PQQ-sGDH突变体、聚核苷酸及其在葡萄糖检测中的应用制造技术

本发明专利技术提供PQQ‑sGDH突变体、聚核苷酸及其在葡萄糖检测中的应用。具体的涉及一种可溶性吡咯喹啉醌依赖性葡萄糖脱氢酶(PQQ‑sGDH)突变体，其氨基酸位置对应于醋酸钙不动杆菌的野生型PQQ‑sGDH序列SEQ ID NO 1，所述PQQ‑sGDH突变体携带的突变包括以下一组突变中的一种：A194F、基于A194F的组合突变、基于Q192A的组合突变或基于Q192S的组合突变。这些PQQ‑sGDH突变体具有良好的葡萄糖底物特异性，对麦芽糖等糖的交叉反应性显著下降，适合用于对血液等样品中的葡萄糖进行光化学或电化学检测，也适合用于生化检测项目中对血液等样品中的葡萄糖进行干化学或湿化学检测，此外也可用于间接检测血液等样品中的核酸等分子。

PQQ sGDH mutant, polynucleotide and its application in glucose detection

【技术实现步骤摘要】
PQQ-sGDH突变体、聚核苷酸及其在葡萄糖检测中的应用
本专利技术涉及可溶性吡咯喹啉醌依赖性葡萄糖脱氢酶(PQQ-sGDH)突变体，具体而言就是以醋酸钙不动杆菌野生型PQQ-sGDH编码基因或其编码蛋白同源性在90％以上的DNA作为模板，利用PCR扩增进行定点突变，获得一系列具有良好的葡萄糖底物特异性和/或热稳定性且对麦芽糖的交叉反应性显著降低的PQQ-sGDH突变体。同时还提供编码所述PQQ-sGDH突变体的聚核苷酸、包含所述聚核苷酸的表达载体、包含所述表达载体的转化细胞以及利用所述PQQ-sGDH突变体检测样品中葡萄的方法、试剂和装置。
技术介绍
血糖浓度是糖尿病的一个非常重要的标志物。血糖浓度的测定在糖尿病的临床诊断和管理中极为重要。血糖的检测通常涉及酶催化下的葡萄糖氧化。根据酶的类型不同，可分为葡萄糖氧化酶(GOD)和葡萄糖脱氢酶(GDH)。在利用试纸条和血糖仪检测血糖时，GOD虽然具有较高的特异性，也不受到葡萄糖之外的糖类物质的干扰，但是极易受到血液中氧气的干扰而导致测定结果不准确。而GDH则不受到血液中氧气的干扰，因而得到广泛应用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种PQQ-sGDH突变体，所述PQQ-sGDH突变体源自于醋酸钙不动杆菌的野生型PQQ-sGDH氨基酸序列SEQ ID NO 1，所述PQQ-sGDH突变体的氨基酸位点编号对应于来自醋酸钙不动杆菌的野生型PQQ-sGDH氨基酸序列SEQ ID NO 1，其特征在于，所述PQQ-sGDH突变体携带的突变包括以下一组突变中的一种：(1)A194F；(2)选自Q192A或Q192S的一种突变，且所述PQQ-sGDH突变体还在99、170、193、270、318、365、366、367、372、402、452和455位点中一个位点发生替换突变。/n

【技术特征摘要】
1.一种PQQ-sGDH突变体，所述PQQ-sGDH突变体源自于醋酸钙不动杆菌的野生型PQQ-sGDH氨基酸序列SEQIDNO1，所述PQQ-sGDH突变体的氨基酸位点编号对应于来自醋酸钙不动杆菌的野生型PQQ-sGDH氨基酸序列SEQIDNO1，其特征在于，所述PQQ-sGDH突变体携带的突变包括以下一组突变中的一种：(1)A194F；(2)选自Q192A或Q192S的一种突变，且所述PQQ-sGDH突变体还在99、170、193、270、318、365、366、367、372、402、452和455位点中一个位点发生替换突变。


2.如权利要求1所述的PQQ-sGDH突变体，其特征在于，所述PQQ-sGDH突变体携带的突变包括以下一组突变中的一种：(1)A194F，且所述PQQ-sGDH突变体还在99、167、170、192、193、270、318、365、366、367、372、402、452和455位点中一个位点发生替换突变；(2)选自Q192A或Q192S中的一种突变，且所述PQQ-sGDH突变体还在99、167、170、193、270、318、365、366、367、372、402、452和455位点中两个位点发生替换突变。


3.如权利要求2所述的PQQ-sGDH突变体，其特征在于，所述PQQ-sGDH突变体携带的突变包括以下一组突变中的一种：(1)A194F，且所述PQQ-sGDH突变体还在99、167、170、192、193、270、318、365、366、367、372、402、452和455位点中两个位点发生替换突变；(2)Q192A+G99X+D167X+N452X；(3)Q192S+G99X+D167X+N452X；
(4)Q192A+G99X+S170X+Q270X+M365X+N452X+T372X；
(5)Q192A+G99X+S170X+Q270X+T366X+N452X+T372X；
(6)Q192A+G99X+S170X+Q270X+T366X+N452X+R402X；
(7)Q192A+G99X+S170X+Q270X+T366X+N452X+A318X；
(8)Q192A+G99X+S170X+Q270X+T366N+K455X+T372X；
(9)Q192S+G99X+S170X+Q270X+M365X+N452X+T372X；
(10)Q192S+G99X+S170X+Q270X+T366X+N452X+T372X；
(11)Q192S+G99X+S170X+Q270X+T366X+N452X+R402X；
(12)Q192S+G99X+S170X+Q270X+T366X+N452X+A318X；
(13)Q192S+G99X+S170X+Q270X+T366N+K455X+T372X。


4.如权利要求3所述的PQQ-sGDH突变体，其特征在于，所述PQQ-sGDH突变体携带的突变包括以下一组突变中的一种：(1)A194F+G99X+D167X+N452X；
(2)A194F+G99X+S170X+Q270X+T366N+N452X+T372X；
(3)A194F+G99X+S170X+Q270X+T366N+N452X+R402X；
(4)A194F+G99X+S170X+Q270X+T366N+N452X+A318X；
(5)A194F+G99X+S170X+Q270X+T366N+K455X+T372X；
(6)Q192A+G99X+D167X+N452...

【专利技术属性】
技术研发人员：王哲，毕鑫，邱日永，
申请(专利权)人：英科隆生物技术杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33