一种内皮化生物心脏瓣膜及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种内皮化生物材料及其制备方法，制备方法为：先扩增含有VEGF的质粒；然后提取VEGF质粒的DNA；再将提取的质粒DNA转染内皮细胞；然后将转染后的细胞与凝胶基质混合，并用混合物包覆生物材料；随后加入内皮细胞悬液，于37℃下培养20～26h，再用多聚甲醛固定，得内皮化生物心脏瓣膜。本发明专利技术提供的方法通过将包裹VEGF质粒DNA的水凝胶制作成心脏瓣膜材料，能够提升生物材料的内皮化，进而减少钙化，心脏瓣膜的使用寿命延长。

An endothelial biological heart valve and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种内皮化生物心脏瓣膜及其制备方法
本专利技术属于生物医学材料
，具体涉及一种内皮化生物材料及其制备方法。
技术介绍
目前临床上使用的生物瓣膜通常是采用戊二醛交联的猪或牛的心包膜制备而成。但是戊二醛交联的生物瓣膜仍然存在钙化的问题。生物瓣膜的钙化引发的重要原因之一是无法内皮化。在人体正常工作的心脏瓣膜上，内皮细胞能够预防凝血、减少钙化。由于戊二醛具有很大的细胞毒性，戊二醛交联的生物瓣膜不利于内皮细胞的生长和增殖，导致其无法内皮化。小干扰RNA被用作特定序列的基因沉默因子，其主要作用于引起疾病蛋白质的信使RNA。此外，质粒DNAs(pDNA)也是冠状动脉基因治疗的有吸引力的选择。近年来，有一系列的研究表明，使用裸质粒DNA包裹或分散在生物可降解合成聚合物或天然高分子涂层支架上进行基因递送，例如包括聚乳酸(PLGA)和编码治疗基因的脂质(聚)复合涂层，治疗基因包括编码人类血管内皮生长因子的基因，内皮型一氧化氮合酶(eNOS)，诱导型一氧化氮合酶，血小板衍生生长因子(PGDF)和前列环素基因等等。内皮细胞生长因子(VEGF)能够本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种内皮化生物材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：扩增含有VEGF的质粒；/nS2：提取VEGF质粒的DNA；/nS3：将S2提取的质粒DNA转染内皮细胞；/nS4：将转染后的细胞与凝胶基质混合，并用混合物包覆生物材料；然后加入内皮细胞悬液，于37℃下培养20～26h，再用多聚甲醛固定，得内皮化生物心脏瓣膜。/n

【技术特征摘要】
1.一种内皮化生物材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：扩增含有VEGF的质粒；
S2：提取VEGF质粒的DNA；
S3：将S2提取的质粒DNA转染内皮细胞；
S4：将转染后的细胞与凝胶基质混合，并用混合物包覆生物材料；然后加入内皮细胞悬液，于37℃下培养20～26h，再用多聚甲醛固定，得内皮化生物心脏瓣膜。


2.根据权利要求1所述的内皮化生物心脏瓣膜的制备方法，其特征在于，S1中扩增含有VEGF的质粒包括以下步骤：将含有VEGF的质粒冻干粉重悬，并在冰上融化感受态细胞；然后将质粒与感受态细胞按1:45～55的体积比混合，再依次对混合物进行冰浴30min、42℃热激45s和冰浴2min处理，随后将混合物加入到不含抗生素的液体培养基中，于37℃下摇床培养60min，然后离心、丢弃上清并加入含抗生素的液体培养基，重悬之后滴在含抗生素的平板上涂布过夜培养。

【专利技术属性】
技术研发人员：雷洋，王云兵，邓璐，王刚，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51