使用包括硫代磷酸酯化的核苷酸的双链多联体DNA的体内RNA或蛋白质表达制造技术

提供了用于体内RNA或蛋白质表达的方法。该方法包括将双链多联体DNA引入真核细胞内，以生成所需RNA或蛋白质。双链多联体DNA包括多个串联重复序列，其中所述多个串联重复序列各自包含表达序列。双链多联体DNA包含一个或多个硫代磷酸酯化的核苷酸，其中所述双链多联体DNA中的硫代磷酸酯化的核苷酸与总核苷酸的比率为至少1：1600。还提供了包含外源的双链多联体DNA的真核细胞，所述双链多联体DNA包含多个串联重复序列。

In vivo RNA or protein expression using double stranded polyhedral DNA including thiophosphorylated nucleotides

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用包括硫代磷酸酯化的核苷酸的双链多联体DNA的体内RNA或蛋白质表达专利
本公开内容总体上涉及RNA或蛋白质表达系统，其涉及双链多联体DNA的体内转录和/或翻译。本公开内容特别涉及使用包括硫代磷酸酯化的核苷酸的双链多联体DNA的体内RNA或蛋白质表达。专利技术背景各种基于蛋白质和RNA的应用的增加已增加了对于RNA和蛋白质的大规模生产的需求。这些应用中的大多数，尤其是治疗应用，需要蛋白质/RNA满足在纯度、效力、功效和安全性方面的严格质量标准。经常采用重组蛋白生产来满足所需的大规模蛋白生产的期望。非常需要更高的生产效率和更低的成本，以使这些蛋白质/RNA产物在商业上可行。传统上，对于在哺乳动物细胞中的蛋白质的体内生产，使用质粒DNA的细胞转染已用作主要工具。由相应的DNA序列产生期望的蛋白质或RNA涉及大量真核细胞的使用，并且一般以大体积规模例如100L执行。对于体内蛋白质生产，可以生成稳定的细胞系，并且扩增至足够的数量，以生成所需的蛋白质产率。进一步地，在其中表达的蛋白质对宿主细胞是致死性的情况下，可以使用瞬时生产系统。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于体内RNA或蛋白质表达的方法，所述方法包括：/n将双链多联体DNA引入真核细胞内，以生成所需RNA或蛋白质，/n其中所述双链多联体DNA包含多个串联重复序列，并且其中所述多个串联重复序列各自包含表达序列，/n其中所述双链多联体DNA包含一个或多个硫代磷酸酯化的核苷酸；和/n其中所述双链多联体DNA中的硫代磷酸酯化的核苷酸与总核苷酸的比率为至少1：1600。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170918 US 15/7070741.一种用于体内RNA或蛋白质表达的方法，所述方法包括：
将双链多联体DNA引入真核细胞内，以生成所需RNA或蛋白质，
其中所述双链多联体DNA包含多个串联重复序列，并且其中所述多个串联重复序列各自包含表达序列，
其中所述双链多联体DNA包含一个或多个硫代磷酸酯化的核苷酸；和
其中所述双链多联体DNA中的硫代磷酸酯化的核苷酸与总核苷酸的比率为至少1：1600。


2.权利要求1的方法，其中所述双链多联体DNA是滚环扩增（RCA）产物DNA。


3.权利要求1或2的方法，其中所述双链多联体DNA中的硫代磷酸酯化的核苷酸与总核苷酸的比率在1：1600至125：1600的范围内。


4.权利要求1或2的方法，其中所述双链多联体DNA中的硫代磷酸酯化的核苷酸与总核苷酸的比率在50：1600至125：1600的范围内。


5.权利要求1或2的方法，其中所述双链多联体DNA中的硫代磷酸酯化的核苷酸与总核苷酸的比率在75：1600至125：1600的范围内。


6.权利要求1或2的方法，其中所述双链多联体DNA中的硫代磷酸酯化的核苷酸与总核苷酸的比率为125：1600。


7.上述权利要求中的一项或多项的方法，其中所述双链多联体DNA是未加工的或加工的RCA产物DNA。


8.上述权利要求中的一项或多项的方法，其中所述表达序列包含编码序列、非编码序列或其组合。


9.权利要求8的方法，其中所述编码序列包含启动子、开放读码框和任选地不依赖于帽的翻译元件（CITE）。


10.权利要求9的方法，其中所述不依赖于帽的翻译元件（CITE）包含内部核糖体进入位点（IRES）、翻译增强元件（TEE）或其组合。


11.权利要求9或10的方法，其中所述开放读码框包含密码子优化的序列用于增强翻译。


12.权利要求9、10或11的方法，其中所述开放读码框包含用于所需蛋白质的纯化的标签序列、衍生自IRES的用于增强核糖体识别的氨基末端肽融合序...

【专利技术属性】
技术研发人员：BM戴维斯，JR尼尔松，高伟，
申请(专利权)人：通用电气公司，
类型：发明
国别省市：美国;US