特立帕肽的肽图检测方法技术

本发明专利技术公开了一种特立帕肽的肽图检测方法。该肽图检测方法包括采用胰蛋白酶对特立帕肽样品进行酶解，以RP‑HPLC法对酶解的肽段进行分析，酶解具体包括：1)空白样品制备：取碳酸氢铵溶液，加入胰蛋白酶溶液，置37℃水浴13‑15h，取出后终止反应，离心，收集上清液；2)供试品制备：取样品加入碳酸氢铵溶液，加入胰蛋白酶溶液，置37℃水浴13‑15h，取出后终止反应，离心，收集上清液；3)理化对照品制备：用超纯水稀释，取150μl，加入1％碳酸氢铵溶液350μl，加入胰蛋白酶溶液4μl，置37℃水浴13‑15h，取出后终止反应，离心，收集上清液。应用本发明专利技术的技术方案，具有更好的分离效果。

Determination of trypatide by peptide map

【技术实现步骤摘要】
特立帕肽的肽图检测方法
本专利技术涉及生物医学
，具体而言，涉及一种特立帕肽的肽图检测方法。
技术介绍
DNA重组技术获得目的蛋白为现今最为常用的技术手段，中国基于此项技术的发展，在《中国药典》中起草人用重组DNA蛋白制品的总论，目的是规范生产和质量控制的要求。根据《中国药典》2015版三部“人用重组DNA蛋白制品总论”对于产品质量控制的要求，应进行制品的结构分析，以确认产品的正确性。蛋白一级结构分析通常采用胰蛋白酶或化学物质裂解蛋白后，采用适宜的分析方法进行一级结构完整性和准确性分析，称之为肽图检查。《中国药典》2015版四部中收录两种肽图检查方法，其中胰蛋白酶酶解-反相高效液相色谱肽图分析技术作为肽图检查第一法，其灵敏高，能够比较重组与天然蛋白质结构之间的差别，还可有效判别样品的变化的特点，使其成为基因工程药物的分子结构和遗传稳定性验证的首选方法。特立帕肽又名重组人甲状旁腺激素(1-34)等，能够刺激骨形成和骨吸收，可减少绝经后妇女骨折的发生率，根据给药方式的不同，还能提高或降低骨密度。连续输注可导致甲状旁腺素PTH浓度持续增本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特立帕肽的肽图检测方法，包括采用胰蛋白酶对特立帕肽样品进行酶解，以RP-HPLC法对酶解的肽段进行分析，其特征在于，所述采用胰蛋白酶对特立帕肽样品进行酶解具体包括：/n1)空白样品制备：取1％碳酸氢铵溶液500μl，加入胰蛋白酶溶液4μl，置37℃水浴13-15h，取出后加入冰醋酸溶液30μl终止反应，以10000rpm离心5min，收集上清液，备用；/n2)供试品制备：将样品用超纯水稀释到1.0mg/ml，取样品150μl，加入1％碳酸氢铵溶液350μl，加入胰蛋白酶溶液4μl，置37℃水浴13-15h，取出后加入冰醋酸溶液30μl终止反应，以10000rpm离心5min，收集上清液...

【技术特征摘要】
1.一种特立帕肽的肽图检测方法，包括采用胰蛋白酶对特立帕肽样品进行酶解，以RP-HPLC法对酶解的肽段进行分析，其特征在于，所述采用胰蛋白酶对特立帕肽样品进行酶解具体包括：
1)空白样品制备：取1％碳酸氢铵溶液500μl，加入胰蛋白酶溶液4μl，置37℃水浴13-15h，取出后加入冰醋酸溶液30μl终止反应，以10000rpm离心5min，收集上清液，备用；
2)供试品制备：将样品用超纯水稀释到1.0mg/ml，取样品150μl，加入1％碳酸氢铵溶液350μl，加入胰蛋白酶溶液4μl，置37℃水浴13-15h，取出后加入冰醋酸溶液30μl终止反应，以10000rpm离心5min，收集上清液，备用；
3)理化对照品制备：将理化对照品用超纯水稀释到1.0mg/ml，取对照品150μl，加入1％碳酸氢铵溶液350μl，加入胰蛋白酶溶液4μl，置37℃水浴13-15h，取出后加入冰醋酸溶液30μl终止反应，以10000rpm离心5min，收集上清液，备用。


2.根据权利要求1所述的特立帕肽的肽图检测方法，其特征在于，所述以RP-HPLC法对酶解的肽段进行分析中所用的流动相A由0.1％三氟乙酸，10％乙腈和余量水组成，所述流动相A的各组分混匀后，超声脱气30min，备用，临用现配。


3.根据权利要求1所述的特立帕肽的肽图检测方法，其特征在于，所述以RP-HPLC法对酶解的肽段进行分析中所用的流动相B由0.1％三氟乙酸，10％水和余量乙腈组成，所述流动相B的各组分混匀后，超声脱气30min，备用，临用现配。


4.根据权利要求1所述的特立帕肽的肽图检测方法，其特征在于，所述以RP-HPLC法对酶解的肽段进行分析中所用的色谱柱为SymmetryC1...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘月峰，张梦，李静，樊欣迎，郭静雅，
申请(专利权)人：北京博康健基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11