一种制备N-乙酰氨基半乳糖转移酶的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及一种用于表达N‑乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达系统。本发明专利技术提供一种用于表达N‑乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达载体，所述表达载体中包括ppGalNAc‑T蛋白表达框和PDI蛋白表达框。本发明专利技术所提供的用于表达N‑乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达载体和原核表达系统使用共表达单一质粒及具有胞内氧化环境的宿主细胞、并通过常规的通用培养基进行表达，表达系统和操作方法均简单，一步表达、纯化，不需要重折叠等后续操作，且获得ppGalNAc‑T2酶的产量优于人源HEK 293T细胞系表达纯化的ppGalNAc‑T2酶。

A method of preparing N-acetylgalactosamine transferase

【技术实现步骤摘要】
一种制备N-乙酰氨基半乳糖转移酶的方法
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种用于表达N-乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达系统，并进一步提供了通过上述用于表达N-乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达系统制备N-乙酰氨基半乳糖转移酶的方法。
技术介绍
糖基化修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰形式，不仅参与蛋白质剪切加工、细胞增殖分化、免疫炎症等过程，还对重组蛋白类药物具有重要影响。约70％重组蛋白类药物在天然状态下带有糖基化修饰，其中N-糖链和O-糖链在蛋白质药物中最为常见。缺乏糖基化修饰会导致这些蛋白药物在体内的半衰期变短或药效降低，例如缺少N-糖基化修饰的人干扰素γ会被蛋白酶降解，从而导致其半衰期缩短；促排卵药物Corifollitropinalfa(FSH)缺乏N-糖基化修饰会导致其热变性，效价降低；母乳蛋白中的O-糖基化修饰对母乳喂养婴儿的健康有益，这种人乳寡糖(HMOs)不仅可以为大脑提供营养，还可以调节肠道微生物，诱导免疫细胞应答。目前糖链合成共存在三种方法：1、从天然产物中分离纯化；2、使用化学合成法合成；3、使用糖基转移酶催化合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于表达N-乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达载体，所述表达载体中包括ppGalNAc-T蛋白表达框和PDI蛋白表达框。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于表达N-乙酰氨基半乳糖转移酶的原核表达载体，所述表达载体中包括ppGalNAc-T蛋白表达框和PDI蛋白表达框。


2.如权利要求1所述的原核表达载体，其特征在于，所述ppGalNAc-T蛋白是人源的；
和/或，所述ppGalNAc-T蛋白选自ppGalNAc-T1蛋白、ppGalNAc-T2蛋白、ppGalNAc-T3蛋白、ppGalNAc-T4蛋白、ppGalNAc-T5蛋白、ppGalNAc-T6蛋白、ppGalNAc-T7蛋白、ppGalNAc-T8蛋白、ppGalNAc-T9蛋白、ppGalNAc-T10蛋白、ppGalNAc-T11蛋白、ppGalNAc-T12蛋白、ppGalNAc-T13蛋白、ppGalNAc-T14蛋白、ppGalNAc-T15蛋白、ppGalNAc-T16蛋白、ppGalNAc-T17蛋白、ppGalNAc-T18蛋白、ppGalNAc-T19蛋白、或ppGalNAc-T20蛋白；
和/或，所述ppGalNAc-T蛋白的氨基酸序列包括如SEQIDNO:2所示序列。


3.如权利要求1所述的原核表达载体，其特征在于，所述PDI蛋白是人源的；
和/或，所述PDI蛋白的氨基酸序列包括如SEQIDNO:4所示序列。


4.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：张延，梁涛，许之珏，贾文娟，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31