本发明专利技术提供一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒及应用，该试剂盒包括用于检测钙需求相关的GC基因RS2282679位点、IL‑6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的引物组合物，包括5对PCR引物和5个正向延伸引组合物，如SEQ ID No:1‑15所示，本发明专利技术不仅能够快速同步检测多个SNP位点,对与钙需求相关的基因SNP位点进行有效的基因分型，而且有效提高了多数量的SNP位点在一个反应体系中分型的准确性且检测限低，实现快速而准确地给出钙质补充的指导意见。
【技术实现步骤摘要】
一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒及应用
本专利技术涉及基因多态性检测
，特别涉及一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒及应用。
技术介绍
钙是人体内含量最多的矿物元素，广泛存在于身体的各个部分。绝大多数钙元素沉积于骨骼和牙齿中，既组成人体的支架，又是机体内钙元素的储存库，而只有1％的钙存在于人体的软组织、细胞外液及血液中。软组织和血液中的钙又叫“混合钙池”，与骨骼中的钙保持着动态平衡，完成多种生理功能，钙在神经冲动的传递、神经与肌肉应激、血液凝固、心跳节律的维持、人体代谢酶的激活等许多生理过程中起重要的作用。当长期钙摄入不足，机体势必动用大量的骨钙来维持体液钙的水平，影响骨骼健康。在儿童身上会引起佝偻病，成人则会发生严重骨质疏松。科学研究表明，人体需钙量在不同时期存在差异，膳食营养中的摄入的钙质并不全能被人体吸收利用，被肠道吸收后通过血循环沉积到骨骼中，部分经肠道、肾脏等途径排出体外。在这一系列过程中，不仅与多种营养元素相互作用，还受到多种激素的调控。因此，遗传因素的影响是一个重要方面，不同基因型、不同遗传体质的人群钙吸收代谢能力存在差异，特别是儿童、青少年人群，处于生长发育旺盛时期，对钙的需求量高，钙的足量摄入尤为重要，一旦钙在体内的吸收代谢过程发生障碍，不但影响到儿童的正常生长发育，还可导致儿童时期的佝偻病，低钙性手足搐搦，孕妇骨矿含量下降、牙齿损害和骨质疏松等问题。从遗传角度评估人群个体对钙元素的需求程度，通过基因检测来评估个体对钙需求的情况，以及时进行干预，指导合理补充。但对于钙需求相关基因的检测，现有采用的Sanger测序、Taqman法、高分辨率溶解曲线等检测，往往存在通量低，操作步骤繁琐，并且为了更加全面合理地指导钙质补充，随着检测位点的增多时，对于大通量地检测多基因位点反而容易出现特异性和灵敏度低，上样量高，检出率和检测效率降低、准确度低的问题，因而始终无法将其有效应用于评估个体对于钙需求的差异，以指导补充钙质的遗传检测中。
技术实现思路
鉴以此，本专利技术提出一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒及应用，该试剂盒不仅能够快速同步检测多个SNP位点,对与钙需求相关的基因SNP位点进行有效的基因分型，而且有效提高了更多数量的SNP位点在一个反应体系中分型的准确性且检测限低，反应电泳图谱结果稳定清晰，实现快速而准确地给出钙质补充的指导意见。本专利技术的技术方案是这样实现的：一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒，包括用于检测钙需求相关的GC基因RS2282679位点、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的引物组合物，所述引物组合物的序列为：GC基因RS2282679位点的正反向PCR引物：SEQIDNo:1-2，正向延伸引物：SEQIDNo:11；IL-6基因RS1800795位点正反向PCR引物：SEQIDNo:3-4，正向延伸引物：SEQIDNo:12；PTH基因RS6254位点正反向PCR引物：SEQIDNo:5-6，正向延伸引物：SEQIDNo:13；VDR基因RS1544410位点正反向PCR引物：SEQIDNo:7-8，正向延伸引物：SEQIDNo:14；VDR基因RS2228570位点正反向PCR引物：SEQIDNo:9-10，正向延伸引物：SEQIDNo:15。进一步说明，正向延伸引物序列中的5’端采用不同数量的ployT修饰；其中，GC基因RS2282679位点、、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的正向延伸引物上的ployT修饰数量依次为：22、16、35、29、19。进一步说明，所述GC基因RS2282679位点、、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的正向延伸引物浓度比为2:1:3:2:1。进一步说明，所述GC基因RS2282679位点、、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的各对正反向PCR引物浓度比为1:1:1:1:2。进一步说明，所述试剂盒还包括以下试剂：(1)多重PCR扩增试剂：包括dNTPs、TaqDNA聚合酶、PCR反应缓冲液、1xGC-I缓冲液、Mg2+：(2)PCR产物纯化试剂：AP酶、Exol1酶、Seqbuffer；(3)多重单碱基延伸反应试剂：SNaPshotMultiplexKit(ABI)；(4)延伸产物纯化试剂：SAP酶；(5)测序变性反应试剂：120LizSIZESTANDARD内标、Hi-Di甲酰胺。进一步说明，纯化后多重PCR产物、正向延伸引物组合物与多重单碱基延伸反应试剂中的SNaPshotMultiplexKit(ABI)的体积比为2:1:1。进一步说明，纯化后的延伸产物与测序变性反应试剂中的120LizSIZESTANDARD内标、Hi-Di甲酰胺的体积比为12:3:92。一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒在婴幼儿、儿童、青少年及孕妇的钙需求遗传检测的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术不仅能够实现了快速同步检测多个SNP位点,对与钙需求相关的基因SNP位点进行有效的基因分型，实现大通量的钙需求相关基因的快速有效检测，更重要的是，本专利技术还通过对与钙需求相关的基因进行了优选，由GC基因、IL-6基因、PTH基因和VDR基因中筛选出了5个SNP位点进行同步检测，结合其SNP位点体系的特点，优化设计出了PCR引物组合物和紧邻SNP位点的正向延伸组合物，并针对不同的SNP位点进一步调整其正向延伸引物组合的不同长度，使得所有的引物序列均能够对样本基因进行准确快速分型，提高更多数量的SNP位点在一个反应体系中分型的准确性，高效直观地根据电泳锋图移动的位置确定不同延伸产物对应的SNP位点，根据锋的颜色直接判定掺入的碱基种类，易判读，且检测限低，检出率高，特异性好，重复性好，样本检测的准确性100％，从而实现更加快速、准确地分析个体对钙需求的差异，根据遗传检测结果，实现快速而准确地给出钙质补充的指导意见，促进骨骼健康发育，避免钙缺乏疾病和骨质疏松症的发生。附图说明图1为本专利技术实施例中实验样本2对GC基因RS2282679位点基因分型的反应电泳图谱；图2为本专利技术实施例中实验样本2对IL-6基因RS1800795位点基因分型的反应电泳图谱；图3为本专利技术实施例中无法对IL-6基因RS1800795位点基因分型的反应电泳图谱图4为本专利技术实施例中实验样本2对PTH基因RS6254位点基因分型的反应电泳图谱；图5为本专利技术实施例中无法对PT本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒，其特征在于：包括用于检测钙需求相关的GC基因RS2282679位点、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的引物组合物，所述引物组合物的序列为：/nGC基因RS2282679位点的正反向PCR引物：SEQ ID No:1-2，正向延伸引物：SEQ ID No:11；/nIL-6基因RS1800795位点正反向PCR引物：SEQ ID No:3-4，正向延伸引物：SEQ ID No:12；/nPTH基因RS6254位点正反向PCR引物：SEQ ID No:5-6，正向延伸引物：SEQ ID No:13；/nVDR基因RS1544410位点正反向PCR引物：SEQ ID No:7-8，正向延伸引物：SEQ ID No:14；/nVDR基因RS2228570位点正反向PCR引物：SEQ ID No:9-10，正向延伸引物：SEQ ID No:15。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒，其特征在于：包括用于检测钙需求相关的GC基因RS2282679位点、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的引物组合物，所述引物组合物的序列为：
GC基因RS2282679位点的正反向PCR引物：SEQIDNo:1-2，正向延伸引物：SEQIDNo:11；
IL-6基因RS1800795位点正反向PCR引物：SEQIDNo:3-4，正向延伸引物：SEQIDNo:12；
PTH基因RS6254位点正反向PCR引物：SEQIDNo:5-6，正向延伸引物：SEQIDNo:13；
VDR基因RS1544410位点正反向PCR引物：SEQIDNo:7-8，正向延伸引物：SEQIDNo:14；
VDR基因RS2228570位点正反向PCR引物：SEQIDNo:9-10，正向延伸引物：SEQIDNo:15。
2.如权利要求1所述的一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒，其特征在于：正向延伸引物序列中的5’端采用不同数量的ployT修饰；其中，GC基因RS2282679位点、、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的正向延伸引物上的ployT修饰数量依次为：22、16、35、29、19。
3.如权利要求1所述的一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒，其特征在于：所述GC基因RS2282679位点、、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS222857...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏震，陈春宝，张子询，
申请(专利权)人：海南主健细胞分子遗传医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：海南;46
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