可排除SMN2干扰的SMN1基因检测引物组、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了可排除SMN2干扰的SMA基因检测引物组、试剂盒及检测方法，将SMN1和SMN2两个差异碱基分别设计在FIP和BIP引物的3’端，并在FIP和BIP引物的3’端倒数第二碱基处设计辅助突变碱基，增强了LAMP扩增的特异性。通过BIP‑W排除了SMN2对扩增的影响，FIP‑W和FIP‑M区分SMN1是否发生突变，从而准确判断待测样品的SMN1基因的基因型。本发明专利技术的检测方法采用环介导等温扩增技术，具有极高的灵敏度，因此，仅需患者少量口腔拭子经过煮沸释放DNA即可作为模板进行扩增，不需采集血液标本。

Primer set, kit and detection method of SMN1 gene detection which can eliminate SMN2 interference

【技术实现步骤摘要】
可排除SMN2干扰的SMN1基因检测引物组、试剂盒及检测方法
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种可排除SMN2干扰的SMA基因检测引物组、试剂盒及检测方法。
技术介绍
脊髓型肌萎缩症(Spinalmuscularatrophy,SMA)是一类相对常见的常染色体隐性遗传病，以脊髓前角运动神经元退化变性和丢失导致的肌无力和肌萎缩为主要临床特征。SMA发病率为1/10000～1/6000，携带率为1/50～1/40。SMA的发病原因主要是由于位于5q13.2上的运动神经元存活基因1(survivalmotorneurongene1，SMN1)上的7号外显子第6个碱基由C突变为T，导致SMN蛋白功能缺陷所致的遗传性神经肌肉病。SMN是一个广泛表达的管家蛋白，可作为亚单位与Sm蛋白结合，以SMN复合体形式募集Sm核蛋白和小核核糖核酸(snRNAs)组装成核糖核蛋白复合物(snRNPs)。此外，SMN2作为脊髓性肌萎缩症(SMA)的修饰基因，存在于每个人的体内，且SMN2与SMN1的基因序列仅有个别碱基的差异(如图2)，因此，在检测过程中SMN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.可排除SMN2干扰的SMN1基因检测的引物组，其特征在于，该引物组包括以下7条引物；/nF3：5’-GCTATCTATGTCTATATAGCTAT-3’；/nB3：5’-GTTTTGGCATCAAAATTCTTTAAT-3’；/nFIP-W:5’-TGCTGGCAGACTTACTCCTTAACTTTATTTTCCTTACAGGGTT

【技术特征摘要】
1.可排除SMN2干扰的SMN1基因检测的引物组，其特征在于，该引物组包括以下7条引物；
F3：5’-GCTATCTATGTCTATATAGCTAT-3’；
B3：5’-GTTTTGGCATCAAAATTCTTTAAT-3’；
FIP-W:5’-TGCTGGCAGACTTACTCCTTAACTTTATTTTCCTTACAGGGTTVC-3’；
FIP-M:5’-TGCTGGCAGACTTACTCCTTAACTTTATTTTCCTTACAGGGTTVT-3’；
BIP-W:5’-TGAAAGTGAATCTTACTTTTGTAAAAGTTTTACATTAACCTTTCAACTTVT-3’；
LF：5’-GTGAGCACCTTCCTTCTTTTT-3’；
LB：5’-GTGGAAAACAAATGTTTTTGAAC-3’。


2.可排除SMN2干扰的SMN1基因检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1所述的引物组。


3.如权利要求2所述的可排除SMN2干扰的SMN1基因检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括BstDNAPolymerase、dNTP、缓冲液、指示剂和添加剂；
所述的缓冲液包括Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4和Tween-20；
所述的指示剂为SYBRGreenI溶液或Calcein溶液和MnCl2溶液的混合液；
所述的添加剂包括海藻糖和BSA。


4.如权利要求3所述的可排除SMN2干扰的SMN1基因检测的试剂盒，其特征在于，所述引物F3、B3浓度相同，为0.8～1.6μmol/L，LF、LB浓度相同，为1.6～3.2μmol/L，FIP-...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫亚平，张鑫，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61