一种环状RNA作为肝衰竭标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种环状RNA作为肝衰竭标志物的应用，是包含有含有环状RNA has_circ_0001017或者has_circ_0001016应用于判断肝衰竭的标志物。特别二者可以很好区分慢性乙肝患者与肝衰竭的区别。设计并合成出特异的用于实时定量PCR的检测引物。在肝衰竭进程中找到分子预警信号，本发明专利技术发现has_circ_0001017或者has_circ_0001016分子标志物为肝衰竭标志物，包含1个试剂盒，可实现肝衰竭患者与非肝衰竭患者样本的区分，解决临床上早期肝衰竭难以及时、准确诊断的缺陷。

A circular RNA as a marker of liver failure and its application

【技术实现步骤摘要】
一种环状RNA作为肝衰竭标志物及其应用
本专利技术属于生物标志物领域，具体地本专利技术涉及一种环状RNA作为肝衰竭标志物及其运用。该标志可以很好的反应肝衰竭的程度。
技术介绍
肝功能衰竭被认为是先天性免疫功能障碍的综合征。患者表现出促炎症状态，伴有局部肝脏炎症，全身炎症反应综合征和血管内皮功能障碍，可导致多器官衰竭。他们极易感染，如败血症，这些疾病的预后较差，感染性并发症导致高发病率和高死亡率。肝内事件可能通过可溶性介质的溢出和通过肝脏时暴露于凋亡细胞碎片而影响循环单核细胞。因此，外周血单核细胞在急性肝衰竭综合征中表现出许多获得性缺陷，这些缺陷损害了它们的抗微生物程序，并有助于增强脓毒症的易感性，因此早期诊断肝衰竭显得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种环状RNA作为肝衰竭标志物的运用，其包含有环状RNAhas_circ_0001017或者has_circ_0001016。检测has_circ_0001017或者has_circ_0001016的试剂为实时荧光定量PCR试剂盒。试剂盒中检测has_circ_0001017的序列如TGCTGGCATAGATTACTTCGC(SEQIDNO.1)和GCTTGGACAAGAGTCGACAC(SEQIDNO.2)所示的引物对。试剂盒中检测has_circ_0001016的序列如TTGAGCCATTCTTTGCTTCGC(SEQIDNO.3)和GCTTGGACAAGAGTCGACAC(SEQIDNO.2)所示的引物对。本研究受国家自然科学基金的支持（81860572）。本专利技术（优点）：方法非常简单可以通过提取外周血血浆中的RNA后进行荧光定量检测从而判定患者是否存在肝衰竭，整个过程仅仅需要2-3个小时，外周血需要量0.5ml，成本低，器材简单，通过5个副孔，最大程度减少变异。具体实施方式下面对本专利技术作进一步的说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变换或替换，均属于本专利技术的保护范围。本专利技术所述的环状RNA作为肝衰竭标志物的应用，所述的环状RNA包含有环状RNAhas_circ_0001017或者has_circ_0001016。检测has_circ_0001017或者has_circ_0001016的试剂为实时荧光定量PCR试剂盒。实时荧光定量PCR试剂盒中检测has_circ_0001017的序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的引物对。实时荧光定量PCR试剂盒中检测has_circ_0001016的序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.2所示的引物对。实施例1在取得知情同意后，收集肝衰竭患者15名，慢性乙肝患者26名，健康人26名，外周血0.5ml，采用EDTA抗凝，采血或30分钟内将血800g离心，离心10分钟，分离上层血浆，在血浆中加入TRZOL，按中TRZOL的说明书进行提取RNA,然后进行逆转录，最后进行实时荧光量PCR。实时荧光定量PCR反应体系(15.0μl)包括,7.5μl荧光定量试剂，1μlcDNA,1.5μl引物上下游引物为（5μlmol/L）,去离子水5μl。PCR反应条件为95℃10min预变性，95℃10s、60℃10s、72℃10s40个循环得到Ct值，每个反应5个副孔，增加数据确定性。使用β-actin作用内参，使用ΔCt值表示基因表达。ΔCt=-（Ct目的基因-Ct内参）。has_circ_0001017上游引物：TGCTGGCATAGATTACTTCGC(SEQIDNO.1)下游引物：GCTTGGACAAGAGTCGACAC(SEQIDNO.2)，has_circ_0001016上游引物：TTGAGCCATTCTTTGCTTCGC(SEQIDNO.3)下游引物：GCTTGGACAAGAGTCGACAC(SEQIDNO.2)，β-actin上游引物：ATTGCCGACAGGATGCAGAA(SEQIDNO.4)下游引物：GCTGATCCACATCTGCTGGAA(SEQIDNO.5)。肝衰竭患者15名，慢性乙肝患者26名，健康人26名，has_circ_0001016ΔCt值分别为：7.823±1.141,5.270±0.6823,5.450±0.6949。肝衰竭患者15名，慢性乙肝患者26名，健康人26名，has_circ_0001017ΔCt值分别为6.105±1.217,3.140±0.6037,2.940±0.6398。判定规则1：has_circ_0001016ΔCt大于6.00判断为肝衰竭，正确率达到94.23%。判定规则2：has_circ_0001017ΔCt大于判断为肝衰竭，正确率达到98.07%。SEQUENCELISTING<110>昆明医科大学<120>一种环状RNA作为肝衰竭标志物及其应用<130>1<140>1<141>2020-01-17<160>5<170>PatentInversion3.3<210>1<211>21<212>DNA<213>人工序列(Artificialsequence)<400>1tgctggcatagattacttcgc21<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列(Artificialsequence)<400>2gcttggacaagagtcgacac20<210>3<211>21<212>DNA<213>人工序列(Artificialsequence)<400>3ttgagccattctttgcttcgc21<210>4<211>20<212>DNA<213>人工序列(Artificialsequence)<400>4attgccgacaggatgcagaa20<210>5<211>21<212>DNA<213>人工序列(Artificialsequence)<400>5gctgatccacatctgctggaa21本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种环状RNA 作为肝衰竭标志物的应用，其特征在于所述的环状RNA包含有环状RNAhas_circ_0001017或者has_circ_0001016。/n

【技术特征摘要】
1.一种环状RNA作为肝衰竭标志物的应用，其特征在于所述的环状RNA包含有环状RNAhas_circ_0001017或者has_circ_0001016。


2.根据权利要求1所述环状RNA作为肝衰竭标志物的应用，其特征在于检测has_circ_0001017或者has_circ_0001016的试剂为实时荧光定量PCR试剂盒。


3.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：何越峰，李晖，钱舒然，谭婧文，王萌婕，平妮娜，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：云南;53