一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法及其试剂盒和应用技术

本发明专利技术公开了一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法及其试剂盒和应用，提供绒毛组织Siglecs家族中的Siglec1‑3、Siglec5‑12、Siglec14‑15制备特异性引物，将该特异性引物包被于细胞培养板上，将待测样品与反应液混合后，加入包被后的细胞培养板中进行PCR定量检测以及使用该检测方法进行的试剂盒，可用于测定绒毛组织中Siglecs家族的核酸水平，不适用于不明原因反复自然流产中的应用，特别是因胚胎植入能力受到影响，而导致的胚胎黏附能力失败等造成的不明原因反复自然流产的检测。

A detection method of Siglecs family in villus tissue and its kit and Application

【技术实现步骤摘要】
一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法及其试剂盒和应用
本专利技术是一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法及其试剂盒和应用，具体涉及对绒毛组织中Siglecs家族核酸水平的检测方法及其使用到的引物和试剂盒，以及该检测方法在预测反复性不明原因流产中的应用，属于医学和生物

技术介绍
反复性自然流产（Recurrentspontaneousabortion，RSA）是指临床上连续2次或2次以上的自然流产，是一种常见的妊娠并发症，其发病率为0.4～0.8%，其中，40～80%的RSA原因不明，称为不明原因反复自然流产（Unexplainedrecurrentspontaneousabortion，URSA）。当前研究发现，URSA的病因复杂多样，包括母体因素（如子宫内膜容受性、免疫性抗体异常）和胚胎因素（如染色体异常）。然而，目前临床上仅能对其中部分因素进行排查，通过抽取血液检测免疫性不孕七项以判断母体免疫学因素，通过高通量测序或基因芯片都清宫术后胚胎组织进行染色体异常的鉴定。例如：徐静等在“HIF-1α、VEGF在不明原因反复自然流产患者绒毛组织中的表达及与MVD的关系”，《陕西医学杂志》，2007年12月第36卷第12期，1620-1622,1627的研究中发现，HIF-1α（缺氧诱导因子-1α）、VEGF（血管内皮生长因子）的表达均与MVD（微血管密度）呈正相关，其结果表明：HIF-1α在不明原因反复自然流产患者绒毛组织表达水平下降，通过调节VEGF（血管内皮生长因子）基因的转录，进而影响滋养细胞的浸润和胎盘血管重铸，可能参与了不明原因反复自然流产的发生。白慧玲等在“绒毛中TRAIL及其受体的表达与不明原因反复自然流产的相关性的探讨”，《免疫学杂质》，2010年1月第26卷第1期，53-54中提到：在取不明原因反复流产患者绒毛组织进行免疫组化法检测TRAIL及其受体的表达时发现，绒毛组织中TRAIL及其受体DR4、DR5蛋白表达较强，而诱骗受体DcR1及DcR2蛋白与正常对照相比表达较少，P值均小于0.05，该结果表明，TRAIL及其受体可能是造成自然流产的机制之一。现有研究发现，由于胚胎因素（如胚胎植入能力不足）导致的不明原因流产更为复杂，因此，在不明原因反复流产病因检测过程中，目前暂未出现判断胚胎植入能力的检测方式。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法及其对应的试剂盒，提供了对绒毛组织中Siglecs家族Siglec1-3、Siglec5-12、Siglec13-15基因序列进行的PCR检测，用于测定绒毛组织中Siglecs家族的核酸水平。本专利技术的另一目的在于提供一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测和试剂盒不明原因反复自然流产中的应用，特别是因胚胎植入能力受到影响，而导致的胚胎黏附能力失败等造成的不明原因反复自然流产的检测。本专利技术通过下述技术方案实现：一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法，提供绒毛组织Siglecs家族中的Siglec1-3、Siglec5-12、Siglec14-15制备特异性引物，将该特异性引物包被于细胞培养板上，将待测样品与反应液混合后，加入包被后的细胞培养板中进行PCR定量检测。所述特异性引物包括：Siglec1：F-Primer：GGTACGCCTCCAAACCAAGA，R-Primer：GACGTTCTGCACCTCACAGA；Siglec2：F-Primer：ATACCTGCCCTGACATGCAC，R-Primer：GGGCCCCTTTCTACTTCGTT；Siglec3：F-Primer：CCTGTCAGGTGAAGTTCGCT，R-Primer：GAACCACTCCTGCTCTGGTC；Siglec5：F-Primer：CCAACAGCTCCCTGATCCTC，R-Primer：CTGCGGGCTTTCACTATTAAAAAGA；Siglec6：F-Primer：TATGGCAGACCACAGGACTT，R-Primer：TCAGGGCCTTTGTTAGCTGTT；Siglec7：F-Primer：AGATGATAACCCCCGACACC，R-Primer：AGCCTCAGACTCCTTTGCTG；Siglec8：F-Primer：ATGGCAACCCCCTGAAGAAG，R-Primer：TGCTGGAGGGGTTGTGATTC；Siglec9：F-Primer：GGGAAGGGGCCAATACAGAC，R-Primer：CACATTCACAGAGAGCCGGT；Siglec10：F-Primer：GCGGAATCAGAAAGCCACAC，R-Primer：AGCCGAAGTCCCAGTCCTAA；Siglec11：F-Primer：CCAGGGTCACCAGCATGAAT，R-Primer：TTGGGGATGGGGCTGAAATC；Siglec12：F-Primer：AACCTTGAGGAATGGCTCGG，R-Primer：GGGAGCCTAGAGGGTTCTGA；Siglec14：F-Primer：AGGGAAAAGCCCTCAATCCT，R-Primer：GTTCTGTCTTGAGCGGGAGG；Siglec15：F-Primer：CGTCTACCTGTTCCGCTTCC，R-Primer：ATGGATGTTGGTGGCTGAGG。所述待测样品是取受试者的绒毛组织，采用Trizol法或吸附柱法提取其中的总RNA的含量。所示吸附柱法中，采用吸附柱提取总RNA的含量并以取至少0.5μg进行逆转录，所得cDNA待检存放。检测时，RNA的用量至少为0.5μg/板。所述反应液为RT2 Real-TimeTM SYBR Green PCR Master Mix。所述细胞培养板为96孔板。一种对绒毛组织中Siglecs家族检测的试剂盒，包括包被了特异性引物的细胞培养板以及反应液，所述特异性引物由绒毛组织Siglecs家族中的Siglec1-3、Siglec5-12、Siglec13-15制备得到。一种根据所述对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法在检测不明原因反复自然流产中的应用。一种根据所述对绒毛组织中Siglecs家族检测的试剂盒在检测不明原因反复自然流产中的应用。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：（1）本专利技术提供了一种通过对绒毛组织Siglecs家族表达量的检测来鉴定不明原因反复自然流产的病因，该检测方法及其使用的试剂盒可用于反映胚胎的黏附及侵袭能力，弥补了临床上对胚胎植入能力检测的空白，为解释不明原因反复流产提供了新的思考和方向。（2）本专利技术采用PCR芯片检测绒毛组织中Siglecs家族核酸水平以反映胚胎黏附能力，为解释反复性不明原因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法，其特征在于：提供绒毛组织Siglecs家族中的Siglec1-3、Siglec5-12、Siglec14-15制备特异性引物，将该特异性引物包被于细胞培养板上，将待测样品与反应液混合后，加入包被后的细胞培养板中进行PCR定量检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法，其特征在于：提供绒毛组织Siglecs家族中的Siglec1-3、Siglec5-12、Siglec14-15制备特异性引物，将该特异性引物包被于细胞培养板上，将待测样品与反应液混合后，加入包被后的细胞培养板中进行PCR定量检测。


2.根据权利要求1所述的一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法，其特征在于：所述特异性引物包括：
Siglec1：F-Primer：GGTACGCCTCCAAACCAAGA，R-Primer：GACGTTCTGCACCTCACAGA；
Siglec2：F-Primer：ATACCTGCCCTGACATGCAC，R-Primer：GGGCCCCTTTCTACTTCGTT；
Siglec3：F-Primer：CCTGTCAGGTGAAGTTCGCT，R-Primer：GAACCACTCCTGCTCTGGTC；
Siglec5：F-Primer：CCAACAGCTCCCTGATCCTC，
R-Primer：CTGCGGGCTTTCACTATTAAAAAGA；
Siglec6：F-Primer：TATGGCAGACCACAGGACTT，R-Primer：TCAGGGCCTTTGTTAGCTGTT；
Siglec7：F-Primer：AGATGATAACCCCCGACACC，R-Primer：AGCCTCAGACTCCTTTGCTG；
Siglec8：F-Primer：ATGGCAACCCCCTGAAGAAG，R-Primer：TGCTGGAGGGGTTGTGATTC；
Siglec9：F-Primer：GGGAAGGGGCCAATACAGAC，R-Primer：CACATTCACAGAGAGCCGGT；
Siglec10：F-Primer：GCGGAATCAGAAAGCCACAC，R-Primer：AGCCGAAGTCCCAGTCCTAA；
Siglec11：F-Primer：CCAGGGTCACCAGCATGAAT，R-Primer：TTGGGGATG...

【专利技术属性】
技术研发人员：马芳，冯颖，张悦，张林，马黔红，林羿，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，
类型：发明
国别省市：四川;51