转氨酶突变体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种转氨酶突变体及其构建方法和应用。本发明专利技术提供的转氨酶突变体包括在野生型转氨酶(WP_0532423951.1)氨基酸序列的第259位、第431位、第264位、第269位及第381位进行单点突变和组合突变的多种突变体，与野生型转氨酶(WP_0532423951.1)相比，该突变体在55℃下半衰期更长，最优组合突变体的半衰期大约是野生型转氨酶(WP_0532423951.1)的5倍，热稳定性更好，适于在较高的温度下催化合成手性胺。通过本发明专利技术所提供的构建方法得到的转氨酶突变体在较高的温度下催化合成手性胺时表现出优良的立体选择性和催化活性，具有较好的应用前景。

Transaminase mutant and its construction and Application

【技术实现步骤摘要】
转氨酶突变体及其构建方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种转氨酶突变体及其构建方法和应用。
技术介绍
手性胺广泛存在于自然界中，是合成天然产物和手性药物的重要中间体，对手性胺的不对称合成进行深层次研究具有较大的经济效益和应用价值。以糖尿病为例，抗糖尿病的口服药Januvia的主要成分西他列汀为R-型胺，在合成西他列汀工艺中，利用转氨酶催化氨基转移反应生成西他列汀关键中间体的过程是可逆的，通过改变催化反应条件促使氨基和酮基之间的反应平衡向手性胺生成方向移动可提高手性胺合成效率，其理论收率可达100％。催化手性胺生成的关键酶之一为转氨酶(Transaminase，TA，EC2.6.1.X)，又称氨基转移酶(Aminotransferase)，主要用于催化氨基和酮基之间的氨基转移。按照底物或产物的不同，转氨酶可分为α-转氨酶和ω-转氨酶，其中α-转氨酶的底物或产物只包括α-氨基酸，而ω-转氨酶的底物和产物包括酮酸、醛和酮，并具有高立体选择性等特点，使得ω-转氨酶在药物合成领域中应用更广泛。在已报道的转氨酶研究中，对于利用蛋白质工本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体为如下(a1)或(a2)：/n(a1)将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸且与SEQID NO.2所示的蛋白具有相同功能的衍生蛋白；/n(a2)通过一个或多个氨基酸残基取代SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的一个或多个位置且与SEQ ID NO.2所示的蛋白表现出至少92％同源性的衍生蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体为如下(a1)或(a2)：
(a1)将SEQIDNO.2所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸且与SEQIDNO.2所示的蛋白具有相同功能的衍生蛋白；
(a2)通过一个或多个氨基酸残基取代SEQIDNO.2所示的氨基酸序列的一个或多个位置且与SEQIDNO.2所示的蛋白表现出至少92％同源性的衍生蛋白。


2.根据权利要求1所述的转氨酶突变体，其特征在于，SEQIDNO.2所示的氨基酸序列的突变位点包括以下至少一个：第259位、第431位、第264位、第269位以及第381位。


3.根据权利要求2所述的转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体包括在SEQIDNO.2所示的氨基酸序列上A259F、G431T、E264A、A269E、S381E中任一单点突变位点的单点突变体。


4.根据权利要求3所述的转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体包括在SEQIDNO.2所示的氨基酸序列上G431T/E264A、G431T/A269E以及A259F/G4...

【专利技术属性】
技术研发人员：马富强，张艺凡，郭天杰，杨广宇，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32