【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含抗体或Fab片段和荧光团的光学显微术试剂
本专利技术涉及免疫荧光显微术领域，尤其涉及用于该技术的新的免疫荧光探针。
技术介绍
免疫荧光显微术是，通过使用经荧光分子标记的抗体(也称为免疫荧光探针)，利用抗体特异性识别并结合细胞内或细胞外的蛋白质表位，从而使组织或细胞中的特定蛋白质抗原显现出来的技术。因使目标抗原可见而著称的两种主要方法是：直接和间接免疫荧光法。在直接免疫荧光法中，使针对目标抗原且已经偶联荧光基团的抗体，与组织或细胞的切片发生反应，其中抗体与目标蛋白质特异性结合。然而，在间接免疫荧光法中，使针对抗原的特异性抗体与待分析的样品发生反应，并使用第二抗体突出显示抗原和抗体之间的结合位点，其中第二抗体与第一抗体的恒定部分结合并与荧光基团偶联。在两种情况下，被标记的样品接着使用荧光显微镜或共聚焦显微镜来进行观察。特别是，用特定波长的光束照射样品，该特定波长的光束会被荧光基团吸收，重新发射出比被吸收的光的波长长的光。由于使用滤光片，而使激发光与发射光分离开，从而在抗原处显现出荧光信号。与电子显微术相比，该技术的突出...
【技术保护点】
1.一种抗体或Fab片段，其中，轻链的N-末端氨基酸和/或重链的N-末端氨基酸的至少一个氨基，通过酰胺键与含荧光基团A的分子结合，所述酰胺键构成所述分子与所述抗体或Fab的总结合力的至少70％，优选地，构成所述分子与所述抗体或Fab的总结合力的至少80％、85％、90％或98％。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170626 IT 1020170000712961.一种抗体或Fab片段，其中，轻链的N-末端氨基酸和/或重链的N-末端氨基酸的至少一个氨基，通过酰胺键与含荧光基团A的分子结合，所述酰胺键构成所述分子与所述抗体或Fab的总结合力的至少70％，优选地，构成所述分子与所述抗体或Fab的总结合力的至少80％、85％、90％或98％。
2.根据权利要求1所述的抗体或Fab片段，其中，所述抗体是单克隆抗体，或所述Fab来源于单克隆抗体。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或Fab片段，其中，所述轻链的N-末端氨基酸和/或重链的N-末端氨基酸的氨基，通过酰胺键与具有下式的Z基团结合：
-CO-(W)n-A
其中，
n为0或1；
A为荧光基团；
W选自C1-C10烷基、-CH2CH2(CH2CH2O)mCH2CH2-X-或-CH2CH2OCH2CH2-Z-Y-CH2CH2OCH2CH2-X-，
其中，m在0和8之间；X选自CO和NH；Y选自CH2CH2OH、嘧啶、甲氧基苯基，或具有下式的组合物：
4.根据权利要求1至3所述的抗体或Fab片段，其中，所述Z基团的分子的氢键受体原子的总数(Num_H_受体)在8～16之间，优选地在10～15之间。
5.根据权利要求1至4所述的抗体或Fab片段，其中，所述Z基团具有在3和-5之间的水/正辛醇分配系数的对数(AlogP)。
6.根据权利要求1至5所述的抗体或Fab片段，其中，所述Z基团的溶剂可及表面(3D极性SASA，溶剂可及表面积)为或以上，优选地在和之间，和/或总极性表面(TPSA，总极性表面积)为或以上，优选地在和之间，更优选地在和之间。
7.根据权利要求1至6所述的抗体或Fab片段，其中，所述Z基团具有：
在7.5和15之间，优选在10和12之间的Kier柔性指数((Φ)，KierFlex)；
总计达到0或以下，优选在0和-10之间的水/正辛醇分配系数的对数(AlogP)；
或以上，优选在和之间的溶剂可及表面积(3D极性SASA，溶剂可及表面积)，和/或
或以上，优选在和之间的总极性表面积(TPSA，总极性表面积)。
8.根据权利要求1至7所述的抗体或Fab片段，其中，所述基团A的摩尔消光系数(ε)不小于80000，且量子产率不小于60％。
9.根据权利要求1至8所述的抗体或Fab片段，其中，所述基团A选自：
荧光团CF568；
衍生自氧杂蒽或羰花青的荧光团，优选地具有下式：
其中，R是选自-OPO3H2和-OH的基团，R’选自-OSO3-和-F；
2-[(1E,3E)-5-[(2Z,3S)-3-(5-甲氧基-5-氧代戊基)-3-甲基-5-磺基-1-(3-磺丙基)-2，3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]戊-1,3-二烯-1-基]-3,3-二甲基-5-磺基-1-(3-磺丙基)-3H-吲哚-2-基(AF647)，具有如下结构：
2-(2,2,10,10-四甲基-4,8-双(磺酸甲基)-2,10-二氢-1H-吡喃并[3,2-g:5,6-g’]二喹啉-11-鎓-6-基)对苯二酸酯(AF568，两种位置异构体)，具有如下结构：
2-[(1E,3Z)-3-[3-(3-丙基氨甲酰基)苯基]-5-[(2Z)-3,3-二甲基-5-磺酸-1-(3-磺酸丙基)-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]戊-1,3-二烯-1-基]-5-氯-3,3-二甲基-7-(3-磺酸丙基)-3H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-鎓；
2-[(E)-2-[(3E)-3-{2-[(2Z)-1-(5-戊基氨甲酰基)-3,3-二甲基-5-磺酸-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]亚乙基}-2-(4-磺酸苯氧基)环己-1-烯-1-基]乙烯基]-3,3-二甲基-1-(4-磺酸丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸盐；
(1P)-2-(6-氨基-3-亚胺基-4,5-二磺酸-3H-氧杂蒽-9-基)-4-氨基甲酰基苯甲酸酯；
1-(5-戊基氨甲酰基)-3,3-二甲基-2-[[(1E,3E)-5-[(2Z)-1,3,3-三甲基-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]戊-1,3-二烯-1-基]-3H-吲哚-1-鎓；
[2-[(1E,3E)-5-[(2Z)-1-(5-戊基氨甲酰基)-3,3-二甲基-5-磺酸-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]-3-甲基戊-1,3-二烯-1-基]-3,3-二甲基-1-(4-磺酸丁基-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸盐；
2-[(1E,3E)-5-[(1R,2Z)-1-(5-戊基氨甲酰基)-3,3-二甲基-5-磺酸-2,3-二氢-1H-吲哚-1-鎓-2-亚基]戊-1,3-二烯-1-基]-3,3-二甲基-1-(4-磺酸丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸盐；
2-叔丁基-4-[(1E)-3-[(2E)-1-(5-戊基氨甲酰基)-3,3-二甲基-5-磺酸-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]丙-1-烯-1-基]-9-乙基-8,8-二甲基-8H,9H-1λ4-苯并吡喃并[7,6-b]吡啶-1-基鎓；
4-[(1E)-3-[(2Z,3S)-3-(5-戊基氨甲酰基)-3-甲基-6-磺酸-1-(3-磺酸丙基)-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]丙-1-烯-1-基]-8,8-二甲基-2-苯基-6-(磺酸甲基)-9-(3-磺酸丙基)-8H,9H-1λ4-苯并吡喃并[7,6-b]吡啶-1-鎓；
2-叔丁基-4-[(1E,3E)-5-[(2E)-1-(5-戊基氨甲酰基)-3,3-二甲基-5-磺酸-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]戊-1,3-二烯-1-基]-7-(二乙氨基)-1λ4-苯并吡喃-1-鎓；
N,N-二甲基-4-[(2E)-1,5,5-三[4-(二甲基氨基)苯基]戊-2,4-二烯-1-亚基]环己-2,5-二烯-1-亚胺基；
2-[(1E,3E)-5-[(2Z)-1-(5-戊基氨甲酰基)-3,3-二甲基-5-磺酸-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]戊-1,3-二烯-1-基]-3,3-二甲基-1-(4-磺酸丁基)-3H-吲哚-1-鎓；
28R)-16-{2-[(3-丙基氨甲酰基)(甲基)氨基甲酰基]苯基}-3-氧杂-9λ5,23-二氮杂七环[17.7.1.15,9.02,17.04,15.023,27.013,28]二十八烷-1(27),2(17),4,9,13,15,18-庚烷-9-鎓；
2-[(1E,3E)-5-[(2Z)-1-(5-戊基氨甲酰基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]戊-1,3-二烯-1-基]-1,3,3-三甲基-3H-吲哚-1-鎓；
2-[(1E,3E)-5-[(1Z,2R)-1-(5-氨基甲酰基亚戊基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-1λ5-吲哚-1-鎓-2-基]戊-1,3-二烯-1-基]-3,3-二甲基-1-(4-磺酸丁基)-3H-吲哚-1-鎓；
4-氨基甲酰基-2-[13-(二甲氨基)-5-(二甲基亚胺基)-2,2-二甲基-2-硅杂三环[8.4.0.03,8]十四烷-1(10),3,6,8,11,13-己烯-9-基]苯甲酸酯；和
2-[(1E,3E)-5-[(2Z)-1-(5-戊基氨甲酰基)-3,3-二甲基-5-磺酸-2,3-二氢-1H-吲哚-2-亚基]戊-1,3-二烯-1-基]-3,3-二甲基-1-(4-磺酸丁基)-3H-吲哚-1-鎓；
(7S,17R)-12-[4-(甲氧羰基)苯基]-7,8,8,16,16,17-六甲基-2-氧杂-6,18-二氮杂五环[11.7.0.03,11.05,9.015,19]...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·卢伊尼，V·M·马尔祖洛，G·帕伦博，F·利卡尔多，
申请(专利权)人：阿尔达责任有限公司，
类型：发明
国别省市：意大利;IT
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