【技术实现步骤摘要】
一种宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法。
技术介绍
宏基因组测序鉴定相较于传统的培养鉴定方法，具有鉴定周期短、对操作及鉴定人员的技术水平要求低等优势，被越来越多地应用于微生物鉴定中，特别是不明原因病原微生物的鉴定。目前主流的宏基因组测序方法主要是高通量测序方法，包括二代测序和三代测序。但在大多数的临床样本中，往往存在大量宿主DNA背景，病原体DNA只占很少的一部分。在人类微生物组计划针对不同样品类型进行的全宏基因组鸟枪法测序研究中发现，测序数据中多达99％的测序读段对应于人类基因组，因此至多只有1％的测序数据能够用于微生物物种和耐药基因鉴定。如何解决去宿主化提取是临床病原微生物宏基因组测序的关键之一。在核酸提取环节，怎样做到有效去除宿主核酸，有效富集细菌、真菌等所有病原体核酸，最大限度控制混合样品中病原微生物群落的组分检测偏差，进而提高病原体宏基因组学高通量测序技术的准确度和灵敏度，是临床宏基因组测序难点之一。现有的去除宿主核酸的...
【技术保护点】
1.一种宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1.病原体富集：在1.5mL第一离心管中加入样本，于室温条件下离心5-10min，除去上清液；/nS2.宿主细胞裂解：在第一离心管中加入200-1000μL裂解缓冲液Buffer G1，在20-40℃条件下孵育10-30min；/nS3.宿主DNA去除：第一离心管于室温条件下离心2-5min，除去上清液，向第一离心管中再次加入200-500μL裂解缓冲液Buffer G1和1-3μL全能核酸酶，30-40℃孵育10-30min，10000-12000rpm离心2-5min，除去上清液，加入50...
【技术特征摘要】
1.一种宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.病原体富集：在1.5mL第一离心管中加入样本，于室温条件下离心5-10min，除去上清液；
S2.宿主细胞裂解：在第一离心管中加入200-1000μL裂解缓冲液BufferG1，在20-40℃条件下孵育10-30min；
S3.宿主DNA去除：第一离心管于室温条件下离心2-5min，除去上清液，向第一离心管中再次加入200-500μL裂解缓冲液BufferG1和1-3μL全能核酸酶，30-40℃孵育10-30min，10000-12000rpm离心2-5min，除去上清液，加入500-1000μLBufferG1清洗沉淀，10000-12000rpm离心2-5min，除去上清液，重复清洗步骤一次；
S4.微生物菌体破壁：加入100-300μL溶菌酶重悬沉淀后将重悬液转移到装有玻璃珠的裂解管中，将裂解管置于30-40℃孵育10-30min，涡旋混匀处理5-10min；
S5.微生物裂解和核酸提取：将样品瞬时离心后加入10-40μL蛋白酶K和200-500μL裂解缓冲液BufferGL，涡旋混匀后于50-65℃孵育10-30min，12000rpm离心1min，吸取上清至第二离心管中，向第二离心管中加入200μL无水乙醇，涡旋混匀后将溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，12000rpm离心1min，除去收集管中的液体，将吸附柱重新放回至该收集管中，向吸附柱中加入500μL清洗液BufferGW1，12000rpm离心1min，除去收集管中的液体，将吸附柱重新放回至该收集管中，向吸附柱中加入500μL清洗液Bu...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘淑君，王春香，
申请(专利权)人：泰州健为医学检验实验有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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