶结构域蛋白9、白介素1受体辅助蛋白、细胞粘附分子4、酸性哺乳动物几丁质酶、转铁蛋白、6-磷酸葡萄糖酸内酯酶、迁移和入侵增强子1、细胞色素B5型、14kDa磷酸组氨酸磷酸酶、中性神经酰胺酶和类酪氨酸蛋白10。/n

【技术特征摘要】
1.检测受试者尿液中蛋白质含量的试剂在制备用于诊断所述受试者黑色素瘤的药物中的用途，其中所述尿液中蛋白质选自以下的一种或多种、或其组合：骨桥蛋白、碳酸酐酶1、粘蛋白13、肌动蛋白α心肌1、三肽基肽酶1、线粒体硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶、胰岛素样生长因子结合蛋白4、溶质载体家族12成员3、生长停滞特异性蛋白6、肝细胞生长因子激活剂、铜转运蛋白ATOX1、前列腺素-H2D-异构酶、唾液酸酶1、真核翻译起始因子6、免疫球蛋白κ常数、C4b结合蛋白、细胞间粘附分子1、凝血酶原、肝细胞生长因子样蛋白、核运输因子2、体细胞细胞色素c、微管蛋白beta-4B链、CVB3结合蛋白、半乳糖凝集素-3结合蛋白、Costars家族蛋白ABRACL、ATP结合盒亚家族A成员13、α-1-酸性糖蛋白1、整合素和金属蛋白酶结构域蛋白9、白介素1受体辅助蛋白、细胞粘附分子4、酸性哺乳动物几丁质酶、转铁蛋白、6-磷酸葡萄糖酸内酯酶、迁移和入侵增强子1、细胞色素B5型、14kDa磷酸组氨酸磷酸酶、中性神经酰胺酶和类酪氨酸蛋白10。


2.根据权利要求1所述的用途，其中所述诊断为早期诊断，优选地，所述早期诊断定义为肿瘤形成，但没有可见或可触及的肿块或临床症状，优选地所述尿液中蛋白质选自骨桥蛋白、碳酸酐酶1、粘蛋白13和肌动蛋白α心肌1中的一种或多种。


3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述检测受试者尿液中蛋白质含量的试剂是质谱鉴定试剂、抗体或其抗原结合片段。


4.根据权利要求3所述的用途，其中所述检测受试者尿液中蛋白质含量的试剂是单克隆抗体。


5.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述受试者是哺乳动物，优选是人。


6.根据权利要求1或2所述的用途，其中与健康对照相比，尿液中的骨桥蛋白、碳酸酐酶1、粘蛋白13、线粒体硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶、溶质载体家族...

【专利技术属性】
技术研发人员：高友鹤，李璐隽，
申请(专利权)人：北京师范大学，
类型：发明
国别省市：北京;11