补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法技术

本发明专利技术公开了补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，它包括步骤1、补肾助孕颗粒供试品溶液的制备；步骤2、混合对照品溶液的制备：步骤3、分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；步骤4，补肾助孕颗粒指纹图谱仪器导出，导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择不同批次补肾助孕颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成补肾助孕颗粒的对照指纹图谱；计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积；将补肾助孕颗粒指纹图谱和混合标准品图谱进行比对，指认主要成分峰。本发明专利技术所提供的补肾助孕颗粒指纹图谱，能全面，客观地表征补肾助孕颗粒的质量。且检测方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。

The method of fingerprint detection of Bushen Zhuyun granules

【技术实现步骤摘要】
补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法
本专利技术涉及一种中药的检测方法，具体涉及补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法。
技术介绍
补肾助孕颗粒处方为江苏省中医院国医大师夏桂成教授的经验方，由莵丝子、炒白芍、酒萸肉、丹参、山药、醋柴胡、鹿角片、紫石英8味药组成，具有使“阳长至重”，舒畅心肝气机，安定心肝魂魄的功效，临床上用于治疗肾虚偏阳、夹有肝郁型黄体功能不全性不孕症，应用多年，有长期临床经验，且经过多个药理试验揭示疗效。但目前尚未无制剂批准文号，因此，对其进行医疗机构制剂及新药研究的药学研究，包括制备工艺及质量标准、稳定性试验等十分必要。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的质量分析方法，能够较好地反映出中药制剂的整体质量，广泛应用于中药制剂质量控制。为了更好地控制补肾助孕颗粒的制剂质量，本专利技术采用HPLC法建立特征图谱，并同时建立了外标法测定没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、当药苷、马钱苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸、丹酚酸B的含量。为补肾助孕颗粒的成分鉴别、质量评价以及质量标准的制定具有重要的意义。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是解决现有技术的不足，提供一种补肾助孕颗粒的指纹图谱检测方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价补肾助孕颗粒的质量，对控制补肾助孕颗粒的质量和保证临床疗效具有重要意义。技术方案：为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：步骤1，补肾助孕颗粒供试品溶液的制备：分别精密称取不同批次的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得；步骤2，混合对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸、丹酚酸B对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；步骤3，分别精密吸取步骤1供试品溶液和步骤2混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪分析，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的补肾助孕颗粒供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次补肾助孕颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成补肾助孕颗粒的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。一种补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：步骤1，补肾助孕颗粒供试品溶液的制备：分别精密称取不同批次的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得；步骤2，混合对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸、丹酚酸B对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；步骤3，缺失药材的阴性样品溶液的制备分别取缺失酒萸肉、菟丝子、丹参、炒白芍或酒萸肉-炒白芍药材的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得缺失各药材的阴性样品溶液；步骤4，分别精密吸取步骤1供试品溶液，步骤2混合对照品溶液和步骤3缺失药材的阴性样品溶液，注入高效液相色谱仪分析，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的各批次的补肾助孕颗粒供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择各批次补肾助孕颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成补肾助孕颗粒的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分；并将对照指纹图谱与缺失药材的阴性样品溶液的色谱图进行比较，指认出对照指纹图谱中共有峰与药材的相关性。一种补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：步骤1，补肾助孕颗粒供试品溶液的制备：分别精密称取不同批次的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得；步骤2，混合对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸、丹酚酸B对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；步骤3，线性回归方程的建立分别精密吸取步骤2的混合对照品溶液，分别稀释成1、2、5、10、20、40倍的混合对照品溶液，精密吸取各混合对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪分析，以测得的响应信号峰和被测成分的进样浓度用最小二乘法进行线性回归，得到各成分的线性回归方程以及线性范围；步骤4，供试品溶液的检测精密吸取步骤1制备得到的供试品溶液10μL，注入高效液相色谱检测，通过步骤(3)获得的线性回归方程，检测供试品溶液中各化学成分的含量。作为优选方案，以上所述的补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，以上步骤1补肾助孕颗粒供试品溶液制备方法为：取补肾助孕颗粒，研细，精密称定0.8g，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度70％甲醇水10mL，密塞，称量，200W,40kHz超声处理30min，放置至室温，再称量，用体积浓度70％甲醇水补足减失的量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。作为优选方案，以上所述的补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，步骤2混合对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸和丹酚酸B对照品，加甲醇制成浓度分别为0.540mg·mL-1、1.600mg·mL-1、0.637mg·mL-1、0.225mg·mL-1、0.623mg·mL-1、1.053mg·mL-1、0.638mg·mL-1、0.480mg·mL-1、0.365mg·mL-1、0.877mg·mL-1的混合对照品溶液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。作为优选方案，以上所述的补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，高效液相色谱仪分析的色谱条件为：色谱柱为：HederaODS-2C18色谱柱，规格250mm×4.6mm，5μm，以乙腈为流动相A，以0.2％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0mL·min-1，检测波长237nm，柱温30℃，进样量10μL。梯度洗脱程序为：0～15min，5％A→7％A；15～30min，7％A→9.5％A；30～31min，9.5％A→11％A；31～55min，11％A；55～65min，11％A→20％A；65～95min，20％A→22％A；95～100min，22％A→5％A。本专利技术的补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，指纹谱图中共有峰23个。其中2号峰为没食子酸、3号峰为5-羟甲基糠醛、6号峰为莫诺苷、8号峰为当药苷、9号峰为马钱苷、12号峰为芍药苷、16号峰为金丝桃苷、19号峰为紫云英苷、21号峰为迷迭香酸、23号峰为丹酚酸B。本专利技术所述的补肾助孕颗粒指纹图谱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1，补肾助孕颗粒供试品溶液的制备：/n分别精密称取不同批次的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得；/n步骤2，混合对照品溶液的制备：/n分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸、丹酚酸B对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；/n步骤3，分别精密吸取步骤1供试品溶液和步骤2混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪分析，记录色谱图；/n步骤4，将步骤3中获得的补肾助孕颗粒供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次补肾助孕颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成补肾助孕颗粒的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。/n

【技术特征摘要】
1.一种补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，补肾助孕颗粒供试品溶液的制备：
分别精密称取不同批次的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得；
步骤2，混合对照品溶液的制备：
分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸、丹酚酸B对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；
步骤3，分别精密吸取步骤1供试品溶液和步骤2混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪分析，记录色谱图；
步骤4，将步骤3中获得的补肾助孕颗粒供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次补肾助孕颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成补肾助孕颗粒的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。


2.一种补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，补肾助孕颗粒供试品溶液的制备：
分别精密称取不同批次的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得；
步骤2，混合对照品溶液的制备：
分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸、丹酚酸B对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；
步骤3，缺失药材的阴性样品溶液的制备
分别取缺失酒萸肉、菟丝子、丹参、炒白芍或酒萸肉-炒白芍药材的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得缺失各药材的阴性样品溶液；
步骤4，分别精密吸取步骤1供试品溶液，步骤2混合对照品溶液和步骤3缺失药材的阴性样品溶液，注入高效液相色谱仪分析，记录色谱图；
步骤4，将步骤3中获得的各批次的补肾助孕颗粒供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择各批次补肾助孕颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成补肾助孕颗粒的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分；
并将对照指纹图谱与缺失药材的阴性样品溶液的色谱图进行比较，指认出对照指纹图谱中共有峰与药材的相关性。


3.一种补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，补肾助孕颗粒供试品溶液的制备：
分别精密称取不同批次的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得；
步骤2，混合对照品溶液的制备：
分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸、丹酚酸B对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；
步骤3，线性回归方程的建立
分别精密吸取步骤2的混合对照品溶液，分别稀释成1、2、5、10、20、40倍的混合对照品溶液，精密吸取各混合对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪分析，以测得的响应信号峰和被测成分的进样浓度用最小二乘法进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志辉，周惠芳，范智毅，周洪亮，姜誉弘，
申请(专利权)人：江苏省中医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32