【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多拷贝基因蛋白表达系统专利技术概要本专利技术属于生物
，尤其是属于重组蛋白表达领域。本专利技术聚焦于重组蛋白表达过程中普遍遇到的两个问题，低量的蛋白表达、和用于重组蛋白表达的细胞系的遗传不稳定性。本专利技术的基本原理是，将几个表达盒引入细胞中，所述表达盒全部编码相同的成熟目的重组蛋白，但所述表达盒具有不同的核苷酸序列。表达盒是指，至少包含启动子序列、起始密码子、编码旨在重组表达的蛋白(POI)的多核苷酸序列，终止密码子和终止子的多核苷酸序列。专利
本专利技术属于生物
，尤其是属于重组蛋白表达领域。此外，本专利技术涉及经修饰以表达更高产量的重组蛋白(目的蛋白，POI)的细胞、以及具有较小的遗传不稳定性倾向的修饰细胞，其中所述遗传不稳定性是由在所述修饰细胞中引入的遗传物质的重排而导致的。在另一方面，本专利技术涉及用于产生所述修饰细胞的载体、表达盒、以及产生所述修饰细胞的方法、和使用所述修饰细胞、所述载体和所述表达盒来制造重组蛋白的方法。
技术介绍
重组蛋白表达通常具有两个主要目的：第一，获得高...
【技术保护点】
1.包含三个或更多个不同类型的表达盒的宿主细胞，每个表达盒编码具有相同成熟氨基酸序列的相同目的蛋白(POI)，并且每个类型的表达盒至少包含启动子序列、POI编码序列的多核苷酸序列和终止子序列，/n其中所述表达盒的不同之处在于它们包含/n(A)/n(Aa)不同的启动子序列，/n(Ab)由于使用简并遗传密码，编码相同的成熟POI氨基酸序列的不同核苷酸序列，/n和任选地/n(Ac)不同的终止子序列，和/或/n(Ad)如果存在，不同的信号序列，/n或其中所述表达盒的不同之处在于它们包含/n(B)/n(Ba)相同的启动子序列，/n(Bb)由于使用简并遗传密码，编码相同的成熟POI氨基...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170823 EP 17187552.91.包含三个或更多个不同类型的表达盒的宿主细胞，每个表达盒编码具有相同成熟氨基酸序列的相同目的蛋白(POI)，并且每个类型的表达盒至少包含启动子序列、POI编码序列的多核苷酸序列和终止子序列，
其中所述表达盒的不同之处在于它们包含
(A)
(Aa)不同的启动子序列，
(Ab)由于使用简并遗传密码，编码相同的成熟POI氨基酸序列的不同核苷酸序列，
和任选地
(Ac)不同的终止子序列，和/或
(Ad)如果存在，不同的信号序列，
或其中所述表达盒的不同之处在于它们包含
(B)
(Ba)相同的启动子序列，
(Bb)由于使用简并遗传密码，编码相同的成熟POI氨基酸序列的不同核苷酸序列，
和任选地
(Bc)不同的终止子序列，和/或
(Bd)如果存在，不同的信号序列。
2.根据权利要求1的宿主细胞，其中至少一个表达盒编码两个或更多个具有相同成熟氨基酸序列的POI，其中IRES序列分别位于所述两个或更多个POI的编码序列之间。
3.根据权利要求1或2任一项的宿主细胞，其中在权利要求1的可选项(A)的点(Ab)中，所述POI的编码序列的不同核苷酸序列由简并遗传密码编码，所述简并遗传密码导致的核苷酸序列差异是，为了获得所述特定POI的相同成熟氨基酸序列，就该特定的POI编码核苷酸序列而言可能的最大理论核苷酸序列差异的至少50％，
或其中在可选项(B)的点(Bb)中，所述POI的编码序列的不同核苷酸序列由简并遗传密码编码，所述简并遗传密码导致的核苷酸序列差异是，为了获得所述特定POI的相同成熟氨基酸序列，就该特定的POI编码核苷酸序列而言可能的最大理论核苷酸序列差异的至少50％。
4.根据权利要求1至3任一项的宿主细胞，其中在可选项(A)中，所述启动子、所述终止子和/或如果存在的话所述信号序列，以及在可选项(B)中，所述终止子序列和/或如果存在的话所述信号序列，就其核苷酸序列而言，在所用的不同表达盒之间分别具有至少20％，优选至少30％，更优选至少40％，最优选至少50％的差异。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·阿什穆勒，N·兰平，M·福格尔桑，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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