【技术实现步骤摘要】
借助于茎环反向多核苷酸的直接RNA纳米孔测序
本专利技术涉及表征目标RNA多核苷酸(靶RNA多核苷酸)的方法，其包括：(i)提供RNA多核苷酸；(ii)通过使包含3'末端随机多聚体节段并且具有茎环形式的多核苷酸退火和连接来修饰所述RNA多核苷酸；(iii)任选地进行所述RNA多核苷酸的反转录；(iv)切割所述退火的多核苷酸的茎环节段以产生3'A悬突(悬突部分、悬端，overhang)；(v)将与RNA移位酶关联(结合，associate)的接头(adaptor)多核苷酸复合物和至少一种胆固醇系连节段(cholesteroltethersegment)连接至步骤(iv)中所获得的多核苷酸；(vi)将步骤(v)中所获得的修饰的RNA多核苷酸与跨膜孔接触从而使得所述RNA移位酶控制所述RNA多核苷酸通过所述跨膜孔移动并且所述胆固醇系连将所述RNA多核苷酸锚定在所述跨膜孔的附近；和(vii)在所述RNA多核苷酸通过所述跨膜孔的移动期间，进行一次或多次测量，其中所述测量指示所述RNA多核苷酸的一种或多种特征，借此表征所述目标RNA多核苷酸。还提供了用于表...
【技术保护点】
1.一种表征目标RNA多核苷酸的方法，包括：/n(i)提供RNA多核苷酸；/n(ii)通过退火并连接包含3'末端随机多聚体节段且具有茎环形式的多核苷酸来修饰所述RNA多核苷酸；/n(iii)任选地进行所述RNA多核苷酸的反转录；/n(iv)切割经退火的所述多核苷酸的茎环节段以产生3'A悬突；/n(v)将与RNA移位酶关联的接头多核苷酸复合物和至少一种胆固醇系连节段连接至步骤(iv)中获得的所述多核苷酸；/n(vi)将步骤(v)中获得的经修饰的所述RNA多核苷酸与跨膜孔接触，使得所述RNA移位酶控制所述RNA多核苷酸通过所述跨膜孔移动，且所述胆固醇系连将所述RNA多核苷酸锚定...
【技术特征摘要】
20181108 EP 18205148.21.一种表征目标RNA多核苷酸的方法，包括：
(i)提供RNA多核苷酸；
(ii)通过退火并连接包含3'末端随机多聚体节段且具有茎环形式的多核苷酸来修饰所述RNA多核苷酸；
(iii)任选地进行所述RNA多核苷酸的反转录；
(iv)切割经退火的所述多核苷酸的茎环节段以产生3'A悬突；
(v)将与RNA移位酶关联的接头多核苷酸复合物和至少一种胆固醇系连节段连接至步骤(iv)中获得的所述多核苷酸；
(vi)将步骤(v)中获得的经修饰的所述RNA多核苷酸与跨膜孔接触，使得所述RNA移位酶控制所述RNA多核苷酸通过所述跨膜孔移动，且所述胆固醇系连将所述RNA多核苷酸锚定在所述跨膜孔的附近；以及
(vii)在所述RNA多核苷酸通过所述跨膜孔移动期间，进行一次或多次测量，其中所述测量指示所述RNA多核苷酸的一种或多种特征，借此表征所述目标RNA多核苷酸。
2.一种制备用于跨膜测序的目标RNA多核苷酸的方法，包括：
(i)提供RNA多核苷酸；
(ii)通过退火并连接包含3'末端随机多聚体节段且具有茎环形式的多核苷酸来修饰所述RNA多核苷酸；
(iii)任选地进行所述RNA多核苷酸的反转录；
(iv)切割经退火的所述多核苷酸的茎环节段以产生3'A悬突；以及
(v)将与RNA移位酶关联的接头多核苷酸复合物和至少一种胆固醇系连节段连接至步骤(iv)中获得的所述多核苷酸。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，包含3'末端随机多聚体节段且具有茎环形式的所述多核苷酸是包含一个或多个非DNA核苷酸的DNA多核苷酸。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，包含3'末端随机多聚体节段且具有茎环形式的所述多核苷酸包含一个或多个5-甲基-isoC-isoG碱基对。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，至少在茎环多核苷酸的每个第4、第5或第6位置处提供所述5-甲基-isoC-isoG碱基对。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，所述随机多聚体节段是随机六聚体、随机七聚体、随机八聚体、随机九聚体或随机十聚体节段，优选随机六聚体节段。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，包含3'末端随机多聚体节段且具有茎环形式的所述多核苷酸包含序列5'-ACAGT-3'或5'...
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