一种组织工程支架的脱细胞方法技术

本发明专利技术属于组织工程技术领域，尤其涉及一种脱细胞方法。为将待处理的生物材料放置于一容器内，然后使细胞洗脱液流经所述的容器，直至生物材料脱细胞结束。所述脱细胞方法对生物材料进行脱细胞，使生物材料能够被彻底处理，极大提高了脱细胞的效果，而且很好的保留生物材料的内在结构和力学特性。且本发明专利技术的方法可自动弃掉废液，自动清洗，大大减少细胞洗脱和清洗过程的操作步骤和用水量。

A method of decellularization of tissue engineering scaffolds

【技术实现步骤摘要】
一种组织工程支架的脱细胞方法
本专利技术属于组织工程
，尤其涉及一种生物材料的脱细胞方法。
技术介绍
ECM(ExtracellularMatrixc，细胞外基质)是各种生物材料的主要组织成份，为细胞的生存及活动提供适宜的场所，参与调节胚胎发育进程，决定细胞的粘附与迁移，在创伤修复和纤维化、细胞的生长、分化、代谢和肿瘤发生及转移中起重要作用。因此，ECM被广泛用于制作医用植入材料，以主动诱导和促进周围细胞的迁入、粘附、增殖和分化。生物材料除了含有ECM之外，还包括细胞成分，而异种生物材料的细胞成分容易引起免疫反应。所以将ECM作为植入材料使用时，还需要对异种生物材料进行脱细胞处理，以去除引起免疫反应的细胞成分，保留天然ECM结构和成分。因其无免疫原性，以及良好的生物相容性，成为组织工程支架材料的选择之一。脱细胞处理的真皮、心包、角膜、血管、膀胱、食管、小肠粘膜基质、骨、肝脏等作为相应组织的替代物已相继开发成功，显示出良好的应用前景。但目前采用的脱细胞处理方法为：添加化学试剂同时机械震荡。水浴摇床是脱细胞常采用的装置本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脱细胞的方法，其特征在于，待处理的生物材料放置于一容器内，然后使细胞洗脱液流经所述的容器，直至生物材料脱细胞结束。/n

【技术特征摘要】
20191231 CN 201911410568X1.一种脱细胞的方法，其特征在于，待处理的生物材料放置于一容器内，然后使细胞洗脱液流经所述的容器，直至生物材料脱细胞结束。


2.如权利要求1所述方法，其特征在于，通过负压使细胞洗脱液流经所述容器。


3.如权利要求1或2所述方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将生物材料用磷酸盐缓冲液清洗，然后用纱布进行包裹；
(2)再将步骤(1)中的生物材料进行冻融循环；
(3)将步骤(2)中的生物材料取出依次经细胞洗脱液：A液、B液、C液、D液、E液、F液、G液直至生物材料脱细胞结束；
用A液、B液、C液、D液洗脱时，所述生物材料固定于容器内进行；
所述A、D、G液为PBS；所述B液为TritonX-100溶液；所述C液为Tris缓冲液；所述E液为胰蛋白酶溶液；所述F液为脱氧核糖核酸酶I和核糖核酸酶A组成的核酸酶溶液；
优选地，所述B液为含0.1-1.5MKCl的TritonX-100溶液；所述TritonX-100的体积份数为0.05-2％；
所述C液为5-12mM的Tris缓冲液；
所述E液为0.1-3g/L胰蛋白酶溶液；
所述G液为500U/mL脱氧核糖核酸酶I和1mg/mL核糖核酸酶A组成的核酸酶溶液。


4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述清洗次数为1次以上，每次时间为10min以上；
优选地，所述清洗次...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕红斌，史强，胡建中，陈灿，赵春风，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43