三刺鱼CYP1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用及其检测方法技术

本发明专利技术提供了一种三刺鱼CYP1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用及其检测方法，涉及水体污染检测技术领域，该应用通过利用三刺鱼的生物学效应，将三刺鱼CYP1家族基因作为生物标记物对水体污染进行检测，可以更为直观的得到水体污染状况，能够有效缓解现有的常规化学检测手段往往只能对单一或部分的有毒有害物质进行检测，可能存在漏检某类污染物质的可能性的问题，同时也为不同污染物进行早期评价提供了基础理论依据。

Application of CYP1 family gene in the preparation of biomarkers for water pollution detection and its detection method

【技术实现步骤摘要】
三刺鱼CYP1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用及其检测方法
本专利技术涉及水体污染检测
，尤其是涉及一种三刺鱼CYP1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用、检测生物标记物及其检测方法。
技术介绍
近年来，随着工农业领域的迅猛发展，水体污染的状况变得越来越严峻。水体的安全直接关系着人民的生活健康和水产品的生产安全，因此，对水体进行污染物安全检测具有重要的意义。然而，水体中的污染物各有不同，有的为单一污染物，也有的为多种污染物的混合污染。目前的水体检测方法还大多局限于常规的化学检测手段，这类的化学检测手段往往只能对单一的或部分的有毒有害物质进行检测，其检测范围有限。但是由于现有化学污染物成分的复杂性，现有的常规手段存在漏检某类污染物的可能性，存在着较高的漏检风险。利用生物体的生物学效应对水体进行检测，由于能够更为直观的得到水体的污染程度，近些年越来越受到人们的重视。因此，研究开发出一种利用生物体的特定生物标记物对水体污染进行检测的方法，对不同类型污染物所产生的生物效应进行归纳总结，进而为不同污染进行早期评价提供基础理论依据，变得十分必要和迫切。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种三刺鱼CYP1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用，该应用通过将三刺鱼CYP1家族基因作为生物标记物对水体污染进行检测，可以更为直观的得到水体污染状况，能够有效缓解现有的常规化学检测手段往往只能对单一的或部分的有毒有害物质进行检测，可能存在漏检某类污染物质的可能性的问题。本专利技术的第二目的在于提供一种水体污染检测生物标记物，所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼CYP1家族基因。本专利技术的第三目的在于提供一种水体污染检测方法，所述检测方法的检测指标包括上述水体污染检测生物标记物。本专利技术提供的三刺鱼CYP1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用。本专利技术提供的一种水体污染检测生物标记物，所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼CYP1家族基因；优选地，所述三刺鱼CYP1家族基因包括三刺鱼CYP1A，三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2基因中的至少一种。进一步的，所述水体污染检测生物标记物为三刺鱼CYP1A，三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2基因的组合。本专利技术提供的一种水体污染检测方法，所述检测方法的检测指标包括上述水体污染检测生物标记物。进一步的，所述水体污染检测的污染物为有机污染物。更进一步的，所述有机污染物包括多环芳烃、多氯联苯和二噁英中的至少一种。进一步的，所述检测方法包括以下步骤：(a)、将三刺鱼作为水体污染检测的生物学样本进行培养；(b)、利用分子生物学的方法对步骤(a)培养后的三刺鱼中上述水体污染检测生物标记物的相对表达含量进行检测；所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼CYP1A，三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2基因中的至少一种；(c)、通过步骤(b)三刺鱼CYP1A，三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2基因相对表达含量的差异，对水体进行污染检测分析；优选地，所述步骤(a)培养在有机污染物胁迫的条件下进行。更进一步的，所述步骤(b)对培养后三刺鱼进行检测的检测方法包括以下步骤：(Ⅰ)、将步骤(a)培养完成后的三刺鱼进行总RNA提取，随后以总RNA为模板转录合成首链cDNA；(Ⅱ)、以首链cDNA为模板，利用三刺鱼CYP1A、三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2的特异性引物和内参引物进行荧光PCR扩增反应，得到三刺鱼CYP1A、三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2的相对表达含量。进一步的，所述步骤(Ⅱ)中三刺鱼CYP1A的特异性引物如SeqIDNo.01、02所示：SeqIDNo.01：5’-GTCAGACGAGAAGATTGTGGGAA-3’；SeqIDNo.02：5’-CCACTTTGTCCTTCAGCTCTTGAT-3’；优选地，所述步骤(Ⅱ)中三刺鱼CYP1B1的特异性引物序列如SeqIDNo.03、04所示：SeqIDNo.03：5’-GGACCAACTGAGAGACAAATC-3’；SeqIDNo.04：5’-TGCATCTCGGGGAACTTGAC-3’；优选地，所述步骤(Ⅱ)中三刺鱼CYP1C1的特异性引物序列如SeqIDNo.05、06所示：SeqIDNo.05：5’-ATGGAGCTGGTGCAGGTATT-3’；SeqIDNo.06：5’-AACTCCTGGTCTTCGTGTGC-3’；优选地，所述步骤(Ⅱ)中三刺鱼CYP1C2的特异性引物序列如SeqIDNo.07、08所示：SeqIDNo.07：5’-CTGGCAGCTTGGTAGATGTG-3’；SeqIDNo.08：5’-GCTCTTCCACCTTGTTCTGG-3’；优选地，所述步骤(Ⅱ)中内参基因为三刺鱼β-actin基因，其内参引物序列如SeqNo.09、10所示：SeqIDNo.09：5’-ACATCAGGGAGTGATGGTGG-3’；SeqIDNo.10：5’-CAGGATACCTCTCTTGCTCTG-3’。进一步的，所述步骤(c)对水体进行污染检测分析的方法为：当水体出现多环芳烃污染时，三刺鱼CYP1A和CYP1B1的相对表达含量同时升高；当水体出现多氯联苯污染时，三刺鱼CYP1A和CYP1C1的相对表达含量同时升高；当水体出现二噁英污染时，三刺鱼CYP1A、CYP1B1、CYP1C1和CYP1C2的相对表达含量均同时升高。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的三刺鱼CYP1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用，该应用利用三刺鱼的生物学效应，通过将三刺鱼CYP1家族基因作为生物标记物对水体污染进行检测，可以更为直观的得到水体污染状况，能够有效缓解现有的常规化学检测手段往往只能对单一的或部分的有毒有害物质进行检测，可能存在漏检某类污染物质的可能性的问题。本专利技术提供的水体污染检测生物标记物，所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼CYP1家族基因。经研究发现，三刺鱼CYP1家族基因的表达活性与水环境污染程度的相关性，并且根据不同基因表达模式及其生物效应对污染物种类进行评价具有较强的可行性。本专利技术提供的水体污染检测方法，所述检测方法的检测指标包括上述水体污染检测生物标记物。该方法通过利用上述水体污染检测生物标记物在水体中的相对表达含量的差异，作为生物标记物对水体进行污染分析检测。通过三刺鱼的生物学效应，能够更为直观的得到水体污染状况。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.三刺鱼CYP1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.三刺鱼CYP1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用。


2.一种水体污染检测生物标记物，其特征在于，所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼CYP1家族基因；
优选地，所述三刺鱼CYP1家族基因包括三刺鱼CYP1A，三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2基因中的至少一种。


3.根据权利要求2所述的水体污染检测生物标记物，其特征在于，所述水体污染检测生物标记物为三刺鱼CYP1A，三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2基因的组合。


4.一种水体污染检测方法，其特征在于，所述检测方法的检测指标包括权利要求2或3所述的水体污染检测生物标记物。


5.根据权利要求4所述的水体污染检测方法，其特征在于，所述水体污染检测的污染物为有机污染物。


6.根据权利要求5所述的水体污染检测方法，其特征在于，所述有机污染物包括多环芳烃、多氯联苯和二噁英中的至少一种。


7.根据权利要求4所述的水体污染检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(a)、将三刺鱼作为水体污染检测的生物学样本进行培养；
(b)、利用分子生物学的方法对步骤(a)培养后三刺鱼中权利要求2或3所述的水体污染检测生物标记物的相对表达含量进行检测；
所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼CYP1A，三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2基因中的至少一种；
(c)、通过步骤(b)三刺鱼CYP1A，三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2基因相对表达含量的差异，对水体进行污染检测分析；
优选地，所述步骤(a)培养在有机污染物胁迫的条件下进行。


8.根据权利要求7所述的水体污染检测方法，其特征在于，所述步骤(b)对培养后三刺鱼进行检测的检测方法包括以下步骤：
(Ⅰ)、将步骤(a)培养完成后的三刺鱼进行总RNA提取，随后以总RNA为模板转录合成首链cDNA；
(Ⅱ)、以首链cDNA为模板，利用三刺鱼CYP1A、三刺鱼CYP1B1、三刺鱼CYP1C1和三刺鱼CYP1C2的特异性引物和内参引物进行荧光PC...

【专利技术属性】
技术研发人员：高锴，王秋莲，李泽利，赵兴华，吴娅琳，赵修青，梅鹏蔚，张震，
申请(专利权)人：天津市生态环境监测中心，
类型：发明
国别省市：天津;12