一种用于检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测ApoE和SLCO1B1基因多态性检测的试剂盒和方法。所述试剂盒包括ApoE 526C>T与ApoE A388T>C联合检测反应液和SLCO1B1 388A>G与SLCO1B1 521T>C联合检测反应液。实验证明，本发明专利技术所述联合检测反应液中的引物和探针特异性强，能实现直接采用唾液/血样进行PCR扩增分析，且可在一个反应管中实现两个SNP的分型检测，不仅明显提高了检测效率，同时也明显缩短了检测周期，并且具有敏感性好、特异性高、准确可靠、操作方便快捷等优点。

A kit and method for the detection of ApoE and SLCO1B1 gene polymorphism

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒和方法
本专利技术是涉及一种用于检测ApoE和SLCO1B1基因多态性检测的试剂盒和方法，属于体外基因检测

技术介绍
高血脂症是指血清中的胆固醇和甘油三酯升高的一种疾病。血脂主要由四种物质组成：总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白。总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白这三项中只要任何一项超标就属于高血脂。血中的胆固醇又与动脉弹性硬蛋白结合，血管变硬，变脆，失去原本的弹力活性，导致重要器官动脉供血不足，从而引发冠心病、脑中风、肢体坏死等。不仅如此，高血脂还可引发诸如高血压、糖尿病、老年痴呆、肝硬化等多种疾病，甚至诱发癌症。现有研究表明：ApoE和SLCO1B1基因均可通过多种途径参与机体的脂质代谢调节，是影响机体血脂水平的重要内在因素；其中，人类ApoE基因定位于19号染色体上，而第19号染色体是载脂蛋白E编码基因，该段编码基因的第4外显子参与编码第112位氨基酸和第158位氨基酸的密码子，而这段密码子具有多态性，可编码出3种常见的等位基因，即：ε2，ε3，ε4，又可分为6种常见的基因型，它们分别是ε2/2、ε2/3、ε3/3、ε2/4、ε3/4、ε4/4，因此，人类ApoE基因具有多态性，主要有两种单核苷酸多态性526C>T和388T>C，可以形成3种单倍型ApoE3(388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4(388C-526C)；ApoE多态性对血脂在预防、诊断及治疗上具有重要的临床应用价值；但ApoE基因发生突变，可以形成不同的基因多态性，以致影响血脂的代谢和利用，从而影响高脂血症、动脉粥样硬化和心脑血管疾病的发病率，例如：ApoE4携带者患冠心病的风险要高40％，并且他汀类药物对ApoE4携带者疗效往往不佳或无疗效，而对ApoE2携带者的降脂作用最强；人类SLCO1B1基因定位于12号染色体，编码有机阴离子转运多肽OATP1B1。OATP1B1为跨膜转运蛋白，具有介导肝细胞膜转运内、外源性物质并对其进行代谢和消除的生理功能。研究表明：SLCO1B1基因具有遗传多态性，其中388A>G、521T>C是两种常见的单核苷酸多态性，可以形成4种单倍型：SLCO1B1*1a(388A-521T)、SLCO1B1*1b(388G-521T)、SLCO1B1*5(388A-521C)和SLCO1B1*15(388G-521C)；突变型SLCO1B1基因引起编码的OATP1B1转运蛋白活力减弱，表现为肝脏摄取药物能力降低，引起血药浓度上升，会增加横纹肌溶解症或肌病的发生风险。另外，大量研究已经证实，调脂药物不仅降低血脂，同时也可明显减少冠心病、心肌梗塞、脑中风的发生率、致残率和死亡率。在降血脂药物中，当属他汀类的临床研究和使用最为广泛。他汀类药物是通过竞争性抑制HMG-CoA(三羟基三甲基戊二酰辅酶A)还原酶从而减少胆固醇的生物合成，进而达到降低血脂的作用，但大剂量长期使用他汀类药物除了经济上的负担，还有非常严重的安全隐患，下表是SLCO1B1*1b(388A、388G)、SLCO1B1*5(521T、521C)和载脂蛋白ApoE2(526C、526T)、ApoE4(388T、388C)基因型检测对应风险提示和药效提示：也就是说，在服用他汀类药物前针对ApoE和SLCO1B1基因多态性进行检测可科学、有效评估用药后疗效。目前针对基因多态性的检测方法主要有：PCR-RFLP法、PCR-芯片杂交法、PCR-测序法和Taqman-qPCR法，其中：PCR-RFLP法主要依赖于靶标的限制性酶切位点，实验难度增大，同时后续的电泳分析容易引起实验室污染，无法大规模临床应用；PCR-芯片杂交法是将PCR技术与基因芯片技术结合使用的，同样有步骤复杂和实验室交叉污染的风险，检测灵敏度低并且特异性差，容易出现假阳性结果；PCR-测序法是基因检测的金标准，但是其操作流程过长，成本过高，同时仪器昂贵也难以适合在医院大规模应用；Taqman-qPCR法检测灵敏度高，但往往由于位点序列原因，导致检测特异性不高，并且其通过Genotyping方法进行分型，对样本数量和多态性分布有一定要求，不适合检测突变频率过低的位点和少量样本。因此，本领域急需一种能快速、准确、敏感性好、特异性高、操作方便的检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的技术。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题和需求，本专利技术的目的是提供一种能快速、准确、敏感性好、特异性高、操作方便的用于检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒和方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种用于检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒，包括ApoE526C>T与ApoEA388T>C联合检测反应液和SLCO1B1388A>G与SLCO1B1521T>C联合检测反应液；所述ApoE526C>T与ApoEA388T>C联合检测反应液包括针对ApoE526C>T位点的SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示序列的引物组及SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示序列的探针组，针对ApoEA388T>C位点的SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示序列的引物组及SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示序列的探针组；所述SLCO1B1388A>G与SLCO1B1521T>C联合检测反应液包括针对SLCO1B1388A>G位点的SEQIDNO.9和SEQIDNO.10所示序列的引物组及SEQIDNO.11和SEQIDNO.12所示序列的探针组，针对SLCO1B1521T>C位点的SEQIDNO.13和SEQIDNO.14所示序列的引物组及SEQIDNO.15和SEQIDNO.16所示序列的探针组。进一步，所有探针的5'端标记有报告荧光染料及3'端标记有淬灭荧光染料。进一步，所有探针的5'端标记有报告荧光染料FAM、VIC、ROX、CY5中的任意一种，所有探针的3'端均标记有淬灭荧光染料BHQ。进一步，针对ApoE526C>T位点的野生型探针的5’端标记有报告荧光染料FAM，针对ApoE526C>T位点的突变型探针的5’端标记有报告荧光染料VIC。进一步，针对ApoEA388T>C位点的野生型探针的5’端标记有报告荧光染料ROX，针对ApoEA388T>C位点的突变型探针的5’端标记有报告荧光染料CY5。进一步，针对SLCO1B1388A>G位点的野生型探针的5’端标记有报告荧光染料FAM，针对SLCO1B1388A>G位点的突变型探针的5’端标记有报告荧光染料VIC。进一步，针对SLCO1B1521T>C位点的野生型探针的5’端标记有报告荧光染料ROX，针对SLCO1B1521T>C位点的突变型探针的5’端标记有报告荧光染料CY5。进一步，所述的Ap本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒，其特征在于：包括ApoE 526C>T与ApoE A388T>C联合检测反应液和SLCO1B1 388A>G与SLCO1B1 521T>C联合检测反应液；所述ApoE 526C>T与ApoE A388T>C联合检测反应液包括针对ApoE 526C>T位点的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列的引物组及SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示序列的探针组，针对ApoE A388T>C位点的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示序列的引物组及SEQ ID NO.7和SEQID NO.8所示序列的探针组；所述SLCO1B1 388A>G与SLCO1B1 521T>C联合检测反应液包括针对SLCO1B1 388A>G位点的SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示序列的引物组及SEQ IDNO.11和SEQ ID NO.12所示序列的探针组，针对SLCO1B1 521T>C位点的SEQ ID NO.13和SEQID NO.14所示序列的引物组及SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示序列的探针组。/n...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒，其特征在于：包括ApoE526C>T与ApoEA388T>C联合检测反应液和SLCO1B1388A>G与SLCO1B1521T>C联合检测反应液；所述ApoE526C>T与ApoEA388T>C联合检测反应液包括针对ApoE526C>T位点的SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示序列的引物组及SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示序列的探针组，针对ApoEA388T>C位点的SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示序列的引物组及SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示序列的探针组；所述SLCO1B1388A>G与SLCO1B1521T>C联合检测反应液包括针对SLCO1B1388A>G位点的SEQIDNO.9和SEQIDNO.10所示序列的引物组及SEQIDNO.11和SEQIDNO.12所示序列的探针组，针对SLCO1B1521T>C位点的SEQIDNO.13和SEQIDNO.14所示序列的引物组及SEQIDNO.15和SEQIDNO.16所示序列的探针组。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所有探针的5'端标记有报告荧光染料FAM、VIC、ROX、CY5中的任意一种，所有探针的3'端均标记有淬灭荧光染料BHQ。


3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：针对ApoE526C>T位点的野生型探针的5’端标记有报告荧光染料FAM，针对ApoE526C>T位点的突变型探针的5’端标记有报告荧光染料VIC，针对ApoEA388T>C位点的野生型探针的5’端标记有报告荧光染料ROX，针对ApoEA388T>C位点的突变型探针的5’端标记有报告荧光染料CY5。


4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：针对SLCO1B1388A>G位点的野生型探针的5’端标记有报告荧光染料FAM，针对SLCO1B1388A>G位点的突变型探针的5’端标记有报告荧光染料VIC，针对SLCO1B1521T>C位点的野生型探针的5’端标记有报告荧光染料ROX，针对SLCO1B1521T>C位点的突变型探针的5...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱田，李春雨，章泽林，
申请(专利权)人：上海未凡生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31