一种游离DNA提取试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种游离DNA提取试剂盒，用于提取血浆中游离DNA，包含脂质体磁珠溶液、洗涤液I、洗涤液II、洗脱液以及磁分离架。脂质体磁珠溶液含有脂质体磁珠，该脂质体磁珠用于吸附血浆内游离DNA并使得DNA被分离。本发明专利技术提供的脂质体磁珠溶液中脂质体磁珠具有粒径小、带正电以及纯度高等特点，有利于在血浆中高效地与游离DNA充分结合，能最大程度地分离提取血浆中的游离DNA。

A free DNA Extraction Kit

【技术实现步骤摘要】
一种游离DNA提取试剂盒
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种游离DNA提取试剂盒。
技术介绍
液体活检(liquidbiopsy)，作为体外诊断的一个分支，是指通过检验血液或者其他体液如尿液、唾液、胸腔积液、脑脊液等，对癌症等疾病做出分析诊断。包括循环肿瘤细胞(CTC)、循环肿瘤DNA(ctDNA)、microRNA以及微泡。其中，ctDNA发展最为迅猛。目前液体活检主要应用领域是肿瘤的血液检测，即利用血液提示肿瘤发展进程及抗药性等信息，指导个体化精准治疗。1948年，首次在人类血液中发现了游离DNA(cellfreeDNA，cfDNA)。30年后，发现癌症病人中有更高含量的cfDNA。随后发现，ctDNA也在cfDNA中。cfDNA一部分来源于正常细胞凋亡的DNA，另一部分来源于ctDNA，而ctDNA在cfDNA所占的比例有很大变化，低至0.01％，高达超过60％，这和肿瘤的大小和进展有关。一般认为在血液循环系统中存在的cfDNA是由癌细胞的凋亡和坏死后释放到其周围微环境，同时自身的分泌细胞代谢也可能是一种潜cfDNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种游离DNA提取试剂盒，其特征在于，包括：/n脂质体磁珠溶液，该脂质体磁珠溶液包含用于吸附血浆内游离DNA使DNA被分离的脂质体磁珠，该脂质体磁珠的制备方法包括以下步骤：/n步骤1，将含有X mg裸磁球的裸磁球溶液与二氯甲烷溶液溶液混合得到第一液体，将含有0.02X mg～0.15X mg胆固醇的胆固醇/二氯甲烷溶液、含有0.05X mg～0.2X mg二油酰基卵磷脂的二油酰基卵磷脂/二氯甲烷溶液、含有0.05X mg～0.2X mg磷脂聚乙二醇马来酰亚胺的磷脂聚乙二醇马来酰亚胺/二氯甲烷溶液、含有0.05X mg～0.2X mg(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺的(2,3-二油酰基-丙...

【技术特征摘要】
1.一种游离DNA提取试剂盒，其特征在于，包括：
脂质体磁珠溶液，该脂质体磁珠溶液包含用于吸附血浆内游离DNA使DNA被分离的脂质体磁珠，该脂质体磁珠的制备方法包括以下步骤：
步骤1，将含有Xmg裸磁球的裸磁球溶液与二氯甲烷溶液溶液混合得到第一液体，将含有0.02Xmg～0.15Xmg胆固醇的胆固醇/二氯甲烷溶液、含有0.05Xmg～0.2Xmg二油酰基卵磷脂的二油酰基卵磷脂/二氯甲烷溶液、含有0.05Xmg～0.2Xmg磷脂聚乙二醇马来酰亚胺的磷脂聚乙二醇马来酰亚胺/二氯甲烷溶液、含有0.05Xmg～0.2Xmg(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺的(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺/二氯甲烷溶液进行混合，得到第二液体，按所述第一液体:所述第二液体＝1:1～1:5的体积比列，将所述第一液体加入到所述第二液体中并超声混匀后得到第三液体；
步骤2，分别将0.05Xmg～0.1Xmg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液、0.05Xmg～0.1Xmg的N-羟基丁二酰亚胺溶液加入到所述第三液体中并超声混匀，得到初乳；
步骤3，将0.05Xmg～0.1Xmg的聚乙烯吡咯烷酮溶液加入所述初乳中并混匀，形成复乳；
步骤4，去除所述复乳中的二氯甲烷，得到第四液体；以及
步骤5，将所述第四液体在透析袋中透析第一时间，即获得含有所述脂质体磁珠的悬浮液。


2.根据权利要求1所述的游离DNA提取试剂盒，其特征在于：
其中，在所述脂质体磁珠溶液中，
所述脂质体磁珠浓度为10～50mg/ml。


3.根据权利要求1所述的游离DNA提取试剂盒，其特征在于：
其中，所述脂质体磁珠溶液的pH为6.5～6.8，
所述脂质体磁珠溶液还含有3.8M盐酸胍、1MNaCl、1％Tritonx-100、0.5％SDS、10mMTris以及1mMEDTA。


4.根据权利要求1所述的游离DNA提取试剂盒，其特征在于：
其中，所述透析袋截留分子量为8000kD～12000kD，
所述第一时间为24h～72h。

【专利技术属性】
技术研发人员：梁晓飞，杜士彬，周雨，
申请(专利权)人：举康上海生物科技有限公司，湖州举康医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31