帕金森病生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及帕金森病生物标志物及其应用。本发明专利技术提出了一种用于帕金森病的生物标志物，所述生物标志物为环状RNA，所述环状RNA为circ‑AMOTL1，所述circ‑AMOTL1为含有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明专利技术提出了用于早期诊断帕金森病或相关疾病的诊断以及预测患病风险的方法，可以解决现有帕金森病诊断方法不能做到早期预警、不能预测帕金森病等缺点。

Biomarkers of Parkinson's disease and their application

【技术实现步骤摘要】
帕金森病生物标志物及其应用
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种帕金森病生物标志物及其应用。
技术介绍
帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)是一种常见的中枢神经系统变性疾病，其发病机制主要为黑质纹状体的多巴胺能神经元逐渐丢失，从而导致静止性震颤、运动迟缓、肌强直、姿势步态障碍等症状，严重影响患者健康和生活质量，给患者及其家庭、社会带来沉着的负担。目前PD临床诊断主要依靠病史、症状、体征、影像学的综合评估，但这些方法有主观性大、可靠性低、成本高等缺点。此外，早期干预能显著提高PD患者的生活质量和延长生存时间，而当患者已经表现出症状、体征时，多巴胺能神经元已经大部分丢失，错过了早期干预时机。因此，对于帕金森病的早期诊断以及发现仍有待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提供一种用于帕金森病的生物标志物。该生物标志物的表达变化早于神经元丢失，可用于帕金森病的早期预测。为此，在本专利技术的第一个方面，本专利技术提出了一种用于帕金森病的生物标志物，所述生物标志物为环状RNA，所述环状RNA为circ-AMOTL1，所述circ-AMOTL1为含有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。根据本专利技术的一种用于帕金森病的生物标志物，通过检测环状RNAcirc-AMOTL1可知，其在帕金森病患者血液中表达升高，在MPTP诱导的帕金森病动物模型中血液及中脑组织中表达也升高，并且其表达变化早于神经元丢失，可用于帕金森病的早期预测。具有客观、灵敏、简易、费用低等优点，且可以在早期提示帕金森病的风险。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种诊断对象是否患有帕金森病或相关疾病或者预测对象是否患有帕金森病或相关疾病的风险的方法，所述方法用于非疾病的诊断目的，包括：(1)从所述对象中收集外周血样本；(2)提取所述外周血样本的RNA、逆转录扩增所述RNA，然后荧光定量PCR检测circ-AMOTL1的表达量。根据本专利技术的方法，利用检测对象中的生物标志物的表达量来确定对象是否患有帕金森或相关疾病，或者预测其患有帕金森病或者相关疾病的风险。在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了一种试剂盒，包括用于检测上述的生物标志物的试剂。在本专利技术的第四方面，本专利技术提出了上述生物标志物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于诊断对象是否患有帕金森病或相关疾病或者预测对象是否患有帕金森病或相关疾病的风险。根据本专利技术的实施例，所述诊断或预测包括以下步骤：(1)从所述对象中收集外周血样本；(2)提取所述外周血样本的RNA、逆转录扩增所述RNA，然后荧光定量PCR检测circ-AMOTL1的表达量。利用检测对象中的生物标志物的表达量来确定对象是否患有帕金森或相关疾病，或者预测其患有帕金森病或者相关疾病的风险。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明图1为本专利技术circ-AMOTL1在PD患者血液中的表达；图2为本专利技术circ-AMOTL1在PD小鼠血液中的表达；图3为本专利技术circ-AMOTL1在PD小鼠中脑组织中的表达；图4为本专利技术circ-AMOTL1在PD小鼠中脑TH阳性神经元数目。具体实施方式以下通过特定的具体实例说明本专利技术的技术方案。应理解，本专利技术提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本专利技术可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更
技术实现思路
的情况下，当亦视为本专利技术可实施的范畴。为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本专利技术的示例性实施例。虽然显示了本专利技术的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本专利技术，并且能够将本专利技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。针对现有帕金森病诊断方法不能做到早期预警、不能预测帕金森病发病以及发展的趋势等缺点，本专利技术提出一种用于评估帕金森病风险或者早期诊断帕金森病的生物标志物，以及帕金森病的诊断和患病风险评估方法，能预测帕金森病发病以及发展的趋势，应用于疾病病理分型。生物标志物根据本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种生物标志物，所述生物标志物为环状RNA，所述环状RNA为circ-AMOTL1，所述circ-AMOTL1为含有如下所示的核苷酸序列：根据本专利技术的实施例，生物标志物质的水平通过其表达水平指示。其中，检测环状RNAcirc-AMOTL1表达水平可以包括RT-PCR、荧光定量PCR、原位杂交或芯片等检测方法。下面参考具体实施例，对本专利技术进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本专利技术。实施例1人外周血circ-AMOTL1表达检测1、人血液样本收集收集PD(帕金森病)患者外周血样本10例，正常人外周血样本10例。血液样本RNA提取、逆转录和荧光定量PCR(1)RNA提取：按照说明书步骤，利用TAKARA公司的血液RNA提取试剂盒提取血液样品RNA。从最后得到的RNA中取2μl进行定量。(2)逆转录：按照说明书步骤，利用MedChemExpress公司的逆转录试剂盒进行：反应体系：2×SuperRTMix10μLTotalRNA1μgRNase-FreeH2OTo20μL反应条件：第一步：25℃10分钟；第二步：42℃45分钟；第三步：85℃2分钟。(3)荧光定量PCR：按照说明书步骤，利用Promega公司的SYBRGreen法荧光定量PCR试剂盒进行：反应体系：Humancirc-AMOTL1ForwardPrimer：AGTATGGGGTAACGAGTTGAAGAT(SEQIDNO:2)。Humancirc-AMOTL1ReversePrimer：AGTTGTTCCTGGATCAGCCG(SEQIDNO:3)。反应条件：第一步：95℃2分钟；第二步：95℃15秒，60℃1分钟，40个循环；第三步：60℃-95℃熔解曲线分析确定目的条带；第四步：ΔΔCT法进行相对定量。3、结果如图1所示，与正常人血液相比，circ-AMOTL1在PD患者血液中的表达升高，差异具有统计学意义(p<0.05)。实施例2小鼠外周血Circ-AMOTL1表达检测及多巴胺能神经元计数1、模型建立本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于帕金森病的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为环状RNA，所述环状RNA为circ-AMOTL1，所述circ-AMOTL1为含有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于帕金森病的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为环状RNA，所述环状RNA为circ-AMOTL1，所述circ-AMOTL1为含有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。


2.一种诊断对象是否患有帕金森病或相关疾病或者预测对象是否患有帕金森病或相关疾病的风险的方法，其特征在于，所述方法用于非疾病的诊断目的，包括：
(1)从所述对象中收集外周血样本；
(2)提取所述外周血样本的RNA、逆转录扩增所述RNA，然后荧光定量PCR检测circ-AMOTL1的表达量。

【专利技术属性】
技术研发人员：王翀，李娟，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35