一种卵巢癌循环肿瘤细胞检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种卵巢癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，用于检测已经脱离卵巢进入外周血中的循环肿瘤细胞，包括转铁蛋白免疫磁球、染色剂、引物组、分离膜、高保真Taq酶、2×Blood Direct PCR Master Mix、ddH

A test kit for circulating tumor cells in ovarian cancer

【技术实现步骤摘要】
一种卵巢癌循环肿瘤细胞检测试剂盒
本专利技术涉及生物技术与生物医学领域，具体涉及一种卵巢癌循环肿瘤细胞检测试剂盒。
技术介绍
研究统计数据表明，卵巢癌的发病率仅次于宫颈癌和乳腺癌，但其死亡率却是妇科肿瘤中最高的。其原因主要是卵巢癌缺乏有效的早期诊断方法，而且早期临床体征不明显，70％的患者确诊时已经到了肿瘤晚期。另一方面，治疗效果仍然不太理想，5年生存期没有有效提高。循环肿瘤细胞(CirculatingTumorCell，CTC)是指脱离肿瘤并进入血液循环的癌细胞，这种远端转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因，近年来其在恶性肿瘤转移过程中的作用日益受到关注。CTC的检测可有效地应用于肿瘤的体外早期诊断，具有重要临床意义和广阔应用前景。Veridex公司的CirculatingTumorCell检测试剂盒应用于临床转移性乳腺癌患者的诊断与治疗评价。该技术通过偶联细胞上皮粘附蛋白(epiithlialcelladhesionmolecule-EpCAM)抗体的磁珠捕获细胞，并利用角蛋白和CD45荧光抗体对细胞进行鉴定。然而由于卵巢癌特殊本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卵巢癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，用于检测已经脱离卵巢进入外周血中的循环肿瘤细胞，其特征在于，包括：/n转铁蛋白免疫磁球，用于捕获所述循环肿瘤细胞，其制备过程如下：/n第一步骤，按羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐：胆固醇＝1：0.5～1：5的质量比，将羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐与胆固醇混合并加入到三口烧瓶中；/n第二步骤，按去乙醇后的磁珠溶液：CH

【技术特征摘要】
1.一种卵巢癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，用于检测已经脱离卵巢进入外周血中的循环肿瘤细胞，其特征在于，包括：
转铁蛋白免疫磁球，用于捕获所述循环肿瘤细胞，其制备过程如下：
第一步骤，按羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐：胆固醇＝1：0.5～1：5的质量比，将羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐与胆固醇混合并加入到三口烧瓶中；
第二步骤，按去乙醇后的磁珠溶液：CH2Cl2＝1：1～1：5的体积比，将去乙醇后的磁珠溶液溶解于CH2Cl2，获得第一溶液；
第三步骤，按所述第一溶液：第一步骤的混合物＝1：1～1：5的体积质量比，将所述第一溶液倒入第一步骤中的三口烧瓶里，获得第二溶液；
第四步骤，将所述第二溶液在冰浴下乳化2min～20min，并在乳化时把溶于双蒸水的环氧丙基十六叔胺转铁蛋白按体积质量比，磁珠溶液：环氧丙基十六叔胺转铁蛋白＝1：1～1：5，加入正在乳化的所述第二溶液中，乳化完成后得到第三溶液；
第五步骤，去除所述第三溶液中残留的CH2Cl2，得到第四溶液；
第六步骤，将所述第四溶液进行磁分离，获得所述转铁蛋白免疫磁球；
第七步骤，清洗所述转铁蛋白免疫磁球。


2.根据权利要求1所述的卵巢癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述环氧丙基十六叔胺转铁蛋白的制备过程如下：
步骤Ⅰ，按转铁蛋白：环氧丙基十六叔胺＝1：1～1：5的质量比，将转铁蛋白和环氧丙基十六叔胺共溶于pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中；
步骤II，将步骤Ⅰ中的溶液搅拌反应过夜；
步骤III，将过夜后的溶液用分子量为5000～20000道尔顿的透析袋透析6h～24h，透析过程中每间隔两个小时换一次pH＝7.4的磷酸盐缓冲液；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁晓飞，宋萍，
申请(专利权)人：举康上海生物科技有限公司，湖州举康医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31