【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于分离和富集生物流体来源的细胞外囊泡的方法及其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年7月12日提交的美国临时申请号62/531,845和2018年5月31日提交的美国临时申请号62/678,853的优先权和权益，所述申请以其整体通过引用并入本文。背景细胞外囊泡(EV)，例如外排体和其他微囊泡，是由细胞释放至细胞外环境中的小的脂质双层包封的微粒。细胞外囊泡的直径大小范围通常为30nm至10微米。EV从大多数(如果不是全部)细胞类型分泌，并且存在于体液(包括血浆、血清、尿液和脑脊液)中。EV充当天然载体，用于在细胞之间递送大分子，包括蛋白、核酸(诸如DNA和RNA)、生物活性脂质和碳水化合物。已显示EV信号传导在各种各样的生理和病理病况(包括致癌性疾病、神经退行性疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病和代谢病症)中发挥重要作用。EV表面含有从起源的细胞的表面继承的标志物(蛋白/碳水化合物)，允许对细胞和组织特异性EV进行分类和靶向。EV货物(包括但不限于蛋白和RNA)取决于其起源细胞，供体病理生理状态，细胞状况、诸如氧化应激或...
【技术保护点】
1.方法，其包括：/na. 在足以在官能化的捕获表面和至少一种细胞外囊泡(EV)细胞表面标志物之间形成复合物的条件下，使生物样品与所述官能化的捕获表面接触，其中所述捕获表面用对于至少一种细胞表面标志物特异性的试剂进行官能化；/nb. 将在所述官能化的捕获表面和所述至少一种细胞表面标志物之间形成的复合物与所述生物样品的未结合部分分离以获得捕获的复合物，和保留捕获的复合物；/nc. 洗涤在所述官能化的捕获表面和所述至少一种细胞表面标志物之间形成的捕获的复合物；/nd. 通过重复步骤b.-c.来富集所述生物样品内具有至少一种细胞表面标志物的EV的一个或多个亚群；和，/ne. 如果...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170712 US 62/531845;20180531 US 62/6788531.方法，其包括：
a.在足以在官能化的捕获表面和至少一种细胞外囊泡(EV)细胞表面标志物之间形成复合物的条件下，使生物样品与所述官能化的捕获表面接触，其中所述捕获表面用对于至少一种细胞表面标志物特异性的试剂进行官能化；
b.将在所述官能化的捕获表面和所述至少一种细胞表面标志物之间形成的复合物与所述生物样品的未结合部分分离以获得捕获的复合物，和保留捕获的复合物；
c.洗涤在所述官能化的捕获表面和所述至少一种细胞表面标志物之间形成的捕获的复合物；
d.通过重复步骤b.-c.来富集所述生物样品内具有至少一种细胞表面标志物的EV的一个或多个亚群；和，
e.如果使用多于一种细胞表面标志物，则通过依次或同时进行上述a.-d.步骤来分离和纯化具有至少一种靶标生物标志物的EV的一个或多个亚群。
2.权利要求1的方法，其中所述至少一种靶标生物标志物是核酸、蛋白、碳水化合物或脂质。
3.权利要求1-2中任一项的方法，其中所述至少一种细胞表面标志物存在于所述EV的表面上，或者其中所述生物标志物从所述EV内提取。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述对于至少一种细胞表面标志物特异性的试剂包括抗体或抗体的混合物。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其进一步包括定量EV的亚群中的至少一种靶标生物标志物的存在。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述至少一种靶标生物标志物的存在与从所述生物样品分离的亚群中的至少一个中的EV的数量直接相关。
7.权利要求6的方法，其中所述至少一种生物标志物的存在使用转录组测定、蛋白质组测定、定量PCR、纳米串测定或微阵列来测定。
8.权利要求1的方法，其进一步包括步骤f.，从分离和纯化的EV的亚群提取至少一种靶标生物标志物。
9.权利要求8的方法，其中所述至少一种靶标生物标志物选自具有或没有任何修饰的α-突触核蛋白、Tau、磷酸化Tau、SOD1、TDP43、感染性蛋白、HTT、SMA、淀粉样蛋白β、突触蛋白、簇蛋白和DRP1。
10.权利要求1-9中任一项的方法，其进一步包括以下步骤：
g.比较来自从受试者分离和纯化的EV的亚群的至少一种靶标生物标志物的水平与一种或多种预定义阈值；和，
h.如果所述至少一种生物标志物的水平超过或不同于一种或多种预定义阈值，则将所述受试者鉴定为具有疾病或病况；和/或鉴定所述受试者中的疾病进展的风险；和/或将所述受试者鉴定为适合于疗法。
11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述细胞表面标志物是GluR2。
12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述对于至少一种细胞表面标志物特异性的试剂包括一种或多种维生素、蛋白、配体、凝集素、肽、寡核苷酸、适体或其任何组合。
13.权利要求1-7或10-12中任一项的方法，其中富集过程包括保留在所述试剂和来自所述生物样品的至少一种细胞表面标志物之间形成的复合物。
14.权利要求1-7或10-13中任一项的方法，其中所述生物样品选自血液、血浆、血清、尿液、痰液、脊髓液、脑脊液、胸腔积液、乳头抽吸液、淋巴液、呼吸道、肠道和泌尿生殖道的流体、泪液、唾液、母乳、来自淋巴系统的流体、精液、脑脊液、器官内系统流体、腹水、肿瘤囊肿液、羊水及其组合。
15.权利要求1-7或10-14的方法，其中所述生物样品是血浆或血清。
16.权利要求1-7或10-15中任一项的方法，其中纯化EV的亚群的步骤包括以完整形式洗脱所述EV。
17.权利要求1-7或10-16中任一项的方法，其中纯化EV的亚群的步骤包括裂解所述EV，并从裂解的EV提取至少一种生物标志物。
18.权利要求17的方法，其中提取的生物标志物包含RNA或RNA种类。
19.权利要求1-7或10-18中任一项的方法，其中所述官能化的捕获表面包括珠粒的群体或珠粒的群体的混合物。
20.权利要求19的方法，其中所述珠粒是磁性珠粒。
21.权利要求1-7或10-20中任一项的方法，其中所述官能化的捕获表面包括一个或多个膜、芯片、纳米颗粒或纳米颗粒的群体、纳米管或纳米管的群体、载片、色谱介质或其任何组合。
22.权利要求1-7或10-21中任一项的方法，其中所述对于至少一种细胞表面标志物特异性的试剂包括抗体或抗体的混合物。
23.权利要求1-7或10-22中任一项的方法，其中所述对于至少一种细胞表面标志物特异性的试剂对于选自以下的细胞类型是特异性的：免疫细胞、T-细胞、B-细胞、NK细胞、单核细胞、内皮细胞、上皮细胞、血小板、红细胞、网织红细胞、神经元细胞、癌细胞、胚胎细胞或组织、星形胶质细胞、少突胶质细胞或其任何组合。
24.权利要求1-23中任一项的方法，其中所述生物样品来自神经退行性疾病的患者，所述神经退行性疾病来自由以下组成的列表：帕金森氏病(PD)、阿尔茨海默氏病(AD)、血管疾病性痴呆、额颞痴呆(FTD...
【专利技术属性】
技术研发人员：M舍尔，E埃坦，C科蒂基亚，J斯科格，R基钦，S余，
申请(专利权)人：外来体诊断公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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