杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术提供一种杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：S1.混合对照品溶液的制备：分别精密称取苦参碱、落新妇苷、黄柏碱、盐酸小檗碱、蛇床子素、苍术素对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；S2.杀菌止痒洗剂样品溶液的制备；S3.单味对照药材溶液的制备；S3.测定。该指纹图谱标定了16个共有峰，并确定了其归属于处方中的5种药材，建立的指纹图谱技术含量高，避免了现有质量控制方法的单一性和片面性。为杀菌止痒洗剂的生产提供了有效的质量控制依据，并且为其药效物质基础同药理作用的相关性研究奠定了基础。

Establishment of fingerprint of germicidal and antipruritic Lotion

【技术实现步骤摘要】
杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法
本专利技术涉及医药检测领域，具体涉及一种杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法。
技术介绍
杀菌止痒洗剂是贵州长生药业独家生产，由黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、冰片、苍术6味中药制备而成，具有清热解毒、杀虫止痒的功效，适用于改善滴虫性、霉菌性、非特异性阴道炎及外阴瘙痒症所致的带下量多、阴痒等症。现有研究如《杀菌止痒洗剂的HPL指纹图谱研究》中建立了一种杀菌止痒洗剂的C指纹图谱技术，但仅对苦参碱、槐果碱两种苦参成分特征峰进行了考察，并未对黄柏、蛇床子、土茯苓、苍术等其他药材的特征峰进行归属。杀菌止痒洗剂成分较为复杂，仅以苦参成分作为质量控制指标显然是不全面的，具有一定的局限性。因此，开发建立一种简便易行，准确性高，重复性良好且能尽可能多地反映复方制剂所含多成分的指纹图谱检测方法对于杀菌止痒洗剂的质量控制和评价非常必要。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的是，针对上述问题，提供一种杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，标定了16个共有峰，并确定了其归属于处方中的5种药材，建立的特征图谱技术含量高，避免了现有质量控制方法的单一性和片面性。为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：S1.混合对照品溶液的制备：分别精密称取苦参碱、落新妇苷、黄柏碱、盐酸小檗碱、蛇床子素、苍术素对照品，加甲醇制成混合对照品溶液。S2.杀菌止痒洗剂样品溶液的制备：精确称量杀菌止痒洗剂，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，得供试品溶液。S3.单味对照药材溶液的制备：将黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术药材粉碎成粉末，分别取各单味药材粉末，精密称定，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，即分别得黄柏对照药材溶液、苦参对照药材溶液、蛇床子对照药材溶液、土茯对照药材溶液苓、苍术对照药材溶液。S4.测定：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得杀菌止痒洗剂的指纹图谱。优选的，所述检测条件包括：色谱柱为WatersXBridgeC18色谱柱；以体积分数0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流动相流速为0.8～1.2mL/min；柱温为20～35℃，检测波长为285nm，进样量为5～15μl。优选的，流动相流速为0.8mL/min；柱温为25℃，进样量为10μl。优选的，所述梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：0min，流动相A85％，流动相B15％；15min，流动相A64％，流动相B36％；22min，流动相A60％，流动相B40％；45min，流动相A50％，流动相B50％；50min，流动相A35％，流动相B65％；55min，流动相A24％，流动相B76％；70min，流动相A18％，流动相B82％。优选的，步骤S2中，精确称量杀菌止痒洗剂，加无水甲醇，超声提取30min，放冷，减压抽滤，取上清液13000r/min离心10min，得供试品溶液。优选的，步骤S3中，将黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术药材粉碎成粉末，分别取各单味药材粉末，精密称定，加无水甲醇，超声提取30min，放冷，减压抽滤，取上清液13000r/min离心10min，分别得各单味对照药材溶液。优选的，对指纹图谱的共有峰进行药材归属，确定指纹图谱的16个共有峰中，第1、10、11、15号峰属于蛇床子药材，第4、5、8号峰属于土茯苓药材，第7、9、13、14号峰属于黄柏药材，第3、6、12号峰属于苦参药材，第2、16号峰属于苍术药材。优选的，对指纹图谱的共有峰进行活性成分归属，其中3号峰为苦参碱，4号峰为落新妇苷，7号峰为黄柏碱，9号峰为盐酸小檗碱，10号峰为蛇床子素，16号峰为苍术素。由于采用上述技术方案，本专利技术具有以下有益效果：1.本专利技术所建立的杀菌止痒洗剂指纹图谱，标定了16个共有峰，并确定了其归属于处方中的5种药材，建立的特征图谱技术含量高，避免了现有质量控制方法的单一性和片面性。为杀菌止痒洗剂的生产提供了有效的质量控制依据，并且为其药效物质基础同药理作用的相关性研究奠定了基础。2.本专利技术所建立的杀菌止痒洗剂指纹图谱，具有16个共有峰，且对其进行了指认和归属分析，各特征峰分离效果较好，能够较全面的反映出产品的质量信息，有利于全面监控产品质量，及鉴别产品的真伪。对16个峰中的6个峰的所对应的活性成分进行了确认，有效的将指纹峰与治疗功效关联起来，可进一步控制好杀菌止痒洗剂的生产质量。指纹图谱的16个共有峰中，第1、10、11、15号峰属于蛇床子药材，其中10号峰为蛇床子素；第4、5、8号峰属于土茯苓药材，其中4号峰为落新妇苷；第7、9、13、14号峰属于黄柏药材，其中7号峰为黄柏碱，9号峰为盐酸小檗碱；第3、6、12号峰属于苦参药材，其中3号峰为苦参碱；第2、16号峰属于苍术药材，其中16号峰为苍术素。可见，杀菌止痒洗剂组成药材的主要成分(除冰片成分无紫外吸收外)均在本技术得到的指纹图谱中得到了整体表征。3.本专利技术杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立，采用高效液相色谱图的方法对杀菌止痒洗剂进行定性和定量的检测，根据杀菌止痒洗剂的有效成分的特性，确定了最优的色谱条件，得到了准确的指纹图谱。其中，流动相选择0.1％磷酸水、乙腈，并按程序连续改变流动相中各相之间的比例进行梯度洗脱，可使各成分的色谱峰之间的分离度好，干扰小，峰形好，基线平稳，且较低浓度的酸溶液有利于保护色谱柱。说明书附图图1为本专利技术实验例比较不同波长的色谱图；图中，1：220nm；2：240nm；3：260nm；4：285nm；5：290nm；6：300nm；7：320nm；8：340nm；图2为本专利技术实验例比较不同色谱柱的色谱图；图中，1：WatersXBridgeC18；2：ComatexC18－AA；3：ZORBAXEclipsePlus；4：ZorbaxSB；5：Phenomenexluna；图3为本专利技术实验例比较不同流动相的色谱图；图中，1：纯水-乙腈；2：0.1％磷酸水-乙腈；3：0.05％甲酸水-乙腈；4：0.04％三乙胺缓冲液－乙腈；图4为本专利技术实验例比较不同柱温的色谱图；图中，1：35℃；2：30℃；3：25℃；图5为本专利技术实验例比较不同流速的色谱图；图中，1：1.2mL/min；2：1.0mL/min；3：0.8mL/min；图6为本专利技术实验例比较不同提取溶剂的色谱图；图中，1：30％甲醇；2：50％甲醇；3：80％甲醇；4：无水甲醇；图7为本专利技术实验例比较不同提取方法的色谱图；图中，1：加热回流；2：超声；图8为本专利技术实验例比较不同提取时间的色谱图；图中，1：60min；2：45min；3：30min；4：15mi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1.混合对照品溶液的制备：/n分别精密称取苦参碱、落新妇苷、黄柏碱、盐酸小檗碱、蛇床子素、苍术素对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；/nS2.杀菌止痒洗剂样品溶液的制备：/n精确称量杀菌止痒洗剂，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，得供试品溶液；/nS3.单味对照药材溶液的制备：/n将黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术药材粉碎成粉末，分别取各单味药材粉末，精密称定，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，即分别得黄柏对照药材溶液、苦参对照药材溶液、蛇床子对照药材溶液、土茯对照药材溶液苓、苍术对照药材溶液；/nS4.测定：/n分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液和各单味对照药材溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得杀菌止痒洗剂的指纹图谱。/n

【技术特征摘要】
1.杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.混合对照品溶液的制备：
分别精密称取苦参碱、落新妇苷、黄柏碱、盐酸小檗碱、蛇床子素、苍术素对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；
S2.杀菌止痒洗剂样品溶液的制备：
精确称量杀菌止痒洗剂，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，得供试品溶液；
S3.单味对照药材溶液的制备：
将黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术药材粉碎成粉末，分别取各单味药材粉末，精密称定，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，即分别得黄柏对照药材溶液、苦参对照药材溶液、蛇床子对照药材溶液、土茯对照药材溶液苓、苍术对照药材溶液；
S4.测定：
分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液和各单味对照药材溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得杀菌止痒洗剂的指纹图谱。


2.根据权利要求1所述的杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述检测条件包括：色谱柱为WatersXBridgeC18色谱柱；以体积分数0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流动相流速为0.8～1.2mL/min；柱温为20～35℃，检测波长为285nm，进样量为5～15μl。


3.根据权利要求2所述的杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，流动相流速为0.8mL/min；柱温为25℃，进样量为10μl。


4.根据权利要求1所述的杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：
0min，流动相A85％，流动相B...

【专利技术属性】
技术研发人员：王冬梅，姜楠，赵磊，程世娟，高燕，
申请(专利权)人：贵州长生药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52