一种蔗糖磷酸化酶在制备甘油葡萄糖苷中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种蔗糖磷酸化酶在制备甘油葡萄糖苷中的应用，将SEQ ID NO.1所示的蔗糖磷酸化酶基因lrsp克隆至枯草芽孢杆菌表达质粒上，构建重组质粒pP43‑lrsp，并将其转化到表达菌株枯草芽孢杆菌WB800中，构建重组菌枯草芽孢杆菌WB800(pP43‑lrsp)。该重组菌经过发酵，分泌型表达蔗糖磷酸化酶。将发酵液经过稀释后直接用于制备2‑αGG，其以蔗糖作为糖基供体，以丙三醇作为糖基化受体，具有催化效率高，生产速率快的特点，30‑40h内催化得到87‑110g/L的2‑αGG，平均生产强度大于2.1g·L

The application of sucrose phosphorylase in the preparation of glycerol glucoside

【技术实现步骤摘要】
一种蔗糖磷酸化酶在制备甘油葡萄糖苷中的应用(一)
本专利技术涉及一种甘油葡萄糖苷的制备，特别一种蔗糖磷酸化酶在制备2-O-α-D-甘油葡萄糖苷中的应用。(二)技术背景2-O-α-D-甘油葡萄糖苷(2-αGG)是由各种植物、藻类和异样细菌为适应盐胁迫和干旱等极端条件而产生的相容性溶质，2-αGG是甘油分子上的二号位羟基被葡萄糖基化的产物，即通过糖苷键将一个D-吡喃葡萄糖与甘油的二号位羟基偶联，其结构如图1所示，其化学名为α-D-吡喃葡萄糖基-α-(1-2,2)-丙三醇，是一种有强效保湿、抗衰老、舒缓、修复、细胞激活多功能的活性化妆品原料。2-αGG不仅适用于日常肌肤的护理，而且同样适用于抗疲劳、抗环境压力(如UV辐射、PM2.5缓解污染)、抗衰老、抗敏感性、抗湿疹性等方面；它同时还具有无致龋性，也可以作为一种无致龋性的甜味剂，添加到食品中；而且它还是一种大分子物质的稳定剂，可用于蛋白质药物等的长期保存；此外，研究发现还具有治疗过敏性呼吸系统疾病、保护眼角结膜、降低血糖和控制内脏脂肪积累等人体保健的功效。蔗糖磷酸化酶(Sucroseph本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蔗糖磷酸化酶在制备2-O-α-D-甘油葡萄糖苷中的应用，其特征在于所述蔗糖磷酸化酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2。/n

【技术特征摘要】
1.一种蔗糖磷酸化酶在制备2-O-α-D-甘油葡萄糖苷中的应用，其特征在于所述蔗糖磷酸化酶氨基酸序列为SEQIDNO.2。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述蔗糖磷酸化酶编码基因核苷酸序列为SEQIDNO.1所示。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：以含蔗糖磷酸化酶基因的工程菌经发酵培养获得的发酵液作为催化剂，以蔗糖作为糖基供体，以丙三醇作为糖基化受体，以pH为4.0-9.0的缓冲液为反应介质构成反应体系，在25-55℃、磁力搅拌条件下反应，反应完全后，获得含2-O-α-D-甘油葡萄糖苷的反应液，经分离纯化得到2-O-α-D-甘油葡萄糖苷。


4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述反应体系中，湿菌体含量为5-50g/L，蔗糖的终浓度为200-500g/L，丙三醇终浓度为20-300g/L。


5.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述缓冲液为pH8.0，50mM甘氨酸-氢氧化钠缓冲液。


6.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述反应条件为35-45℃，磁力搅拌，反应过程控制pH7.0-8.5之间，反应30-40h。


7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵液按如下方法制备：(1)将含蔗糖磷酸化酶基因的工程菌接种在含50mg/L卡那霉素的种子培养基中，30-37℃，100-250rpm培养至对数生长中期，获得种子液，所述种子培养基终浓度组成：蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、NaCl1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈小龙，甘恬，朱林江，陆跃乐，范永仙，陈翰驰，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33